Купить систему ГАРАНТ Получить демо-доступ Узнать стоимость Информационный банк Подобрать комплект Семинары
  • ДОКУМЕНТ

Приложение. Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа А птиц

Приложение
к приказу Минсельхоза РФ
от 3 апреля 2006 г. N 105

 

Ветеринарные правила
лабораторной диагностики гриппа А птиц

 

1. Область применения

 

1.1. Настоящие Правила устанавливают обязательные требования к организации лабораторной диагностики гриппа А птиц (далее - грипп птиц).

1.2. Положения настоящих правил обязательны для выполнения на территории Российской Федерации органами государственной власти, предприятиями или иными хозяйствующими субъектами, учреждениями, организациями, общественными объединениями, независимо от их подчинения и форм собственности, должностными лицами и гражданами.

 

2. Общие положения

 

2.1. Диагностические лабораторные исследования и серологические тесты по определению напряженности поствакцинального иммунитета (далее - лабораторные тесты) проводят в специализированных ветеринарных учреждениях.

2.2. Лабораторная диагностика гриппа птиц направлена на выявление в исследуемых объектах ветеринарного надзора:

вируса гриппа птиц;

РНК вируса гриппа птиц;

антигенов вируса гриппа птиц;

антител к вирусу гриппа птиц.

2.3. При проведении лабораторных тестов могут быть использованы методы лабораторных исследований, применяющие:

тесты, утвержденные в установленном порядке;

тесты, которые реализуются с использованием тест-систем, зарегистрированных в установленном порядке в Российской Федерации.

 

3. Обязательные требования по отбору проб для проведения диагностики гриппа птиц

 

3.1. Отбор проб крови и патологического материала проводит ветеринарный работник, имеющий специальную подготовку.

3.2. Пробы маркируются и опечатываются. К пробам прилагается сопроводительный документ, содержащий сведения о дате и месте отбора проб, юридическом или физическом лице - владельце птицы и месте его нахождения, виде, возрасте птицы и ее состоянии на момент отбора проб.

3.3. Для проведения исследований осуществляют отбор проб патологического материала (органы, ткани головного мозга, легких, трахеи, селезенки, участков кишечника, почек, сердца) от павшей или убитой с диагностической целью птицы.

3.4. От каждого стада птицы отбирают для исследовании 5-10 трупов или патологический материал от 5-10 трупов, клоакальные и/или трахеальные смывы от 10-15 голов, 1-10 сборных проб помета от стада.

У мелких видов птиц для отбора проб используют свежий помет.

Пробу помета рекомендуется отбирать из расчета 1 грамм помета на 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест-накрест. 

3.5. Пробы крови для определения антител к вирусу гриппа птиц рекомендуется отбирать у 25-30 птиц из стада (партии), из одного птичника (зала) или одного населенного пункта, местности (водоема).

Пробы крови отбирают из подкрыльцовой вены в пробирки, увлажненные физиологическим раствором. Кровь выдерживают до образования сгустка при комнатной температуре, или в термостате при 37°С в течение 1-2 часов, затем обводят иглой или пастеровской пипеткой, отслаивая сгусток крови от стенок пробирки, и оставляют на 16-18 часов при температуре 2-4°С. Образовавшуюся прозрачную без признаков гемолиза сыворотку отбирают с помощью пипетки в отдельные, чистые пробирки.

Отбор крови допускается проводить с помощью иглы и шприца (или вакуумной пробирки).

Рекомендуется проводить центрифугирование проб крови для получения сыворотки в течение 10-15 минут при 1000 об/мин для осаждения свободных эритроцитов.

Для серодиагностики используют парные пробы сывороток крови, полученные от больных или инфицированных птиц, в начале заболевания и через 4-10 дней.

3.6. Пробы транспортируются во влагонепроницаемой таре, в контейнере с хладоэлементами или в термосе со льдом. Допускается однократное замораживание сывороток.

При транспортировке проб соблюдают установленные ветеринарно-санитарные правила и меры безопасности, предъявляемые к транспортировке биологических материалов, содержащих инфекционные агенты 3 группы патогенности.

3.7. Если немедленное исследование проб невозможно, допускается сохранять образцы на протяжении 4 дней при температуре 4°С.

При необходимости для увеличения срока хранения диагностические образцы и/или изолят помещают в морозильную камеру с температурой -80°С.

 

4. Методы и сроки проведения лабораторных исследований

 

4.1. Для установления диагноза на грипп птиц допускается применение следующих методов:

а) для выявления вируса гриппа птиц - биопроба на СПФ (свободных от патогенной микрофлоры) - цыплятах с обязательным последующим подтверждением специфичности биологической реакции;

б) для выделения вируса гриппа птиц - метод выделения вируса на СПФ - куриных эмбрионах или в культуре клеток;

в) для обнаружения антигенов вируса гриппа птиц;

иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения одного или нескольких белков вируса;

иммунопреципитация (двойная иммунодиффузия по Оухтерлони (далее - РДП) или иммуноэлектроосмофорез (далее - ИЭОФ);

иммунохроматографические методы (далее - ИХА);

радиоиммунный анализ (далее - РИА);

непрямая гем- и латексагглютинация;

реакция связывания комплемента (далее - РСК);

г) для обнаружения гемагглютинина (гемагглютинирующей активности) вируса гриппа птиц:

реакция гемагглютинации (далее РГА) с подтверждением специфичности в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);

ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;

д) для обнаружения РНК вируса:

полимеразная цепная реакция (далее - ПЦР);

ПЦР с последующим секвенированием ее продуктов;

Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;

е) для обнаружения антител к вирусу гриппа птиц:

ИФА;

РДП и ИЭОФ;

ИХА;

РИА;

РТГА;

РСК;

ж) для субтипирования вируса по гемагглютинину и нейраминидазе:

РТГА;

сиквенс к ДНК или ПЦР-продукта;

ПЦР;

Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;

ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;

з) для субтипирования противовирусных антител по гемагглютинину:

РТГА;

ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину.

4.2. Применение иных тестов допускается для получения предварительных результатов.

4.3. Методы проведения лабораторных исследований реализуются на основе утверждаемых в установленном порядке методик проведения обязательных диагностических исследований.

4.4. Сроки проведения лабораторных исследований устанавливаются в зависимости от метода исследования и не могут превышать 1 месяца.