Методические указания МУК 4.1.1395-03 "Измерение концентраций метолахлора в корнеплодах сахарной и столовой свеклы, зеленой массе растений, семенах масличных культур и растительном масле методом газожидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Методические указания
МУК 4.1.1395-03
"Измерение концентраций метолахлора в корнеплодах сахарной и столовой свеклы, зеленой массе растений, семенах масличных культур и растительном масле методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Дата введения: 30 июня 2003 г.
Введены впервые

2. Методика измерения концентраций метолахлора в корнеплодах сахарной и столовой свеклы, зеленой массе растений, семенах масличных культур, растительном масле методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип методики

Методика основана на определении метолахлора с помощью газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после извлечения препарата из проб органическим растворителем, очистке экстрактов осаждением коэкстрактивных веществ и перераспределением в системе двух несмешивающихся фаз.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для борьбы с сорной растительностью, защиты овощных и масличных культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды).

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл.

Таблица

Метрологическая характеристика методики измерения концентраций метолахлора

Анализируемый объект	Предел обнаружения, мг/кг (ДМ3)	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (дм3)	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение при n = 5 и р = 0,95, %	Доверительный интервал среднего при n = 5 и р = 0,95, %
Свекла столовая (корнеплоды)	0,01	0,01 - 0,5	84	123	10,7
Свекла сахарная (корнеплоды)	0,02	0,02 - 0,5	82	10,8	9,4
Зеленая масса растений	0,01	0,01 - 0,5	79	16,3	14,3
Семена масличных культур: соя,	0,02	0,02 - 0,5	76	12,1	10,6
подсолнечник	0,04	0,04 - 0,5	74	15,3	13,4
Растительное масло	0,01	0,01 - 0,5	75	12,6	11,1

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 0,5 нг.

Граница суммарной погрешности измерения - 15%.

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Метолахлор с содержанием д.в. 99%, (Новартис Кроп Протекшн АГ, Швейцария)
Азот газообразный высокой чистоты	ТУ 6-16-40-14-88
Аммиак водный, чда	ГОСТ 3760-79
Аммоний хлористый, хч	ГОСТ 3773-75
Ацетон, хч	ТУ 6-09-3513-82
Ацетонитрил, ч	ТУ 6-09-3534-74
Бумага фильтровальная	ТУ 6-09-1678-86
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72
Гексан, ч	ТУ-6-09-3513-82
Гелий газообразный очищенный марки Б	ТУ 51-940-80
Изооктан, хч	ТУ 6-09-921-76
Натрий серно-кислый, безводный, чда	ГОСТ 4166-76
Неподвижная жидкая фаза OV-17,
Супелко Инк, США
Неподвижная жидкая фаза SE-30, Супелко Инк, США
Ортофосфорная кислота, ч	ГОСТ 6552-80
Хлороформ, чда	ГОСТ 20015-74
Хромосорб G-AW DMCS 80 - 100 меш, Serva, Германия
Хромосорб 750, зернением 100 - 120 меш, Serva, Германия
Эфир диэтиловый, хч	ГОСТ 6262-79

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором
Хроматографические колонки стеклянные, длиной 1,8 и 2,7 м, внутренним диаметром 2 мм
Аппарат для встряхивания	ТУ 6921-1084-73
Весы аналитические ВЛР-20 или аналогичные	ТУ 25-06-1137-75
Весы технические ВЛКТ-500 или аналогичные	ГОСТ 24104-80
Воронки химические, конусные, диаметром 11 см	ГОСТ 25336-82
Воронки делительные на 600 мл	ГОСТ 8613-75
Испаритель вакуумный ротационный ИР-1М или аналогичный	ТУ 25-11917-74
Колбы круглодонные со шлифом, вместимостью 250 и 500 мл	ГОСТ 25336-82
Колбы плоскодонные со шлифом, вместимостью 250 и 500 мл	ГОСТ 25336-82
Колбы мерные, вместимостью 25, 50, 100 мл	ГОСТ 1770-74
Мельница (кофемолка)
Микропипетки	ГОСТ 20292-74
Микрошприц МШ-10, МШ-10М	ТУ 2-833-106
Насос стеклянный вакуумный водоструйный	ГОСТ 25336-82
Пипетки, вместимостью 1,2, 5, 10 мл	ГОСТ 22292-74
Цилиндры мерные, вместимостью 50 и 100 мл	ГОСТ 1774-74

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Номер названного ГОСТа следует читать как "ГОСТ 1770-74"

Взамен ГОСТ 8613-75 постановлением Госстандарта СССР от 15 июля 1982 г. N 2670 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25336-82

2.4. Отбор и подготовка проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.

Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре минус 18°С.

Корнеплоды, не размораживая, измельчают на терке, зеленую массу растений - ножницами.

Семена масличных культур доводят до стандартной влажности при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света и измельчают на мельнице.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии

Готовую насадку (3% OV-17 на хромосорбе 750 или 2% SE-30 на хромосорбе G-AW DMCS) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и выдерживают при температуре 220°С в течение 8 ч.

2.5.2. Подготовка растворителей

Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.

Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя испаряют с помощью вакуумного ротационного испарителя при температуре 40°С до объема 1 мл и хроматографируют. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

2.5.3. Приготовление растворов

Коагулирующий раствор готовят растворением в мерной колбе на 500 мл 2,5 г хлористого аммония и 5 мл 85%-ной ортофосфорной кислоты в дистиллированной воде.

0,1 М раствор ортофосфорной кислоты готовят растворением в мерной колбе на 1 л 9,8 г ортофосфорной кислоты в дистиллированной воде.

Смесь ацетонитрила с 0,1 М раствором ортофосфорной кислоты (в соотношении 95:5, по объему) готовят растворением в мерной колбе на 1 л 50 мл 0,1 М раствора ортофосфорной кислоты в ацетонитриле.

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

Взвешивают 100 мг метолахлора, переносят в мерную колбу объемом 100 мл, доводят объем до метки изооктаном.

Концентрация раствора 1 мг/мл (основной стандартный раствор N 1).

Методом последовательного разбавления из основного стандартного раствора N 1 готовят рабочие стандартные растворы метолахлора в изооктане с концентрациями 0,25, 0,5, 1, 2, 5, 10 мкг/мл для построения калибровочного графика и определения степени извлечения.

Основные и рабочие стандартные растворы гербицида устойчивы при хранении в холодильнике при температуре 4°С в течение месяца.

2.5.5. Построение калибровочного графика

Рабочие растворы метолахлора с концентрациями 0,25, 0,5, 1, 2, 5, 10 мкг/мл хроматографируют, а затем на основании данных хроматографирования рабочих стандартных растворов строят калибровочный график, откладывая на оси ординат площади (высоты) пиков, на оси абсцисс - количество метолахлора.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации. Находят среднее значение высоты (площади) пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график зависимости высоты в мм (площади в мв х с) хроматографического пика от концентрации метолахлора в растворе, мкг/мл.

Калибровочный коэффициент, представляющий собой тангенс угла наклона полученной прямой к оси абсцисс, вычисляют по методу наименьших квадратов.

2.5.6. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения производится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6. Описание измерения

2.6.1. Корнеплоды свеклы и зеленая масса растений

Навеску растительной пробы 25 - 50 г помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 100 мл хлороформа и экстрагируют в течение 2 ч на аппарате для встряхивания. Экстракт отфильтровывают через слой безводного сульфата натрия. Колбу и фильтр трижды промывают хлороформом порциями по 10 - 15 мл. Объединенный экстракт отгоняют досуха на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в мл охлажденного ацетона и прибавляют 25 - 30 мл охлажденной коагулирующей смеси. Колбу помещают на 30 - 40 мин в холодильник, после чего содержимое отфильтровывают через фильтр "синяя лента" в делительную воронку. Из коагулирующего раствора метолахлор экстрагируют трижды н-гексаном порциями по 30 мл. Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50°С.

Сухой остаток растворяют в 1 - 2 мл изооктана и хроматографируют.

2.6.2. Семена масличных культур

Измельченную навеску семян (25 г) помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, заливают 150 мл смеси ацетонитрила с 0,1 М раствором ортофосфорной кислоты, экстрагируют в течение 30 мин на электромеханическом встряхивателе и оставляют на ночь в холодильнике при температуре от 0 до - 5°С. Охлажденную пробу фильтруют через фильтр "белая лента" в круглодонную колбу на 500 мл. Осадок на фильтре и колбу трижды промывают охлажденной смесью ацетонитрила с раствором ортофосфорной кислоты порциями по 30 мл.

Объединенный экстракт упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45°С. Сухой остаток растворяют в 3 мл охлажденного ацетона, тщательно обмывая стенки колбы, и прибавляют 25 - 30 мл охлажденной коагулирующей смеси. Колбу помещают на 30 - 40 мин в холодильник, после чего содержимое отфильтровывают через фильтр "синяя лента" в делительную воронку. Из коагулирующего раствора метолахлор экстрагируют трижды н-гексаном порциями по 30 мл. Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50°С.

Сухой остаток растворяют в 1 - 2 мл изооктана и хроматографируют.

2.6.3. Растительное масло

Навеску растительного масла (25 г) помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, приливают 70 мл смеси ацетонитрила с 0,1 М раствором ортофосфорной кислоты, встряхивают в течение 10 мин на электромеханическом встряхивателе и оставляют на ночь в холодильнике при температуре от -3 до -5°С. Охлажденный водно-ацетонитрильный слой декантируют в круглодонную колбу на 250 мл, фильтруя через фильтр "синяя лента".

Растворитель упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 50°С. Остаток растворяют в 3 мл ацетона, тщательно обмывая стенки колбы, и прибавляют 25 - 30 мл охлажденной коагулирующей смеси. Колбу помещают на 30 - 40 мин в холодильник, после чего содержимое отфильтровывают через фильтр "синяя лента" в делительную воронку. Из коагулирующего раствора метолахлор экстрагируют трижды н-гексаном порциями по 30 мл. Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50°С.

2.7. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором (PYE-UNICAM серии 200, НР-5840, Цвет серии 500 или аналогичные).

Носитель - хромосорб 750 (100 - 120 меш). Неподвижная фаза - 3% OV-17.

Колонка стеклянная, длиной 1,8 м и внутренним диаметром 2 мм. Газ-носитель - азот высокой чистоты или гелий очищенный марки Б.

Скорость потока: азота (гелия)	12,7 см3/мин;
водорода	3,5 см3/мин;
воздуха	55 см3/мин.
Температура термостата: колонок	200°С,
испарителя	270°С,
детектора	300°С.
Скорость движения ленты самописца	0,1 см/мин.
Время удерживания метолахлора	(10,6 +- 0,5) мин.
Альтернативный вариант:
Носитель - хромосорб N-AW DMCS (80 - 100 меш).
Неподвижная фаза - 2% SE-30.
Колонка стеклянная, длиной 2,7 м и внутренним диаметром 2 мм.
Скорость потока: азота (гелия)	20 см3/мин;
водорода	30 см3/мин;
воздуха	300 см3/мин.
Температура термостата: колонок	200°С,
испарителя	230°С,
детектора	300°С.
Время удерживания метолахлора	(4,7 +- 0,3) мин.
Вводимый в хроматограф объем пробы	1 - 5 мкл.
Линейный диапазон детектирования	0,5-20 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и определяют среднюю высоту (площадь пика).

Пробы, дающие пики метолахлора, по величине большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание метолахлора в пробах (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                            C x S x V x V

                             1   1   1   3

                         X = --------------, где

                              S x V x P

                               2   2

    С - концентрация стандартного раствора метолахлора, мкг/мл;

     1

    V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

     1

    V - объем раствора  анализируемой  пробы,  вводимого в  хроматограф,

     2  мкл;

    V - объем стандартного раствора, вводимого в хроматограф, мкл;

     3

    Р - масса пробы, отобранной для анализа, г;

    S - площадь (высота) пика метолахлора в пробе, мв x с (мм2), мм;

     1

    S - площадь (высота) пика метолахлора в стандартном растворе, мв x с

     2  (мм2), мм.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать все требования безопасности при работе в химических лабораториях, в соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы МЗ СССР" (N 2455-81 от 20.10.81), а также требования, изложенные в документации на приборы.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

ГАРАНТ:

Взамен МИ 2335-95 Госстандартом России введена в действие с 1 октября 2003 г. рекомендация МИ 2335-2003

5. Разработчики

Долженко В.И. (Всероссийский НИИ защиты растений, г. Санкт-Петербург-Пушкин), Маслаков С.Е., Басова Ю.Г., Сабуров Г.Г. (Санкт-Петербургский НИИ лесного хозяйства, г. Санкт-Петербург).

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко