Межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 20637-2018 "Смеси адаптированные для искусственного вскармливания детей раннего возраста и смеси для энтерального питания взрослых. Определение мио-инозита методом жидкостной хроматографии и импульсной амперометрии" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 августа 2018 г. N 479-ст)

Infant formula and adult nutritionals. Determination of myo-inositol by liquid chromatography and pulsed amperometry

МКС 67.050

Дата введения - 1 сентября 2019 г.
Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Подготовлен Акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (АО "ВНИИС") совместно с Федеральным государственным бюджетным учреждением науки Федеральным исследовательским центром питания, биотехнологии и безопасности пищи (ФГБУН "ФИЦ питания и биотехнологии") на основе собственного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 5

2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 июня 2018 г. N 53)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Молдова	MD	Институт стандартизации Молдовы
Россия	RU	Росстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 августа 2018 г. N 479-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 20637-2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 сентября 2019 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 20637:2015 "Смеси адаптированные для искусственного вскармливания детей раннего возраста и смеси для энтерального питания взрослых. Определение мио-инозита методом жидкостной хроматографии и импульсной амперометрии" ("lnfant formula and adult nutritionals - Determination of myo-inositol by liquid chromatography and pulsed amperometry", IDT)

6 Введен впервые

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на адаптированные смеси для искусственного вскармливания детей раннего возраста и смеси для энтерального питания для взрослых и устанавливает метод количественного определения мио-инозита* (свободного или суммы свободного и связанного в виде фосфатидилинозита) с применением жидкостной хроматографии и импульсной амперометрии с переключением колонок.

2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 смесь для энтерального питания для взрослых (adult nutritional): Полноценный в питательном отношении специализированный пищевой продукт, изготовленный из молока, сои, риса, молочной сыворотки, гидролизата белка, крахмала и аминокислот в любом сочетании, содержащий или не содержащий интактный белок, употребляемый в жидком виде; может являться единственным источником питания.

2.2 смесь адаптированная для искусственного вскармливания детей раннего возраста (infant formula): Заменитель грудного молока**, специально изготовленный для того, чтобы полностью удовлетворять потребности в питании младенцев первых месяцев жизни до введения соответствующего дополнительного питания.

Примечание - Определение термина 2.2***.

------------------------------

* Мио-инозит - циклический шестиатомный спирт, присутствует в природных объектах в свободном и связанном виде. В связанном виде входит в состав некоторых липидов, участвует в регуляции уровней внутриклеточного кальция, передаче сигнала от рецептора инсулина, расщеплении жиров и снижении уровня холестерина в крови, модуляции активности нейротрансмиттеров.

** Термин в соответствии с TP ТС 021/2011.

*** Определение термина 2.2 взято из Codex Standard 72-1981.

3 Сущность метода

Свободный мио-инозит и мио-инозит, связанный в виде фосфатидилинозита, экстрагируют с применением двух различных методик подготовки пробы. Свободный мио-инозит экстрагируют из проб разбавленной соляной кислотой и водой. Фосфатидилинозит экстрагируют из проб хлороформом и отделяют от других жиров на патронах для твердофазной экстракции с силикагелем. Далее мио-инозит отщепляют от глицеринового остатка с применением концентрированных уксусной и муравьиной кислот при 120 °С. Анализ проводят методом ионной хроматографии с применением комбинации двух различных ионообменных колонок и переключения колонок и с импульсным амперометрическим детектированием. Концентрацию мио-инозита рассчитывают по методу внешнего стандарта путем сопоставления с результатом анализа стандартного раствора известной концентрации.

4 Реактивы и материалы

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и дистиллированную или деминерализованную воду или аналогичную по чистоте воду.

4.1 Реактивы и растворы

4.1.1 Кислота уксусная ледяная.

4.1.2 Хлороформ высокой степени чистоты, для ВЭЖХ.

4.1.3 Диэтиловый эфир безводный, для ВЭЖХ.

4.1.4 Дриерит (осушающий агент, представляющий собой безводный сульфат кальция размером частиц 8 меш).

4.1.5 Гелий нулевой.

4.1.6 Гексан для ВЭЖХ.

4.1.7 Кислота соляная концентрированная массовой долей от 36 % до 38 %.

4.1.8 Кислота метафосфорная.

4.1.9 Метанол для ВЭЖХ.

4.1.10 Мио-инозит, первичный стандартный образец сравнения.

Хранить в эксикаторе. Для учета степени чистоты используют информацию, указанную в маркировке стандартного образца.

4.1.11 Натрий хлористый.

4.1.12 Натрия гидроксид, раствор массовой долей 50 % с низким содержанием карбонатов.

4.2 Приготовление растворов реактивов и стандартных растворов

4.2.1 Общие положения

Допускается готовить все растворы в большем или меньшем объеме при условии соблюдения правил надлежащей лабораторной практики. Растворы можно хранить в охлажденном виде или при комнатной температуре в плотно укупоренных контейнерах из инертных материалов, если не оговорено другое.

4.2.2 Основной стандартный раствор мио-инозита массовой концентрации около 2 000 мг/дм³

Берут точную навеску мио-инозита массой около 0,1000 г и количественно переносят ее в мерную колбу вместимостью 50 см³. Содержимое колбы разбавляют до метки водой и тщательно перемешивают. Раствор хранят в охлажденном виде. Срок годности - 3 мес.

4.2.3 Стандартный раствор мио-инозита промежуточной концентрации (около 200 мг/дм³)

Разбавляют 10,0 см³ основного стандартного раствора (см. 4.2.2) до 100 см³ водой, тщательно перемешивают. Полученный раствор утилизируют после использования.

4.2.4 Приготовление градуировочных стандартных растворов

4.2.4.1 Градуировочные стандартные растворы мио-инозита высокой концентрации (около 4 мг/дм³, 2 мг/дм³, 1 мг/дм³ и 0,5 мг/дм³)

В отдельных мерных колбах разбавляют 2,0 см³, 1,0 см³ и 0,5 см³ стандартного раствора мио-инозита промежуточной концентрации (см. 4.2.3) до 100 см³ водой. Разбавляют 0,5 см³ стандартного раствора мио-инозита промежуточной концентрации (см. 4.2.3) до 200 см³ водой. Срок годности растворов - две недели.

4.2.4.2 Градуировочные стандартные растворы мио-инозита низкой концентрации (около 0,2 мг/дм³ и 0,05 мг/дм³)

В отдельных мерных колбах разбавляют 4 см³ и 1 см³ градуировочного стандартного раствора мио-инозита массовой концентрации 0,5 мг/дм³ до 10 см³ водой. Срок годности растворов - две недели.

4.2.5 Соляная кислота, раствор массовой долей около 0,5 %

В мерной колбе вместимостью 250 см³ разбавляют 1,25 см³ концентрированной соляной кислоты в 200 см³ воды. Объем содержимого в колбе доводят до метки водой, полученный раствор тщательно перемешивают. Срок годности раствора - 6 мес.

4.2.6 Натрий хлористый, раствор концентрации 1 моль/дм³

В мерной колбе вместимостью 100 см³ растворяют 5,8 г хлорида натрия, объем раствора в колбе доводят до 100 см³ водой. Срок годности раствора - 1 мес.

4.2.7 Натрия гидроксид, раствор массовой концентрации 1,2 г/дм³ или 30 ммоль/дм³ (подвижная фаза для насоса 1)

Быстро взвешивают (4,8  0,1) г раствора гидроксида натрия массовой долей 50 % в мерной колбе вместимостью 2000 см³, содержащей около 1900 см³ воды. Важно, чтобы гидроксид натрия не поглощал диоксид углерода из воздуха. Содержимое колбы тщательно перемешивают путем взбалтывания. Полученный раствор разбавляют до метки водой и тщательно перемешивают. Срок годности раствора - 1 мес.

4.2.8 Натрия гидроксид, раствор массовой долей 40 г/дм³ или 1 ммоль/дм³ (подвижная фаза для насоса 2)

Быстро взвешивают (160  3) г раствора гидроксида натрия массовой долей 50 % в мерной колбе вместимостью 2000 см³, содержащей около 1900 см³ воды. Важно, чтобы гидроксид натрия не поглощал диоксид углерода из воздуха. Содержимое колбы тщательно перемешивают путем взбалтывания. Разбавляют до метки водой и тщательно перемешивают. Срок годности раствора - 1 мес.

4.2.9 Кислота метафосфорная, раствор массовой долей 6 %

Взвешивают 6,0 г метафосфорной кислоты в колбе вместимостью 100 см³. Содержимое колбы растворяют в воде и разбавляют до метки водой. Полученный раствор тщательно перемешивают. Хранят в охлажденном виде. Срок годности - одна неделя.

4.2.10 Растворы для экстракции фосфатидилинозита

Растворы готовят в день использования.

4.2.10.1 Хлороформ:метанол (2:1)

Смешивают 60 см³ хлороформа и 30 см³ метанола.

4.2.10.2 Гексан:диэтиловый эфир (80:20)

Смешивают 80 см³ гексана и 20 см³ диэтилового эфира.

4.2.10.3 Гексан:диэтиловый эфир (50:50)

Смешивают 50 см³ гексана и 50 см³ диэтилового эфира.

4.2.10.4 Метанол:хлороформ:вода (75:15:10)

Смешивают 75 см³ метанола, 15 см³ хлороформа и 10 см³ воды.

5 Лабораторное оборудование

5.1 Весы аналитические с наименьшим пределом взвешивания не выше 0,0001 г.

5.2 Центрифуга.

5.3 Эксикатор.

5.4 Устройство для выпаривания в токе азота с водяной баней или аналогичное устройство.

5.5 Термостат суховоздушный, пригодный для поддержания температуры 120 °С.

5.6 рН-метр в комплекте с буферными растворами с рН 4 и 7.

5.7 Мешалка магнитная многопозиционная в комплекте с перемешивающими элементами.

5.8 Вакуумный манифолд.

5.9 Миксер типа Вортекс.

5.10 Система для ВЭЖХ, изготовленная из деталей, устойчивых к коррозии, включающая в себя автосамплер, два изократических насоса, шестиканальный кран-переключатель потока, импульсный амперометрический детектор с золотым электродом и капиллярами из полиэфирэфиркетона (ПЭЭК) или политетрафторэтилена (ПТФЭ) внутренним диаметром от 0,18 до 0,25 мм (от 0,007 дюйма до 0,01 дюйма). Автосамплер должен обеспечивать объем инжекции 20 мм³.

5.11 Колонки аналитические анионообменные для ВЭЖХ* или аналогичные.

------------------------------

* Например, Dionex CarboPac MA1 (4 мм x 250 мм), каталожный номер 44066, МА1 (4 мм x 50 мм), каталожный номер 44067 и РА1 (4 мм x 50 мм), каталожный номер 43096. Это примеры подходящих изделий, доступных в коммерческой сети. Эта информация приведена для удобства пользователей этого стандарта и не является рекламной поддержкой указанных изделий. Допускается использовать аналогичные изделия, если может быть доказано, что они приводят к таким же результатам.

5.12 Стаканы лабораторные различной вместимости.

5.13 Пробирки центрифужные, вместимостью 50 см³ с крышками, покрытыми политетрафторэтиленом (ПТФЭ).

5.14 Фильтрующие насадки на шприц с полиамидным фильтром, 0,45 мкм и 0,2 мкм.

5.15 Бумага фильтровальная* или аналогичная.

5.16 Колбы конические вместимостью 50 см³ или 125 см³, или аналогичные.

5.17 Колбы мерные различной вместимости.

5.18 Воронки, пригодные для использования с фильтровальной бумагой.

5.19 Пипетки с одной отметкой различной вместимости.

5.20 Патроны для твердофазной экстракции (ТФЭ), заполненные силикагелем, массой сорбента 1 г**.

------------------------------

* Например, Whatman 2V. Это пример подходящего изделия, доступного в коммерческой сети. Эта информация приведена для удобства пользователей этого стандарта и не является рекламной поддержкой указанного изделия. Допускается использовать аналогичные изделия, если может быть доказано, что они приводят к таким же результатам.

** Например, J.T. Baker P/N 7086-07 (www.avantormaterials.com). Это пример подходящего изделия, доступного в коммерческой сети. Эта информация приведена для удобства пользователей этого стандарта и не является рекламной поддержкой указанного изделия. Допускается использовать аналогичные изделия, если может быть доказано, что они приводят к таким же результатам.

5.21 Шприцы одноразовые вместимостью 1 см³ и стеклянные газонепроницаемые вместимостью 25 см³ с иглами из нержавеющей стали длиной 100 мм (4 дюйма).

6 Процедура проведения испытания

6.1 Свободный мио-инозит

6.1.1 Подготовка проб

6.1.1.1 Общие положения

Подготовленные пробы можно хранить в закрытых емкостях до пяти дней при постоянной температуре от 1 °С до 8 °С. По истечении пяти дней пробу следует приготовить заново. Жидкие пробы тщательно перемешивают для обеспечения гомогенности. Если степень гомогенности порошкообразной пробы неизвестна, исходят из предположения, что проба не гомогенна и все операции с ней проводят, как с пробами сухих порошкообразных (негомогенных) смесей, как указано в 6.1.1.3.

6.1.1.2 Жидкие пробы

При испытании готовых к употреблению жидких проб точную навеску пробы массой от (0,5  0,05) г до (5  0,5) г отвешивают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и регистрируют массу навески с точностью до 0,0001 г.

6.1.1.3 Пробы сухих порошкообразных смесей

При испытании проб негомогенных сухих порошкообразных смесей пробу восстанавливают в соответствии с инструкцией на этикетке продукта. Отвешивают точную навеску восстановленного продукта массой от 0,5 до 5 г в мерную колбу вместимостью 100 см³. Регистрируют массу навески с точностью до 0,0001 г.

6.1.1.4 Пробы влажных порошкообразных смесей

При испытании проб влажных порошкообразных смесей точную навеску пробы массой от 0,25 г до 1,5 г отвешивают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и регистрируют массу навески с точностью до 0,0001 г. В мерную колбу добавляют от 10 см³ до 15 см³ воды и взбалтывают или перемешивают содержимое колбы до полного растворения порошка.

6.1.2 Экстракция

К каждой навеске пробы добавляют раствор соляной кислоты массовой долей 0,5 % (см. 4.2.5) в количестве, достаточном для доведения значения рН раствора пробы до (4,5  0,2) ед. рН, и перемешивают путем взбалтывания.

Растворы проб выдерживают для проведения реакции с раствором соляной кислоты массовой долей 0,5 % в течение не менее 2 мин, затем разбавляют до метки водой. Тщательно перемешивают. Растворы проб фильтруют через фильтровальную бумагу (см. 5.15) в коническую колбу вместимостью 125 см³ или другую подходящую стеклянную емкость.

Примечание - Фильтраты растворов некоторых проб получаются мутными, тем не менее, они пригодны для использования.

Аликвоту фильтрата раствора пробы фильтруют через шприцевой фильтр (см. 5.14) в виалу автосамплера.

6.2 Мио-инозит, связанный в виде фосфатидилинозита

6.2.1 Подготовка проб

6.2.1.1 Общие положения

Подготовленные пробы можно хранить в закрытых емкостях до пяти дней при постоянной температуре от 1 °С до 8 °С. По истечении пяти дней пробу следует приготовить заново. Жидкие пробы тщательно перемешивают для обеспечения гомогенности. Если степень гомогенности порошкообразной пробы неизвестна, исходят из предположения, что проба не гомогенна и все операции с ней проводят, как с пробами сухих порошкообразных (негомогенных) смесей, как указано в 6.2.1.3.

6.2.1.2 Жидкие пробы

При испытании проб готовых к употреблению жидких продуктов точную навеску пробы массой (4  0,4) г отвешивают в центрифужную пробирку вместимостью 50 см³ и регистрируют массу навески с точностью до 0,0001 г.

6.2.1.3 Пробы сухих порошкообразных смесей

При испытании проб негомогенных сухих порошкообразных смесей пробу восстанавливают в соответствии с инструкцией на этикетке продукта. Отвешивают точную навеску восстановленного продукта массой (4  0,4) г в центрифужную пробирку вместимостью 50 см³. Регистрируют массу навески с точностью до 0,0001 г.

6.2.1.4 Пробы влажных порошкообразных смесей

При испытании проб влажных порошкообразных смесей точную навеску пробы массой (1  0,1) г отвешивают в центрифужную пробирку вместимостью 50 см³ и регистрируют массу навески с точностью до 0,0001 г. В центрифужную пробирку добавляют 4 см³ воды, содержимое пробирки тщательно перемешивают.

6.2.2 Экстракция

В вытяжном шкафу к каждой пробе для анализа добавляют 10 см³ метанола и перемешивают в течение не менее 20 мин или обрабатывают на миксере типа Вортекс в течение не менее 1 мин, после чего пробы выдерживают для осаждения взвеси не менее 20 мин. Добавляют 20 см³ хлороформа и перемешивают в течение не менее 5 мин или обрабатывают на миксере типа Вортекс в течение не менее 1 мин, после чего выдерживают пробы для осаждения взвеси не менее 5 мин. Если после добавления хлороформа образуются крупные комки, пробирку укупоривают и интенсивно встряхивают в течение не менее 1 мин для перемешивания пробы. Добавляют 5 см³ раствора метафосфорной кислоты массовой долей 6 % (см. 4.2.9) и 1 см³ раствора хлористого натрия концентрации 1 моль/дм³ (см. 4.2.6) и тщательно перемешивают. Центрифугируют до разделения слоев. Используя стеклянный газонепроницаемый шприц вместимостью 25 см³ с иглой из нержавеющей стали (см. 5.21), переносят нижний хлороформный слой в чистую центрифужную пробирку вместимостью 50 см³ и выпаривают хлороформ в токе азота на водяной бане при 60 °С.

6.2.3 Очистка экстракта

В вытяжном шкафу патрон для твердофазной экстракции (ТФЭ), содержащий 1 г силикагеля (см. 5.20), кондиционируют 6 см³ гексана. Остаток в центрифужной пробирке растворяют в 1 см³ смеси хлороформ:метанол (2:1). Перерастворенный остаток количественно переносят в кондиционированный патрон с силикагелем для ТФЭ. Центрифужную пробирку ополаскивают 3 см³ смеси гексан:диэтиловый эфир (80:20) и переносят смыв в патрон для ТФЭ. Элюат отбрасывают. Центрифужную пробирку ополаскивают 3 см³ смеси гексан:диэтиловый эфир (50:50) и переносят смыв в патрон для ТФЭ. Элюат собирают в чистую центрифужную пробирку вместимостью 50 см³. Центрифужную пробирку из-под неочищенного экстракта ополаскивают 4 см³ смеси метанол:хлороформ:вода (75:15:10) и переносят смыв в патрон для ТФЭ. Элюат объединяют в центрифужной пробирке с предыдущей порцией элюата. Объединенный элюат выпаривают в токе азота на водяной бане при 60 °С.

6.2.4 Гидролиз

В вытяжном шкафу к остатку в центрифужной пробирке после проведения очистки экстракта добавляют 0,04 см³ ледяной уксусной кислоты (см. 4.1.1) и 2 см³ концентрированной соляной кислоты (см. 4.1.7). Пробирку плотно укупоривают и выдерживают в суховоздушном термостате при 120 °С в течение 2 ч. Затем пробирку охлаждают, добавляют в нее около 10 см³ воды и перемешивают содержимое путем взбалтывания. Добавляют 1,25 см³ раствора гидроксида натрия массовой долей 50 % (см. 4.1.12). Раствор пробы переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³ и доводят водой объем содержимого в колбе до метки. Аликвоту раствора пробы фильтруют через шприцевой фильтр размером пор 0,45 мкм в виалу автосамплера.

6.3 Анализ методом ВЭЖХ

6.3.1 Параметры работы хроматографической системы

Верхний предел рабочего давления для насоса 1-13 790 кПа (2 000 фунтов на квадратный дюйм).

Подвижная фаза для насоса 1 - раствор гидроксида натрия массовой концентрации 1,2 г/дм³ (30 ммоль/дм³).

Скорость подачи подвижной фазы насосом 1-0,40 см³/мин.

Верхний предел рабочего давления для насоса 2-13 790 кПа (2 000 фунтов на квадратный дюйм).

Подвижная фаза для насоса 2 - раствор гидроксида натрия массовой концентрации 40 г/дм³ (1 моль/дм³).

Скорость подачи подвижной фазы насосом 2-0,40 см³/мин.

Объем инжекции - 20 мм³.

Время удерживания мио-инозита - от 11 мин до 13 мин.

Продолжительность хроматографического анализа - 25 мин.

Временная программа работы крана-переключателя потока подвижной фазы:

0,00 мин - конфигурация 1 (см. рисунок 1);

1,50 мин - конфигурация 2 (см. рисунок 2);

13,50 мин - конфигурация 1 (см. рисунок 1)

1 - насос 1; 2 - предколонка РА1; 3 - насос 2; 4 - емкость для сбора элюата; 5 - предколонка и аналитическая колонка МА1; электрохимический детектор

Рисунок 1 - Конфигурация 1 крана-переключателя потока подвижной фазы

1 - насос 1; 2 - предколонка РА1; 3 - насос 2, 4 - емкость для сбора элюата; 5 - предколонка и аналитическая колонка МА1; 6 - электрохимический детектор

Рисунок 2 - Конфигурация 2 крана-переключателя потока подвижной фазы

6.3.2 Рабочие параметры импульсного амперометрического детектора с золотым электродом

Аналоговый диапазон 1 мкКл.

Программа работы для детекторов Dionex ICS 3000 или ICS 5000*:

0,0 с: + 0,10 В

0,20 с: + 0,10 В

0,40 с: + 0,10 В

0,41 с: - 2,00 В

0,42 с: - 2,00 В

0,43 с: + 0,60 В

0,44 с: - 0,10 В

0,50 с: - 0,10 В

Период интегрирования: от 0,20 с до 0,40 с.

Образцы типичных хроматограмм приведены в приложении А.

------------------------------

* Это пример подходящего изделия, доступного в коммерческой сети. Эта информация приведена для удобства пользователей этого стандарта и не является рекламной поддержкой указанного изделия. Допускается использовать аналогичные изделия, если может быть доказано, что они приводят к таким же результатам.

6.3.3 Подготовка хроматографа к работе

Готовят подвижные фазы. При необходимости через подвижные фазы барботируют гелий и/или герметизируют резервуары с подвижными фазами. При необходимости очищают и полируют золотой рабочий электрод. Включают детектор и прокачивают подвижную фазу через колонку при скорости потока 0,40 см³/мин в течение не менее 30 мин для того, чтобы привести систему в равновесие. Проверяют стабильность сигнала детектора перед началом анализа. Инжектируют 20 мм³ градуировочного стандартного раствора наиболее высокой концентрации по меньшей мере 5 раз и регистрируют площадь или высоту пиков. Если система уравновешена, относительное стандартное отклонение площади или высоты пика для последних трех инжекций стандартного раствора не должно превышать 2,0 %.

6.3.4 Анализ стандартных растворов и растворов проб

Если система уравновешена, проводят единичный анализ градуировочных стандартных растворов каждой концентрации (см. 4.2.4.1 и 4.2.4.2). После окончания анализа серии градуировочных растворов проводят анализ серии растворов проб и контрольной пробы, после чего проводят повторный анализ серии градуировочных растворов.

7 Обработка результатов

7.1 Общие положения

Перед тем, как проводить расчет массовой доли мио-инозита в пробах, сопоставляют форму пика мио-инозита на хроматограммах градуировочных растворов с формой пиков мио-инозита на хроматограммах растворов проб и убеждаются в том, что помехи от каких-либо компонентов отсутствуют, и площадь или высота пика мио-инозита на хроматограмме раствора пробы находится в границах диапазона площадей или высот пиков на хроматограммах градуировочных растворов. Не допускается рассчитывать массовую долю мио-инозита в пробе при наличии помех от других компонентов или при плохом разделении пиков. Время удерживания мио-инозита должно быть от 11 до 13 мин в зависимости от индивидуальных особенностей аналитической колонки.

7.2 Расчет концентрации градуировочных стандартных растворов

Массовую концентрацию градуировочных стандартных растворов вычисляют по формуле

,

(1)

где - концентрация градуировочного стандартного раствора, мг/дм³;

m - масса навески стандартного образца мио-инозита, мг;

0,05 - объем разбавления при приготовлении основного стандартного раствора, дм³ (см. 4.2.2);

1/10 - разбавление, примененное при приготовлении стандартного раствора промежуточной концентрации (10 см³ основного стандартного раствора разбавлены до 100 см³);

- аликвота стандартного раствора промежуточной концентрации, см³ (см. 4.2.4.1);

- объем разбавления при приготовлении градуировочных стандартных растворов высокой концентрации, см³ (см. 4.2.4.1);

- аликвота градуировочного стандартного раствора высокой концентрации, см³, взятая для приготовления градуировочного раствора низкой концентрации, если применимо к данному случаю (см. 4.2.4.2);

- объем разбавления при приготовлении градуировочных стандартных растворов низкой концентрации, см³, если применимо к данному случаю (см. 4.2.4.2);

р - чистота первичного стандартного образца, мг/мг, указанная в его маркировке или определенная экспериментально.

7.3 Построение градуировочного графика

Для каждой концентрации градуировочных растворов определяют среднее арифметическое значение из площадей пиков аналита, полученных при анализе соответствующего градуировочного раствора до и после анализа серии растворов проб. Градуировочный график строят с помощью линейного регрессионного анализа методом наименьших квадратов в системе координат концентрация градуировочного раствора - средняя площадь или средняя высота пика аналита.

7.4 Расчет массовой доли в пробах свободного мио-инозита или суммарной массовой доли свободного и связанного мио-инозита

7.4.1 Расчет массовой доли свободного мио-инозита

По градуировочному графику, построенному по 7.3, определяют массовую концентрацию свободного мио-инозита в подготовленном соответствующим образом растворе пробы для анализа. Исходя из найденной концентрации массовую долю аналита в пробе вычисляют по формуле

,

(2)

где - массовая доля свободного мио-инозита в пробе продукта, млн^-1;

- массовая концентрация мио-инозита в растворе пробы для анализа, мг/дм³;

100 - объем раствора пробы для анализа, готовый к хроматографическим измерениям, см³;

- масса навески пробы, г.

7.4.2 Расчет массовой доли связанного мио-инозита

По градуировочному графику, построенному по 7.3, определяют массовую концентрацию связанного мио-инозита в подготовленном соответствующим образом растворе пробы для анализа. Исходя из найденной концентрации массовую долю аналита в пробе вычисляют по формуле

,

(3)

где - массовая доля связанного мио-инозита в пробе продукта, млн^-1;

- массовая концентрация мио-инозита в растворе пробы для анализа, мг/дм³;

50 - объем раствора пробы для анализа, готовый к хроматографическим измерениям, см³;

- масса навески пробы, г.

7.4.3 Расчет суммарной массовой доли свободного и связанного мио-инозита

Суммарную массовую долю свободного и связанного мио-инозита в пробе вычисляют по формуле

(4)

где - суммарная массовая доля свободного и связанного мио-инозита в пробе продукта, млн^-1.

Библиография

[1]	AOAC Int. 2012, 95 p. 937
[2]	AOAC Int. 2012, 95 p. 295
[3]	2011.18, Determination of Myo-lnositol in Infant, Pediatric, and Adult Formulas by IC-PAD and Column Switching: Collaborative Study
[4]	ISO 5725-2:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method*
[5]	AOAC International. AOAC Official Methods Program, Associate Referee's Manual on development, Study, Review, and Approval Process. Part IV AOAC Guidelines for Collaborative Studies, 1995, pp. 23-51
[6]	AOAC SMPR 2011.07, Standard Method Performance Requirements for Myo-inositol in infant formula and Adult/Pediatric Nutritional formula
[7]	Thompson M. Recent Trends in Inter-Laboratory Precision at ppb and sub-ppb Concentrations in Relation to Fitness for Purpose Criteria in Proficiency Testing. Analyst (Lond.). 2000, 125 pp. 385-386

------------------------------

* Официальный перевод этого стандарта находится в Федеральном информационном фонде стандартов.