Методические указания МУК 4.1.1397-03 "Определение остаточных количеств антидота мефенпир-диэтила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зеленой массе и зерне кукурузы газохроматографическим методом" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Методические указания
МУК 4.1.1397-03
"Определение остаточных количеств антидота мефенпир-диэтила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зеленой массе и зерне кукурузы газохроматографическим методом"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Дата введения: 30 июня 2003 г.
Введены впервые

2. Методика определения остаточных количеств мефенпир-диэтила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зеленой массе и зерне кукурузы газохроматографическим методом

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на газохроматографическом определении мефенпир-диэтила с ДЭЗ на неподвижной фазе OV-225 после экстракции его из воды хлористым метиленом, из почвы, зеленой массы, зерна и соломы смесью ацетон-вода (2:1), очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания зерновых колосовых культур и кукурузы.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Таблица

Метрологическая характеристика метода

Анализируемый объект	Предел обнаружения, мг/дм3, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/дм3, мг/кг	Среднее значение определения	Стандартное отклонение, S	Относительное отклонение, DS, %	Доверительный интервал среднего, %
Вода	0,0004	0,0004 - 0,004	88,6	5,6	2,5	+- 5,2
Почва	0,002	0,002 - 0,02	79,8	5,1	2,3	+- 4,7
Зерно	0,004	0,004 - 0,04	85,1	5,5	2,5	+- 5,1
Солома	0,008	0,008 - 0,08	81,9	5,6	2,5	+- 5,2
Зерно кукурузы	0,01	0,01 - 0,10	86,6	4,3	1,9	+- 4,0
Зеленая масса	0,02	0,02 - 0,20	82,6	3,7	1,7	+- 3,4

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Мефенпир-диэтил с содержанием д.в. 99,4%
АгрЭво, Германия)
Ацетон, чда	ГОСТ 2603-79
Вода дистиллированная или деионизованная	ГОСТ 7602-72
н-Гексан, хч	ТУ 6-09-3375-78
Калия перманганат, хч	ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид, хч	ГОСТ 4161-77
Калий углекислый, хч	ГОСТ 4221-76
Кислота серная, хч	ГОСТ 4204-77
Метилен хлористый	ГОСТ 12794-80
Натрия гидроксид, хч	ГОСТ 4328-77
Натрия сульфат безводный, хч	ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый, хч	ГОСТ 83-63
Натрия хлорид, хч	ГОСТ 4233-77
Толуол, хч	ТУ 6-09-4305-76
Этилацетат	ГОСТ 22300-76
Элюент N 1 для колоночной хроматографии:
смесь гексан-этилацетат, 95:5, по объему
Элюент N 2 для колоночной хроматографии:
смесь гексан-этилацетат, 80:20, по объему
Азот газообразный, осч	ГОСТ 9293-74
Силикагель для адсорбционной хроматографии (Вельм, Германия) 1 степени активности или силикагель КСК (60 - 100 меш)
Стекловата
Фильтры бумажные "синяя лента"	ТУ 6-09-1678-77

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Хроматограф газовый Тракор (США), мод. 570 с ДЭЗ или аналогичный
Колонка хроматографическая 2 000 х 2 мм, неподвижная фаза 3% OV-225 на Хромосорбе W(HP), размер частиц 0,125 - 0,150 мм
Колонка хроматографическая 1 000 х 2 мм, неподвижная фаза 3% OV-17 на Инертоне-супер, размер частиц 0,16 - 0,20 мм
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф	ТУ 64-1-2850
Аппарат для встряхивания АВУ	ТУ 64-1-1081-83
Весы аналитические типа ВЛР-200	ГОСТ 19401-74
Водоструйный насос	ГОСТ 10696-75
Мельница электрическая лабораторная или аналогичная	ТУ 46-22-236-79
Прибор для перегонки при атмосферном давлении
Ротационный испаритель, тип ИР-1М	ТУ 25-11-917-76
Воронка Бюхнера	ГОСТ 0147-73
Воронки делительные вместимостью 100 и 250 мл	ГОСТ 25336-82
Воронки для фильтрования, стеклянные	ГОСТ 8613-75
Колба Бунзена	ГОСТ 5614-75
Колбы конические с притертыми пробками, вместимостью 250 мл	ГОСТ 25336-82
Колбы мерные, вместимостью 50 и 100 мл	ГОСТ 1770-74
Колбы грушевидные, вместимостью 50, 100, 250 мл	ГОСТ 25336-82
Пипетки мерные, вместимостью 1, 2 и 5 мл	ГОСТ 20292-74Е
Пробирки градуированные с притертыми пробками, вместимостью 5 и 10 мл	ГОСТ 10515-75
Цилиндры мерные, вместимостью 50, 100 и 250 мл	ГОСТ 1770-74

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 10696-75 постановлением Госстандарта СССР от 15 июля 1982 г. N 2670 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25336-82

По-видимому, в 11 абзаце таблицы допущена опечатка. Имеется в виду "ГОСТ 9147-73"

Взамен ГОСТ 8613-75 и ГОСТ 10515-75 постановлением Госстандарта СССР от 15 июля 1982 г. N 2670 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25336-82

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4°С не более трех месяцев. Зеленую массу хранят при температуре 0 - 4°С в течение суток; для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре минус 18°С. Пробы воды хранят при температуре не выше 4°С в течение 2 дней, при температуре минус 18°С в течение месяца.

Пробы почвы высушивают при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния и хранят в стеклянной емкости не более трех месяцев.

Перед анализом зерно и солому размалывают на мельнице, зеленую массу измельчают ножницами, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г КМnO4 и 2 г К2СO3).

Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора углекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3% OV-225 на Хромосорбе W(HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250°С в течение 8 - 10 ч.

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор мефенпир-диэтила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,4% д.в., в толуоле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора мефенпир-диэтила соответствующим последовательным разбавлением толуолом. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более 15 дней.

2.5.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора мефенпир-диэтила с концентрацией 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хромато-графического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации антидота в растворе в мкг/мл.

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,2 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и приливают около 10 мл гексана. Затем в колонку вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него 2 г безводного сульфата натрия. Колонку промывают 20 мл гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения мефенпир-диэтила на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора мефенпир-диэтила с концентрацией 100 мкг/мл, отдувают растворитель потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл элюента N 1 и наносят на подготовленную колонку. Промывают колонку 50 мл элюента N 1 и затем 50 мл элюента N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл толуола и анализируют на содержание мефенпир-диэтила по п. 2.7. Фракции, содержащие мефенпир-диэтил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 50 мл толуола и вновь анализируют по п. 2.7. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту вымывания из колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Профиль вымывания мефенпир-диэтила может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6. Описание определения

2.6.1. Экстракция мефенпир-диэтила

2.6.1.1. Вода. 100 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 250 мл. Добавляют 30 мл хлористого метилена и встряхивают 1 мин. Нижний органический слой отделяют, собирая в коническую колбу на 100 мл. Водный слой повторно экстрагируют 30 мл хлористого метилена. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30°С. К остатку приливают 15 мл гексана и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Процедуру повторяют, используя 10 мл гексана, и остаток растворяют в 2 мл толуола и анализируют на содержание мефенпир-диэтила по п. 2.7.

2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 40 мл дистиллированной воды и спустя 5 мин 80 мл ацетона. Суспензию перемешивают в течение 30 мин на аппарате для встряхивания и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Почву повторно экстрагируют 60 мл смеси ацетон-вода (2:1) при встряхивании в течение 30 мин и суспензию фильтруют. Объединенный фильтрат упаривают до водной фазы (около 40 мл) на роторном испарителе при температуре 40°С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п.п. 2.6.2 и 2.6.3.

2.6.1.3. Зеленая масса, зерно, солома. Навеску (25 г) измельченной зеленой массы кукурузы заливают 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему) и перемешивают в течение 1 ч на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Растительный материал повторно экстрагируют 100 мл смеси ацетон-вода (2:1) при встряхивании в течение 30 минут и суспензию фильтруют. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 38 мл), эквивалентную 5 г растительной ткани, которую упаривают до водной фазы (около 10 мл) на роторном испарителе при температуре 40°С. Дальнейшую очистку проводят по п.п. 2.6.2 и 2.6.3.

Навеску размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают соответственно 30 или 20 мл дистиллированной воды и спустя 5 мин 60 или 40 мл ацетона. Суспензию перемешивают в течение 30 мин на аппарате для встряхивания и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Растительный материал повторно экстрагируют смесью ацетон-вода (2:1) /45 мл для муки и 30 мл для соломы/ при встряхивании в течение 20 мин и суспензию фильтруют. Объединенные фильтраты муки или соломы упаривают до водной фазы (соответственно до объема около 30 и 20 мл) на роторном испарителе при температуре 40°С. Дальнейшую очистку экстрактов проводят по п.п. 2.6.2 и 2.6.3.

2.6.2. Очистка экстрактов

Водные фазы почвенного и растительного экстрактов из п.п. 2.6.1.2 и 2.6.1.3 переносят в делительную воронку емкостью 100 или 200 мл, добавляют хлорид натрия (12 г для почвы, 9 г для зерна и 5 г для зеленой массы и соломы) и 30 мл хлористого метилена. Смесь встряхивают в течение 1 мин и после ее расслоения отделяют дихлорметановый слой, который пропускают через стеклянный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, в грушевидную колбу вместимостью 100 мл. Водную фракцию повторно экстрагируют 30 мл хлористого метилена. Объединенный дихлорметановый экстракт упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30°С.

2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем

Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.2 экстрактов растительного материала и почвы, количественно переносят тремя 1 мл порциями гексана в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5) и дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку промывают 50 мл элюента N 1 (гексан-этилацетат, 95:5), которые отбрасывают. Мефенпир-диэтил элюируют 50 мл элюента N 2 (гексан-этилацетат, 8:2), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Сухой остаток экстракта почвы, зерна и соломы колосовых культур растворяют в 2 мл толуола, а сухой остаток экстракта зеленой массы и зерна кукурузы в 5 мл толуола и анализируют по п. 2.7.

2.7. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф Тракор (США), мод. 570 с детектором по захвату электронов (Ni(63)).

Показания электрометра	1 х 10(-9) А.
Скорость движения ленты самописца	20 см/ч.
Колонка стеклянная, спиральная 2000 х 2 мм; неподвижная фаза - 3% OV-225 на Хромосорбе W(HP) (0,125 - 0,150 мм).
Температура детектора	320°С;
инжектора	250°С;
термостата колонки	235°С.
Скорость потока газа-носителя (азота)	30 мл/мин.
Объем вводимой пробы	2 мкл.
Время удерживания мефенпир-диэтила	3 мин.
Предел детектирования	0,04 нг.
Линейный диапазон детектирования	0,04 - 0,4 нг.

Альтернативная фаза: 3% OV-17 на Инертоне-супер (0,16 - 0,20 мм); колонка стеклянная 1000 х 2 мм; условия хроматографирования те же.

Время удерживания мефенпир-диэтила 4,7 мин.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,20 мкг/мл, разбавляют толуолом.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание мефенпир-диэтила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                               Н х A х V

                                1

                           X = ---------, где

                                 Н х m

                                  0

    Х - содержание мефенпир-диэтила в пробе, мг/дм3 или мг/кг;

    Н - высота пика стандарта, мм;

     0

    Н - высота пика образца, мм;

     1

    А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

    V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

    m - масса анализируемого образца или его части, г (для зеленой массы

        кукурузы 5 г).

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

ГАРАНТ:

Взамен МИ 2335-95 Госстандартом России введена в действие с 1 октября 2003 г. рекомендация МИ 2335-2003

5. Разработчики

Дубовая Л.В.; Талалакина Т.Н.; Макеев А.М., к. биол. н. ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко