Методические рекомендации по лабораторному мониторингу гриппа птиц на территории Российской Федерации (утв. Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору 17 ноября 2008 г.)

Методические рекомендации
по лабораторному мониторингу гриппа птиц на территории Российской Федерации
(утв. Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору
17 ноября 2008 г.)

1. Общие положения

1.1. Лабораторный мониторинг гриппа птиц - комплекс лабораторно-диагностических исследований по выявлению, циркулирующих на территории Российской Федерации, штаммов вируса гриппа птиц.

1.2. Лабораторный мониторинг проводится в рамках мероприятий по предупреждению гриппа птиц на территории Российской Федерации.

1.3. Лабораторно-диагностические исследования проводятся в соответствии с Ветеринарными правилами лабораторной диагностики гриппа А птиц, Правилами по борьбе с гриппом птиц, Правилами по организации и проведению профилактических мероприятий по предупреждению гриппа птиц на территории Российской Федерации.

1.4. Лабораторный мониторинг осуществляется, в соответствии с установленными полномочиями, организациями, входящими в систему государственной ветеринарной службы Российской Федерации.

2. Организация проведения лабораторного мониторинга

2.1. Исследования на грипп птиц проводят в ветеринарных лабораториях, имеющих необходимое оборудование, кадровый состав, диагностические наборы.

2.2. Национальная референтная лаборатория по гриппу птиц ФГУ "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ ВНИИЗЖ) осуществляет контроль за применением стандартизированных диагностических средств и методов во всех ветеринарных лабораториях.

2.3. ФГУ ЦМВЛ является учреждением, осуществляющим методическое руководство деятельностью межобластных ветеринарных лабораторий и ветлабораторий субъектов Российской Федерации (областных, краевых, республиканских) при проведении мониторинга, сбор и обработку данных, составление сводного отчета по результатам исследований на грипп птиц.

2.4. Составление сводного плана мониторинга возлагается на ФГУ Центральную научно-методическую ветеринарную лабораторию. Сводный План мониторинга утверждается руководителем Россельхознадзора.

Ветеринарные лаборатории субъектов Российской Федерации, ФГУ межобластные ветеринарные лаборатории разрабатывают совместно с территориальными управлениями Россельхознадзора и органами управления в ветеринарии в субъектах Российской Федерации, на основании Методических рекомендации по лабораторному мониторингу гриппа птиц в Российской Федерации, план мониторинга по гриппу на следующий календарный год к 1 декабря текущего года. Одновременно с планом субъектовые ветлаборатории составляют и передают в Межобластные ветеринарные лаборатории, данные о потребности в диагностических препаратах для диагностики гриппа птиц (ИФА, РТГА, РДП, ПЦР) с учетом объемов планируемых исследований, птицепоголовья в птицеводческих хозяйствах и населенных пунктах, обследования водоемов и периодичности отбора проб согласно настоящему порядку мониторинга.

ФГУ межобластные ветеринарные лаборатории составляют сводный план по региону обслуживания с учетом собственных исследований и направляют его к 10 декабря текущего года в ФГУ ЦНМВЛ вместе с информацией о потребностях в диагностических наборах.

ФГУ ЦНМВЛ составляет и направляет в Россельхознадзор сводный план мониторинга, информацию о потребности в диагностических наборах для выполнения работ по мониторингу гриппа птиц по каждому региону.

3. Мониторинговые исследования домашней птицы

3.1. Исследованию подлежит птица промышленных стад и племенных птицехозяйств, частного сектора (с индивидуальных подворий), птица, содержащаяся в птицепитомниках, зоосадах, синантропная птица, обитающая на территории птицехозяйств, птица, ввозимая на территорию Российской Федерации, а также при купле-продаже внутри страны, ввозимое на территорию Российской Федерации инкубационное яйцо.

3.2. В период карантина (в течение 21 дня) для исследования на наличие антител к вирусу гриппа птиц типа А отбирают не менее 25 проб сывороток крови от каждой партии птицы (если партия составляет более 1000 особей); при поставке от 10 до 1000 голов птицы - 10 проб; менее 10 - пробы крови отбираются от каждой птицы

3.3. При ввозе на территорию Российской Федерации эмбрионов и инкубационного яйца для контроля на грипп используют метод ПЦР - диагностики. С этой целью отбираются трахеальные и клоакальные смывы от 25 птиц, 30 эмбрионов/инкубационных яиц. Для исследования рекомендуется формировать объединенные пробы: одну пробу из смывов от 5 голов птиц, одну пробу из 5 эмбрионов/ инкубационных яиц.

3.4. Серологическое обследование мелких видов птиц (волнистые попугайчики, канарейки и др.) не проводят, а в период их содержания в карантине (в течение 21 дня) осуществляют отбор проб помета в зависимости от ввозимой партии. Отбор проб рекомендуется проводить индивидуально от каждой птицы или в виде общей пробы от птиц, содержащихся в одной вольере/клетке. В данном случае также можно отбирать клоакальные и/или трахеальные смывы, при этом отбор проб проводится аналогично отбору проб сывороток крови п. 3.2

3.5. Схемы серологического обследования птицеводческих хозяйств и подворий.

В благополучных племенных и товарных птицеводческих предприятиях яичного и мясного направления (куроводческих, индейководческих, гусеводческих и др.) отбирается от каждого стада птицы, содержащейся в одном птичнике (зале корпусе), по 25 проб крови.

В страусоводческих хозяйствах обследованию подлежат 15% от стада взрослой птицы и 10% от молодняка.

Отбор проб в бройлерных хозяйствах проводится в момент убоя птицы, в количестве не менее 25 проб сыворотки крови от стада птицы из одного птичника (зала).

В личных хозяйствах граждан отбирается не менее 25 проб сыворотки крови от птицы из одного населенного пункта, если количество птицы в населенном пункте более 100 голов, при этом необходимо обеспечить сбор проб крови от птицы из разных дворов, если в населенном пункте разведением птицы занимаются одновременно несколько граждан.

В населенных пунктах, где поголовье птицы составляет менее 100 голов, серологическое обследование не проводят. В данных населенных пунктах ведется наблюдение за клиническим состоянием птицы. В случае обнаружения признаков заболевания отбирается материал для лабораторного исследования в соответствии с пунктом 3.7.

На территории крупных птицеводческих хозяйств, комбикормовых предприятий отбирать по 10 проб крови от синантропных птиц (голуби, воробьи и др.).

3.6. В случае получения положительных результатов серологических исследований проводится отбор проб для вирусологических исследований и ПЦР диагностики в соответствии с пунктом 3.7.

3.7. При подозрении на грипп птиц (наличие клинических, патологоанатомических признаков заболевания, внезапном падеже) в стадах домашней птицы рекомендуется проводки" отбор проб для проведения ПЦР диагностики и вирусологических исследований. Для исследований отбираются клоакальные и/или трахеальные смывы, помет, патматериал (головной мозг, легкие, трахея, селезенка, участки кишечника). Отбор и транспортировку трупов птиц, проб биоматериала и патматериал а осуществляют в соответствии с пунктом 7.

4. Мониторинговые исследования дикой птицы

4.1. Мониторинг дикой птицы необходимо проводить сезонно: весна, лето, осень (т.е. весенняя миграция, гнездование после вылупления птенцов, осенняя миграция) с привлечением зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации.

4.2. Во время сезонных совместных экспедиций ветеринарных специалистов, зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации пробы рекомендуется отбирать в местах массового гнездования птиц, зимовок, а также на пути основных миграционных маршрутов. Видовой состав птицы, подлежащей мониторингу, определяется в соответствии с особенностями каждого региона с привлечением специалистов охотоуправлений или зоологов. Исследованиям подвергается синантропные (воробьи, голуби, грачи, вороны), полусинантропные (чайки), а также дикие мигрирующие виды водоплавающих и околоводных птиц (утки, гуси, массовые виды куликов, колониально гнездящиеся цапли и др.). Периодичность отбора проб указана в п. 5. От отловленных птиц рекомендуется отбирать пробы сывороток крови, клоакальные и/или трахеальные смывы. Отловленные нетравмированные птицы, если применялся метод живоотлова, в случае отрицательного результата отпускаются. В случае положительного результата птицы умерщвляются бескровным методом и отправляются в лабораторию для дальнейших исследований. При проведении отстрела птиц или в случае их умерщвления в диагностических целях, берутся клоакальные, трахеальные смывы и пробы патматериала.

Помет от дикой птицы, а также клоакальные, трахеальные смывы и патматериал исследуются методом ПНР.

4.3. Для предупреждения отстрела редких видов птиц в составе совместной экспедиции включается специалист-орнитолог, зоолог или охотовед.

4.4. При выявлении в дикой природе случаев внезапного падежа птиц или в случае обнаружения, при клиническом обследовании птицы на водоемах, характерных клинических признаков болезни, проводится отбор патматериала на вирусовыделение и для ПНР диагностики.

4.5. Положительные пробы из межобластных ветеринарных лабораторий и ветлабораторий субъектов Российской Федерации направляются для дальнейших исследований на грипп - в ФГУ ЦНМВЛ и Национальную референтную лабораторию по гриппу птиц в ФГУ "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ ВНИИЗЖ).

5. Рекомендуемая периодичность отбора проб

5.1. Домашняя птица обследуется: в благополучных регионах - 2 раза в год; в неблагополучных регионах и в угрожаемой зоне - один раз в месяц (каждый птичник, каждый населенный пункт); ввозимая из-за рубежа птица, эмбрионы, инкубационное яйцо - при ввозе, в период карантинирования.

5.2. Дикая птица обследуется: в благополучных регионах - 3 раза в год (весна, лето, осень); в неблагополучных районах - 1 раз в квартал.

6. Рекомендуемые методы исследований

6.1. Иммуноферментный анализ (непрямой метод ИФА для выявления антител к гриппу типа А) - исследуют сыворотки крови с целью выявления антител к вирусу гриппа птиц у кур из птицеводческих предприятий, фермерских хозяйств, населенных пунктов и ввозимых из-за рубежа; патологический материал, экстраэмбриональную жидкость зараженных куриных эмбрионов на наличие вируса гриппа птиц.

6.2. Иммуноферментный анализ (конкурентный метод ИФА для выявления антител к гриппу птиц Н5) - исследуются сыворотки крови различных видов птиц на наличие антител к гриппу птиц Н5.

6.2. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) - исследуют сыворотки крови кур реагирующих положительно в ИФА; сыворотки крови других видов птиц (гусей, уток, индеек, голубей, дикой птицы и др.).

6.3. Реакция диффузионной преципитации (РДП) - исследуют сыворотки крови с целью выявления антител к вирусу гриппа у птиц различных видов. РДП может быть использована для выявления вируса гриппа птиц при исследовании патматериалов и для идентификации изолятов при проведении вирусологических исследований.

6.4. Полимеразноцепная реакция (ПЦР) - исследования проводят:

при внезапном падеже птицы или характерных для гриппа клинических признаках;

при получении у птиц положительных результатов серологических исследований в ИФА и РТГА;

с целью определения типа гемагглютинина и нейраминидазы выделенных штаммов (ВНИИЗЖ, ВГНКИ).

при исследовании мяса птицы, полуфабрикатов, субпродуктов, яйца, куриных эмбрионов;

при исследовании комбикормов и мясокостной муки.

6.5. Серологические и вирусологические исследования рекомендуется проводить согласно действующей нормативной документации и наставлений к диагностическим наборам. РТГА проводится с обязательной постановкой контроля проб сывороток крови на спонтанную агглютинацию. Сыворотка крови обрабатывается обязательно от термолабильных и, в случае необходимости, от термостабильных ингибиторов.

6.6. Диагностические наборы (ИФА, РТГА, РДП и ПЦР) получают ФГУ ЦНМВЛ, межобластные ветлаборатории и ветлаборатории субъектов Российской Федерации в соответствии с заявками.

7. Порядок отбора и доставки проб

7.1. Отбор проб сывороток крови и патологического материала от всех категорий птицы организуют совместно специалисты СББЖ и районных, межрайонных, зональных ветеринарных лабораторий или диагностических кабинетов. Отбор проб осуществляет ветеринарный специалист, имеющий специальную подготовку.

7.2. Отбор проб сывороток крови. Отбор проб крови у птиц осуществляется в соответствии с планом мониторинга из подкрыльцовой вены или при забое птицы, взятие проб крови у больной или подозреваемой в заражении птицы проводят с соблюдением требований безопасности. Транспортировка проб сывороток крови в лабораторию осуществляется в стеклянных или пластиковых пробирках, закрытых крышками (пробками). Пробирки маркируются. В сопроводительном документе указывается: вид и возраст птицы, наименование предприятия и адрес (ФИО владельца, адрес), количество проб, дата отбора проб.

7.3. Отбор проб патологического и биологического материалов. При подозрении на грипп птиц (наличие клинических, патологоанатомических признаков заболевания, внезапного падежа) осуществляют отбор проб патматериала: головной мозг, легкие, трахея, селезенка, участки кишечника, почки, сердце. От каждого стада птицы отбирают для исследований 5-10 трупов, или патматериал от 5-10 трупов, клоакальные и/или трахеальные смывы от 10-15 голов (смывы от 5 голов можно объединять в одну пробу), 1 пробу помета от стада. Пробу помета отбирают: примерно, по 1 грамму помета из 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест на крест.

Доставку трупов птиц и отобранных проб патматериала (органов, тканей) в лаборатории осуществляют в кратчайшие сроки, во влагонепроницаемой таре герметично упакованной. При доставке проб в течение 24 часов отобранные органы и ткани помещают в пластиковые контейнеры, герметичные целлофановые пакеты, упаковывают в широкогорлые термосы (небьющиеся) с сухим льдом или хладоэлементами.

Если доставка образцов длится более 24 часов, они охлаждаются и доставляются на льду (можно использовать хладэлементы). Хранение суспензий из органов возможно до 4 дней при 4°С. Для увеличения сроков хранения образцы хранят при температуре -80°С. Хранение при 20°С может отрицательно сказаться на выделении вируса.

Образцы фекалий рекомендуется хранить и осуществлять их доставку при 4°С.

Клоакальные и трахеальные смывы можно доставлять в сухом виде или в транспортных средах.

7.4. Отбор проб биоматериала (трахеальные и клоакальные смывы, помет) осуществляется в целях мониторинговых исследований о г клинически здоровой птицы, птицы подозреваемой в заражении вирусом гриппа, и осуществляется аналогично отбору проб сывороток крови по пункту 3.2.

В населенных пунктах отбираются клоакальные и/или трахеальные смывы от 5-10 домашних птиц (при наличии в населенном пункте водоплавающей птицы отбор проб проводится, прежде всего, от данных видов).

Сбор проб помета осуществляется с 5 подворий одного населенного пункта (5 проб).

В случае выявления падежа дикой птицы или обнаружения диких птиц с характерными клиническими признаками заболевания вблизи населенных пунктов, расположенных у водоемов, отбор проб патологического материала осуществляют в соответствии с пунктом 7.3

Для взятия и транспортировки смывов используют транспортные среды. Правила пересылки смывов в соответствии с пунктами 7.2 и 7.3.

7.5. Отбор проб от дикой птицы осуществляется в соответствии с п. 4 и п.п. 7.2., 7.3., 7.4., с привлечением зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации.

При направлении на исследование проб сывороток крови, патматериалов или биоматериалов от дикой птицы необходимо указывать вид птицы, место отбора проб, количество проб, примерный возраст (взрослая, молодняк), дату отбора.

7.6. Пробы сыворотки крови и патматериал направляют нарочным с сопроводительным письмом в ветлаборатории субъектов Российской Федерации или в межобластные ветеринарные лаборатории.

7.7. Все положительные на грипп птиц пробы патматериалов, первичные изоляты, полученные при вирусологических исследованиях, в т.ч. изоляты низкопатогенных вирусов гриппа птиц, из межобластных ветеринарных лабораторий и ветлабораторий субъектов Российской Федерации направляются для дальнейших исследований на грипп в ФГУ ЦНМВЛ. Затем из ФГУ ЦНМВЛ в Национальную референтную лабораторию по гриппу птиц в ФГУ "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ ВНИИЗЖ).

8. Отбор проб мяса птицы, полуфабрикатов, субпродуктов, яйца, комбикормов, мясокостной муки для исследований методом ПЦР

8.1. Исследование мяса птицы, полуфабрикатов, субпродуктов из мяса птицы, комбикормов и мясокостной муки на грипп птиц проводится методом ПЦР в регионах, неблагополучных по данному заболеванию, и при их импорте из других стран.

8.2. Отбор проб на исследования проводится в соответствии со следующими нормативными документами: ГОСТ 28825-90 "Мясо птицы. Приемка"; ГОСТ 7702.2.0-95, ГОСТ Р 50396.0-92 "Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям"; ГОСТ 52121-03 "Яйца куриные пищевые. Технические условия"; "Правила ветеринарно-санитарной экспертизы яиц куриных, утиных и гусиных"; "Мука животного происхождения. Методы испытаний"; "Правила бактериологического исследования кормов".

ГАРАНТ:

Приказом Росстандарта от 29 июля 2013 г. N 460-ст взамен ГОСТ Р 50396.0-92 с 1 июля 2014 г. утвержден ГОСТ Р 50396.0-2013 "Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям"

9. Обследование вакцинированной птицы в населенных пунктах на грипп птиц

9.1. Напряженным считается иммунитет, если у вакцинированной птицы получены титры антител в РТГА от 1:16 и выше более чем в 80% проб или при исследовании в ИФА положительные титры антител также выявлены в 80% исследованных проб. Антитела к вирусу гриппа птиц у контрольной группы должны отсутствовать.

9.2. Обследование вакцинированного поголовья птицы в населенных пунктах проводится планово на 28 день после вакцинации серологическими методами (РТГА, РДП, конкурентным методом ИФА на грипп птиц Н5). Отбор проб осуществляется в соответствии с пунктами 3.6., 3.7.

Оценка напряженности поствакцинального иммунитета осуществляется в соответствии с пунктом 9.1.

9.3. Для ПЦР диагностики отбирается не менее 60 проб помета для исследований по п. 7.3 и/или по 25 проб клоакальных и/или трахеальных смывов с одного населенного пункта.

9.4. При получении положительных результатов при исследованиях методом ПЦР проводится отбор проб для вирусологического исследования.

10. Отчет

10.1. В случае получения положительных результатов при лабораторных исследованиях на грипп птиц ветлаборатории субъектов Российской Федерации и межобластные ветлаборатории направляют срочный отчет по форме 4 Вет-Б:

в ФГУ ЦНМВЛ,

главному государственному ветеринарному инспектору района или города,

главному государственному ветеринарному инспектору субъекта Российской Федерации,

руководителю территориального управления Россельхознадзора в субъекте Российской Федерации, уполномоченному для осуществления надзора в области ветеринарии.

10.2. ФГУ ЦНМВЛ представляет сведения по форме 4 Вет-Б в Россельхознадзор.

10.3. Квартальный отчет о проделанной работе, проводимой в соответствии с планом мониторинговых исследований, ветлаборатории субъектов РФ передают в ФГУ межобластные ветлаборатории к 10 числу следующего квартала.

Межобластные ветеринарные лаборатории представляют квартальный отчет в ФГУ ЦНМВЛ к 20 числу следующего квартала.

10.4. Формы отчетов и рекомендуемый план проведения эпизоотологического мониторинга прилагаются.

10.5. По поручению Россельхознадзора ФГУ ЦНМВЛ может собирать дополнительные сведения о проделанной работе по мониторингу гриппа птиц в субъектах Российской Федерации в течение календарного года.

10.6. Ветеринарные лаборатории субъектов Российской Федерации и межобластные ветеринарные лаборатории передают ежемесячно данные о результатах проведения лабораторного мониторинга: количестве обследованных хозяйств, населенных пунктов и т.д., количестве проведенных исследований, количестве полученных положительных результатов главному государственному ветеринарному инспектору данного субъекта Российской Федерации.

10.7. ФГУ ЦНМВЛ представляет сводный отчет о результатах проведения мониторинга в Россельхознадзор через 10 дней после поступления последнего отчета от межобластных ветлаборатории, данные сведения передаются также в Национальную референтную лабораторию по гриппу птиц.

Россельхознадзор. тел/факс 975-58-50; 207-86-20, 207-51-43; E-mail: info@vet.mcx.ru, http://www.mcx.ru.

Россельхоз тел/факс: 975-54-23 E-mail: n.matohina@acx.mcx.ru

ФГУ ЦНМВЛ: тел/факс 700-01-37, 700-35-22; Россельхознадзор

11. Требования к технике безопасности

11.1. Исследования на грипп птиц рекомендуется проводить в ветеринарных лабораториях, отвечающих требованиям безопасности, обеспеченных необходимым оборудованием, диагностическими наборами и квалифицированными кадрами.

11.2. При проведении исследований на грипп птиц необходимо обеспечить требования безопасности при работе с инфицированным или условно инфицированным материалом в соответствии с требованиями СП 1.3.1285-03, МУ 1.3.1794-03.

Рекомендации разработаны ФГУ "Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория" совместно с ФГУ "Федеральный центр охраны здоровья животных".

Разработчики: Власов Н.А., Калмыков М.В., Виткова О.Н., Ирза В.Н., Myдрак Н.С., Фролов А.В., Белоусова Р.В., Михайлова В.В.

Рекомендации совершенствуются в соответствии с накопленным практическим опытом и научными достижениями.

Заместитель Руководителя Россельхознадзора

Н.А. Власов