Приложение 4. Приготовление питательных сред

Приложение 4

Приготовление питательных сред

Среды для определения общей бактериальной обсемененности

1. Мясо-пептонный бульон. Освобожденное от костей, жира и сухожилий говяжье или конское мясо пропускают через мясорубку и заливают холодной водопроводной водой из расчета 1 л воды на 500 г мяса. Смесь водопроводной воды с фаршем медленно нагревают до кипения и кипятят в течение 1,5 часов. Небольшое количество (до 5 л) можно кипятить на открытом огне, часто помешивая, чтобы не произошло пригорания частичек мяса. Большое количество лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности мясной воды фильтруют сначала небольшое количество ее в пробирку через бумажный фильтр, если жидкость прозрачная, вода готова. Затем жидкость сцеживают через полотно, сюда же отжимают сок из вареного мяса, доливают кипяченой водой до первоначального объема, разливают в чистую посуду (колбы, бутылки) и стерилизуют 20 мин в автоклаве при температуре 120°С. Из полученной мясной воды готовят мясо-пептонный бульон. К 1 л мясной воды добавляют 10 г пептона, 5 г NaCl, устанавливают реакцию до рН 7,0-7,2, кипятят, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в чистую посуду и стерилизуют 20 мин в автоклаве при температуре 120°С. В случае выпадения осадка в мясо-пептонном бульоне его вторично фильтруют с последующей стерилизацией.

2. Мясо-пептонный агар. К мясо-пептонному бульону прибавляют 1,5% мелко нарезанного агара. Ставят на слабый огонь для растворения. Устанавливают реакцию до рН 7,0-7,2, кипятят 12-15 мин, фильтруют через вату, добавляют 1% глюкозы, разливают в колбы или пробирки, стерилизуют при температуре 120°С в течение 20 мин.

3. Сухой питательный агар выпускается Дагестанским научно-исследовательским институтом питательных сред.

Среды и реактивы для выявления бактерий кишечной группы

1. Концентрированная среда Эйкмана. В 1 л воды растворяют 100 г пептона, 50 г хлористого натрия, смесь нагревают до кипения, фильтруют, прибавляют 100 г глюкозы, устанавливают рН 7,4-7,6, разливают по 10 см3 в пробирки. Среду стерилизуют текучим паром 30 мин, считая с момента когда термометр покажет температуру 100°С. Стерилизация текучим паром должка производиться 3 дня подряд. В промежутках между стерилизациями среда должна находиться в помещении с температурой не ниже 16°С.

2. Среда Эндо. 100 см3 мясо-пептонного агара (рН 7,4) расплавляют на водяной бане, охлаждают до 70°С и прибавляют 1 г химически чистой лактозы, предварительно растворенной в небольшом количестве стерильной прокипяченной дистиллированной воде.

В отдельных пробирках приготовляют:

а) 2-3 см3 спиртового насыщенного раствора основного фуксина;

б) 10 см3 10%-ного водного раствора сернокислого натрия или 10 см3 20%-ного водного раствора кристаллического сернокислого натрия.

В стерильную пробирку отмеряют 1 см3 раствора фуксина и прибавляют раствор сернистокислого натрия до обесцвечивания фуксина. Приготовленную смесь вливают в растопленный агар, хорошо перемешивают (избегая образования пены) и разливают по чашкам.

Горячий агар имеет бледно-розовый цвет, при застывании становится бесцветным.

3. Сухая среда Эндо выпускается Дагестанским научно-исследовательским институтом питательных сред.

4. Среда Гисса. К 100 см3 дистиллированной воды добавляют 1 г пептона, 0,5 химически чистого хлористого натрия, 0,5 г углевода и 1 см3 индикатора Анредэ. Устанавливают рН 7,0. Среду разливают в пробирки по 5 см3 с поплавками и стерилизуют при 110°С 20 мин. Среда должна быть бесцветной или соломенно-желтого цвета без розового оттенка.

Можно использовать сухие среды Гисса: сухой препарат с индикатором ВР, глюкозой.

5. Индикатор Андредэ. К 100 см3 дистиллированной воды добавляют 0,5 г кислого фуксина и 16,4 см3 1%-ного раствора едкого натрия. Стерилизуют при 110-112°С в течение 5 мин и хранят в темноте.

6. Реактивы для окраски по Граму.

а) 1%-ный водный раствор метилового фиолетового

б) раствор йода по Бурке: 100 см3 дистиллированной воды, 2 г йодистого калия, 1 г йода.

в) 0,5%-ный водный раствор сафранина.

Среды для выявления плесеней

Агаризованное солодовое сусло. К 1000 см3 солодового сусла (7-8%) прибавляют 20 г расплавленного на водяной бане или в аппарате Коха агара. Смесь фильтруют через гигроскопическую вату или фильтровальную бумагу. Фильтрат разливают по стерильным колбам и стерилизуют 15 мин при температуре 115°С или 3 дня по 30 мин в аппарате Коха при температуре 100°С. Среду можно приготовить, используя вместо сусла солодовый экстракт.

Агаризованное солодовое сусло должно иметь рН 5,6-5,8.