Методические указания МУК 4.1.1971-05 "Определение остаточных количеств хлорпрофама в картофельных чипсах методом газожидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Методические указания МУК 4.1.1971-05
"Определение остаточных количеств хлорпрофама в картофельных чипсах методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Дата введения: 1 июля 2005 г.
Введены впервые

2. Метод измерений

Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД) после экстракции из анализируемой пробы ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на колонке оксидом алюминия.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания картофеля.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту в азобензоле не более 5 х 10(-13) г/с, предназначенный для работы с капиллярной колонкой
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +- 0,038 г	ГОСТ 7328
Колбы мерные, вместимостью 100 см3	ГОСТ 1770
Меры массы	ГОСТ 7328
Микрошприц МШ-10М	ТУ 2.883.106
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0, 10 см3	ГОСТ 29227
Пробирки градуированные (с пришлифованной пробкой), вместимостью 10 см3	ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2-го класса точности, вместимостью 25, 50 и 100 см3	ГОСТ 1770
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Хлорпрофам, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 98,5% ("Асита Кемикал")
Алюминий оксид, активированный, нейтральный, для колоночной хроматографии, 50-200 мкм ("Акрос Органикс", Бельгия)
Ацетон, осч	ГОСТ 2306
Ацетонитрил для хроматографии, хч	ТУ-6-09-4326-76
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709
н-Гексан, хч	ТУ-6-09-3375
Метилен хлористый (дихлорметан), хч	ГОСТ 12794
Натрий серно-кислый, безводный, хч	ГОСТ 4166
Натрий хлористый, хч	ГОСТ 4233
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Азот газообразный из баллона, осч
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с	ТУ 64-1-2851-78
Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Воронки делительные, вместимостью 250 и 500 см3	ГОСТ 25336
Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм	ГОСТ 25336
Генератор водорода
Груша резиновая
Аквадистиллятор	ГОСТ 22340
Колбы плоскодонные, вместимостью 250-300 см3	ГОСТ 9737
Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 10, 150 и 250 см3	ГОСТ 9737
Колонка капиллярная НР-50, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм
Компрессор
Насос водоструйный	ГОСТ 10696
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария	ТУ 25-11-917-74
Стаканы химические, вместимостью 100 и 400 см3	ГОСТ 25336
Стекловата
Стеклянная колонка длиной 25 см, внутренним диаметром 8-10 мм
Стеклянные палочки
Установка для перегонки растворителей

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 5)°С и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над небольшим количеством и прокаленным карбонатом калия.

7.1.2. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.3. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.4. Очистка этилацетата

Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

7.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.1. Исходный раствор хлорпрофама для градуировки (концентрация 100 мкг/)

В мерную колбу вместимостью 100 помещают 0,01 г хлорпрофама, растворяют в 50-70 ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 6-ти месяцев.

Растворы N 1-4 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.2.2. Рабочие растворы NN 1-4 хлорпрофама для градуировки (концентрация 1,0-10 мкг/)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 исходного раствора с концентрацией 100 мкг/ (п. 7.2.1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 1-4 с концентрацией хлорпрофама 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 мкг/, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более месяца.

Эти растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения хлорпрофама из исследуемых образцов.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации хлорпрофама в растворе (мкг/), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки NN 1-4.

В испаритель хроматографа вводят по 2 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

7.4. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 4 г оксида алюминия в 15-20 см этилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. После этого колонка готова к работе.

7.5. Проверка хроматографического поведения хлорпрофама на колонке с оксидом алюминия

В кругло донную колбу вместимостью 10 помещают 1 раствора N 4 для градуировки с концентрацией хлорпрофама 10 мкг/ (п. 7.2.2), растворитель упаривают досуха, добавляют 2 этилацетата, перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.4. Промывают колонку 50 этилацетата со скоростью 1-2 капли в сек. Фракционно (по 10 ) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 ацетона, анализируют на содержание хлорпрофама по п. 9.4.

Фракции, содержащие хлорпрофам, объединяют и вновь анализируют.

Рассчитывают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание: проверку хроматографического поведения хлорпрофама следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 26318-84 "Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб" и ГОСТ 28741-90 "Продукты питания из картофеля. Приемка, подготовка проб и методы испытаний".

Отобранные пробы, герметично упакованные в полиэтиленовые пакеты, хранят в темноте при температуре 4-6°С не более месяца.

Перед анализом образцы чипсов измельчают.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция

Образец измельченных чипсов массой 25 г помещают в коническую колбу вместимостью 250-300 , вносят 70 ацетонитрила и помещают на встряхиватель на 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу вместимостью 250 . Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 ацетонитрила и встряхивая каждый раз по 15 минут.

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 250 , добавляют 30 гексана, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и повторяют операцию промывки еще дважды, используя по 30 гексана. Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 и подвергают очистке по п. 9.2.

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Экстракт, полученный по п. 9.1. и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 40°С. Остаток растворяют в 5 ацетона, добавляют 50 дистиллированной воды, обмывают стенки колбы и переносят в делительную воронку вместимостью 250 . Колбу ополаскивают еще раз 50 дистиллированной воды, которую также переносят в делительную воронку.

Вносят в делительную воронку 5 г хлористого натрия, перемешивают для растворения соли, добавляют 30 хлористого метилена, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 . Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 20 хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, и помещенную в круглодонную колбу, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.

9.3 Очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия

Остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2. растворяют в 2-х этилацетата и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.4. Колбу обмывают трижды порциями этилацетата по 2 , которые также наносят на колонку. Хлорпрофам элюируют с колонки 25 этилацетата со скоростью 1-2 капли в сек, собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 40°С. Остаток в колбе растворяют 1 ацетона и анализируют на содержание хлорпрофама по п. 9.4.

9.4. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.

Газовый хроматограф "Кристалл-2000 М", снабженный термоионным детектором.

Колонка капиллярная НР-50, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура детектора: 350°С

испарителя: 200°С.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 110°С, выдержка 1 минута; нагрев колонки по 30 градусов в минуту до температуры 200°С, выдержка 7 минут; нагрев колонки по 30 градусов в минуту до температуры 250°С, выдержка 5 минут.

Скорость воздуха 200 /мин; водорода - 13,4 /мин; газа 3 (азот) - 35 /мин.

Скорость газа 1 (азот): 20 см/сек, давление 70,139 кПа, поток 0,7668 /мин, деление потока 1:6,520, сброс 5 /мин.

Хроматографируемый объем: 2 .

Ориентировочное время выхода хлорпрофама: 10 мин.

Линейный диапазон детектирования 2-20 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор хлорпрофама с концентрацией 10 мкг/, разбавляют ацетоном.

10. Обработка результатов анализа

Содержание хлорпрофама в пробе рассчитывают по формуле:

, где

Х - содержание хлорпрофама в пробе, мг/кг;

А - концентрация хлорпрофама, найденная по градуировочному графику, мкг/;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

m - масса анализируемого образца, г.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

12. Разработчики

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Рогачева С.К. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана); Брагина И.В. (Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора).

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко