Методические указания МУК 4.1.1961-05
"Определение остаточных количеств дифеноконазола в воде методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)
Дата введения: 1 июля 2005 г.
Введены впервые
2. Метод измерений
Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемой пробы воды дихлорметаном и последующей очистки экстракта колоночной хроматографией на оксиде алюминия.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания сахарной и кормовой свеклы и яблок.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США) |
Номер Госреестра |
15945-97 |
Весы аналитические ВЛА-200 |
||
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +- 0,038 г |
||
Колбы мерные, вместимостью 100 и 1000 см3 |
||
Пипетки градуированные 2-го класса точности, вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3 |
ГОСТ 29227 |
|
Пробирки градуированные, вместимостью 5 или 10 см3 |
||
Цилиндры мерные 2-го класса точности, вместимостью 25, 50, 250, 500 и 1 000 см3 |
||
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками. |
3.2. Реактивы
Дифеноконазол с содержанием действующего вещества 99,4% (ВНИИХСРЗ, Россия) |
|
Алюминий оксид для хроматографии, по Брокману II, нейтральный (фирмы "Реанал", Венгрия) |
|
Ацетонитрил для хроматографии, хч |
ТУ-6-09-4326-76 |
Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над КМnO4 |
ГОСТ 6709 |
н-Гексан, хч |
ТУ 6-09-3375 |
Метилен хлористый (дихлорметан), хч |
ГОСТ 12794 |
Натрий серно-кислый, безводный, хч |
ГОСТ 4166 |
Этиловый эфир уксусной кислоты, ч |
ГОСТ 22300 |
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные |
ТУ 6-09-2678-77 |
Воронки делительные, вместимостью 1000 см3 |
|
Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм |
|
Груша резиновая |
|
Колбы плоскодонные, вместимостью 200-250 см3 |
|
Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 10, 100 и 250 см3 |
|
Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 25 см, внутренним диаметром 8-10 мм |
|
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм |
|
Насос водоструйный |
ГОСТ 10696 |
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария |
ТУ 25-11-917-74 |
Стаканы химические, вместимостью 100 см3 |
|
Стекловата |
|
Стеклянные палочки |
|
Установка для перегонки растворителей |
|
Набор для фильтрации растворителей через мембрану |
|
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 8 мкм |
|
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа, вместимостью 50-100 мм3 |
|
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +- 5)°С и относительной влажности не более 80%.
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки для очистки экстракта, проверка хромато-графического поведения вещества на колонке с оксидом алюминия.
7.1. Подготовка органических растворителей
7.1.1. Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
7.1.2. Очистка этилацетата
Этилацетат промывают последовательно 5%-м водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.
7.1.3. Очистка н-гексана
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 200
деионизованной воды, 800
ацетонитрила, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.
7.3. Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 1 /мин до установления стабильной базовой линии.
7.4. Приготовление градуировочных растворов
7.4.1. Исходный раствор дифеноконазола для градуировки (концентрация 100 мкг/)
В мерную колбу вместимостью 100 помещают 0,01 г дифеноконазола, растворяют в 50-70
ацетонитрила, доводят ацетонирилом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.
Растворы N 1-6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.
7.4.2. Раствор N 1 дифеноконазола для градуировки (концентрация 10 мкг/)
В мерную колбу вместимостью 100 помещают 10
исходного раствора дифеноконазола с концентрацией 100 мкг/
(п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения дифеноконазола из исследуемых образцов.
7.4.3. Рабочие растворы N 2-6 дифеноконазола для градуировки (концентрация 0,1-1,0 мкг/)
В 5 мерных колб вместимостью 100 помещают по 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 и 10
градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/
(п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2-6 - с концентрацией дифеноконазола 0,1; 0,2; 0,3; 0,5 и 1,0 мкг/
, соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике не более 10 дней.
7.5. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации дифеноконазола в растворе (мкг/), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки NN 2-6.
В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.
7.6. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 4 г оксида алюминия в 15-20 этилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. После этого колонка готова к работе.
7.7. Проверка хроматографического поведения дифеноконазола на колонке с оксидом алюминия
В круглодонную колбу вместимостью 10 помещают 0,5
раствора N 1 для градуировки (п. 7.4.2), упаривают досуха, добавляют 2 см этилацетата, перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.6. Промывают колонку 50
этилацетата со скоростью 1-2 капли в с. Фракционно (по 10
) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 5
подвижной фазы (приготовленной по п. 7.2), анализируют на содержание дифеноконазола по п. 9.3.
Фракции, содержащие дифеноконазол, объединяют и вновь анализируют.
Рассчитывают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
Примечание: проверку хроматографического поведения дифеноконазола следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбента и растворителя.
8. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 17.1.3.03-77 "Правила выбора и оценки качества источников централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения".
Отобранные пробы воды анализируют в день отбора или хранят при 4°С в течение 10-ти дней.
Непосредственно перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр.
9. Выполнение определения
9.1. Экстракция
Образец анализируемой воды объемом 400 помещают в делительную воронку вместимостью 1 000
, добавляют 50
хлористого метилена, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 250
, фильтруя его через 2 см слой безводного сульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром "красная лента". Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды порциями хлористого метилена по 50
. Отстоявшийся слой хлористого метилена (нижняя фаза) фильтруют в колбу с ранее полученным экстрактом.
Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С, подвергают очистке в соответствии с п. 9.2.
9.2. Очистка экстракта
Остаток, полученный по п. 9.1, с помощью 1,5-2 этилацетата порциями переносят в колонку, подготовленную по п. 7.6, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Дифеноконазол элюируют с колонки 25
этилацетата, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100
. Раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С почти досуха, вносят в колбу 3-4
н-гексана, вновь упаривают. Операцию упаривания с н-гексаном повторяют трижды.
Сухой остаток в колбе растворяют в 2 подвижной фазы (приготовленной по п. 7.10) и анализируют на содержание дифеноконазола по п. 9.3.
По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Вместо "п. 7.10" имеется в виду "п. 7.2"
9.3. Условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (CШA).
Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С 18, зернением 8 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (80:20, по объему).
Скорость потока элюента: 1,0 /мин.
Рабочая длина волны: 230 нм.
Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 20 .
Ориентировочное время выхода дифеноконазола: 4,4-4,6 мин.
Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор дифеноконазола с концентрацией 1,0 мкг/, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2.
10. Обработка результатов анализа
Содержание дифеноконазола в пробе рассчитывают по формуле:
, где
Х - содержание дифеноконазола в пробе, мг/дм3;
А - концентрация дифеноконазола, найденная по градуировочному графику, в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/;
W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;
V - объем анализируемого образца, .
11. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
12. Разработчики
Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана); Брагина И.В. (Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора).
Руководитель Федеральной службы |
Г.Г. Онищенко |
Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.
С 1 июля 2005 года вводятся в действие Методические указания по определению остаточных количеств дифеноконазола в воде (в диапазоне 0,0005-0,005 мг/куб. дм.) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Дифеноконазол представляет собой системный фунгицид. Его рекомендуется применять для борьбы с болезнями яблони, груши, свеклы и зерновых культур.
К измерениям допускаются специалисты, имеющие квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
Определены этапы проведения измерений; приводится перечень рекомендуемых к использованию реактивов.
Методические указания МУК 4.1.1961-05 "Определение остаточных количеств дифеноконазола в воде методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)
Текст методических указаний приводится по официальному изданию Гоcударственного санитарно-эпидемиологического нормирования РФ, Москва, 2008 г.
Определение остаточных количеств химических веществ в объектах окружающей среды, атмосферном воздухе, воздухе рабочей зоны и сельскохозяйственной продукции
Сборник методических указаний
МУК 4.1.1960-05, 4.1.1961-05,
4.1.1963-4.1.1980-05
Определение остаточных количеств химических веществ в объектах окружающей среды, атмосферном воздухе, воздухе рабочей зоны и сельскохозяйственной продукции: Методические указания. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008. - 200 с.
1. Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Токсикология пестицидов и агрохимикатов" (В.А. Калинин, Т.С. Калинина, О.И. Рыбакова, А.В. Калинин).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-гигиеническому нормированию Минздрава России (протокол от 31 марта 2005 г. N 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 21 апреля 2005 г.
4. Введены в действие с 1 июля 2005 г.
5. Введены впервые.