Методические указания МУК 4.1.1965-05 "Определение остаточных количеств флутриафола в плодах яблони, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Методические указания МУК 4.1.1965-05
"Определение остаточных количеств флутриафола в плодах яблони, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Дата введения: 1 июля 2005 г.
Введены впервые

2. Методика определения флутриафола в плодах яблони, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод определения флутриафола в винограде и яблоках основан на экстракции пестицида органическими растворителями, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и, при необходимости, на колонке с флорисилом. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с использованием детектора электронного захвата (ДЭЗ).

2.1.2. Избирательность метода

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в таблице.

Таблица

Метрологическая характеристика метода

Объект анализа	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, % (n = 24)	Стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал среднего, % n = 24, Р = 0,95
яблоня, плоды	0,05	0,05-0,5	85,8	5,40	4,95
виноград, ягоды	0,025	0,025-0,5	83,4	5,75	4,15
виноград, сок	0,025	0,025-0,5	83,0	5,95	4,15

2.2. Реактивы, материалы

Флутриафол, аналитический стандарт
Ацетон, осч	ТУ 2633-039-4493179-00
Ацетон, чда	ГОСТ 2603-79
Вода дистиллированная	ГОСТ 7602-76
н-Гексан, хч	ТУ 6-09-3375-78
Натрий серно-кислый безводный, чда	ГОСТ 4166-76
Натрия хлорид, хч	ГОСТ 4233-77
Стекловата
Серная кислота ОСЧ 11-5	ГОСТ 14262-78
Флорисил 150-250 мкм (Merck, Германия),
Хлористый метилен, чда	ТУ-2631-020-11291058-96

2.3. Приборы и посуда

Газовый хроматограф Кристалл 2000М или аналогичный с ДЭЗ
Колонка кварцевая капиллярная 30 м х 0,32 мм с неподвижной фазой НР-1 (0,25 мкм)
Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные	ГОСТ 34104-80Е
Весы технические ВЛКТ-500	ГОСТ 24104-80
Установка ультразвуковая "Серьга"	ТУ 3.836.008
Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М или аналогичный	ТУ 25-11-917-74
Микрошприц МШ-10, МШ-10М	ТУ 2-833-106
Насос водоструйный	МРТУ 42 861-64
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС	ГОСТ 10384-72
Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС	ГОСТ 10384-72
Воронки лабораторные В-75-110	ГОСТ 25 336-82
Воронки делительные на 500, 1000 мл ВД-3-500	ГОСТ 8613-75
Цилиндры мерные на 100 см3, 500 см3	ГОСТ 1774-74
Колбы мерные на 100 см3	ГОСТ 1770-74
Пипетки на 1, 2, 5, 10 см3	ГОСТ 22292-74
Стаканы химические	ГОСТ 25336-82Е
Колонка стеклянная хроматографическая длиной 30 см, диаметром 10 мм

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 N 2051-79).

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.

Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают на вакуумном ротационном испарителе до объема 1 мл и хроматографируют. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

2.5.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250°С в течение 8-10 часов.

2.5.3. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

Для приготовления стандартного раствора с концентрацией 100 мг/мл количественно переносят 20 мг аналитического стандарта флутриафола в мерную колбу на 200 мл и растворяют навеску в ацетоне. Из полученного раствора готовят градуировочные растворы с концентрациями 5, 10, 25, 50 мкг/мл методом последовательного разбавления ацетоном.

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют соответствующий стандартный раствор флутриафола в ацетоне.

2.5.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика от концентрации флутриафола в растворе в хроматограф вводят по 1 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты, мм (площади, мВ x с) пика от концентрации флутриафола в градуировочном растворе (мкг/мл).

2.5.5. Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстракта

В нижнюю часть колонки помещают тампон из стекловаты, затем слой 0,5 см безводного сульфата натрия и заполняют через воронку суспензией 5 г флорисила в 25 мл гексана при открытом кране колонки. Затем вносят слой 1 см безводного сульфата натрия и подключают выход колонки к водоструйному насосу для уплотнения слоя сорбента. После этого колонку промывают 15 мл гексана, затем смесью гексан-ацетон в соотношении 2:3 и закрывают кран, когда уровень растворителя достигнет верхнего края сорбента. Колонка готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения флутриафола на колонке с флорисилом

В подготовленную колонку пипеткой вносят 1 мл стандартного раствора флутриафола и дают впитаться. После этого вносят 10 мл смеси гексан-ацетон (2:3), элюат отбрасывают. Элюирование флутриафола проводят 40 мл смеси гексан-ацетон (1:5), отбирая фракции по 5 мл, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют фракции, содержащие флутриафол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. Рассчитывают содержание флутриафола в элюате, определяют полноту извлечения препарата из колонки и необходимый для этого объем элюирующей смеси.

Примечание: профиль вымывания флутриафола может измениться при использовании флорисила другой партии.

2.5.7. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция и очистка экстрактов

2.6.1.1. Плоды яблони. Навеску измельченных плодов 50 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через складчатый фильтр "красная лента" в делительную воронку объемом 1 000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями по 100 мл ацетона. После третьей экстракции осадок переносят на фильтр, колбу ополаскивают 20 мл ацетона и вносят в делительную воронку через фильтр с осадком. К объединенному экстракту добавляют 100 мл дистиллированной воды и промывают 20 мл гексана, встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают и промывку повторяют дважды порциями по 20 мл гексана. Промытый гексаном водно-ацетоновый экстракт концентрируют на роторном испарителе до объема 130-150 мл и переносят в делительную воронку, ополаскивая концентратор. Переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая воронку в течение 2 мин. Нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия, затем промывают осушитель 10 мл хлористого метилена. Объединенный дихлорметановый экстракт упаривают досуха и проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.

2.6.1.2. Ягоды винограда. Навеску размолотых ягод 50 г помещают в коническую колбу объемом 500 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через складчатый фильтр "красная лента" в делительную воронку объемом 1 000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями экстрагента по 150 мл, после чего остаток переносят на фильтр, колбу и осадок промывают 20-30 мл ацетона. К объединенному экстракту в делительную воронку добавляют 20 мл гексана и встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз 90% нижнего водно-ацетонового слоя отделяют. После этого эмульсию пограничного слоя разбивают внесением в него малого количества хлористого натрия. Остатки водно-ацетонового слоя собирают, гексановый слой отбрасывают. Объединенный водно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе до объема 150-180 мл и переносят в делительную воронку. Флутриафол переэкстрагируют в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. Нижние органические слои собирают, фильтруя через безводный сульфат натрия. Объединенный экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе. Далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.

2.6.1.3. Сок винограда. 50 мл сока помещают в делительную воронку объемом 500 мл, добавляют 50 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:9 и встряхивают в течение 2-3 мин. Гексановый слой отбрасывают. К собранному водно-ацетоновому слою добавляют 5 мл гексана и интенсивно встряхивают в делительной воронке. После полного разделения фаз собирают водно-ацетоновый слой, гексановый слой отбрасывают. Объединенный экстракт переносят в чистую делительную воронку, добавляют 25-30 мл дистиллированной воды и переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл. Дихлорметановый экстракт фильтруют через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха на роторном испарителе. Далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.

2.6.2. Очистка экстрактов на колонке с флорисилом

Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси гексан-ацетон (3:2). Пипеткой количественно вносят анализируемую пробу в хроматографическую колонку. Колбу ополаскивают еще 2 мл той же смеси и раствор вносят в хроматографическую колонку, затем открывают кран и дают раствору впитаться в сорбент. После этого в колонку вносят 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 2:3, элюат отбрасывают. Флутриафол элюируют 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:5, элюат собирают и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.

2.6.3. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ДЭЗ или аналогичный. Колонка кварцевая капиллярная 30 м х 0,32 мм с неподвижной фазой НР-1 (0,25 мкм).

Температура колонки программируется от 200°С (4 мин) до 220°С со скоростью 10°С/мин.

Температура испарителя 250°С, детектора 280°С.

Скорость газа-носителя (азот) через колонку 3 /мин.

Объем вводимой пробы 2 мкл. Время удерживания флутриафола 10 мин 29 2 с.

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

2.6.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание флутриафола в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

, где

- высота (площадь) пика флутриафола в стандартном растворе, мм (мВ х с);

- высота (площадь) пика флутриафола в анализируемой пробе, мм (мВ х с);

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

Р - навеска анализируемого образца, г;

С - концентрация флутриафола в стандартном растворе, мкг/мл;

и - дозируемые в хроматограф объемы стандартного и анализируемого растворов, мкл.

Концентрацию флутриафола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор флутриафола 50 мкг/мл, разбавляют.

3. Требования техники безопасности

При проведении работы необходимо соблюдать требования Инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-2003. "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

5. Разработчики

Долженко В.И., Цибульская И.А., Карпова Л.М.

Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, г. Санкт-Петербург.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко