Приложение N 2. Экспресс-метод диагностики картофельной болезни по определению активности споровых бактерий в хлебопекарном сырье и готовой продукции

Приложение N 2

Экспресс-метод диагностики картофельной болезни по определению активности споровых бактерий в хлебопекарном сырье и готовой продукции

Экспресс-метод определения активности споровых бактерий в хлебопекарном сырье (в пшеничной, подольской, овсяной муке, пшеничных отрубях, прессованных дрожжах и др.) и готовой продукции позволяет в течение 6 часов выявить активность споровых бактерий, вызывающих картофельную болезнь хлеба. Метод относится к группе биохимических и основан на определении протеолитической (желатиназной) активности споровых бактерий.

1. Отбор проб и подготовка их к испытанию

1.1. Отбор проб производится по ГОСТ 27668-88, ГОСТ 171-81, ГОСТ 5667-65.

1.2. Из лабораторного образца выделяют для определения активности споровых бактерий не менее 100 г.

Зерно пшеницы предварительно размалывают на лабораторной мельнице в течение 10 мин. В хлебе и хлебобулочных изделиях анализируют только мякиш, муку и прессованные дрожжи анализируют из средней пробы.

1.3. Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные общего назначения с допустимой погрешностью

взвешивания +- 0,05 г;

Термостат электрический суховоздушный ТС-80М-2;

Секундомер;

Баня водяная;

Электроплитка по ГОСТ 14919-83;

Термометр спиртовой стеклянный лабораторный по ГОСТ 28498-90;

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76;

Цилиндр мерный вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770-74;

Стаканчики мерные вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770-74;

Пипетки вместимостью 1 см3 по ГОСТ 25336-82;

Чашки Петри ГОСТ 25336-82;

Фотопленка черно-белая негативная ФН 32, ФН 64, ФН 125;

Картофельные хлопья (пюре) без сухого молока, эмульгаторов и консервантов;

Глюкоза ГОСТ 6038-79;

Пинцет.

Допускается применение аналогичного отечественного и импортного оборудования, лабораторной посуды и реактивов, метрологические характеристики которых соответствуют указанным параметрам.

2. Методика

В 2 стеклянных стаканчика объемом 100 см3 вносят по 3 г картофельных хлопьев (картофельного пюре), 0,5 г глюкозы и по 5 г анализируемого образца, наливают по 50 мл водопроводной воды с температурой 35-37°С, тщательно перемешивают и ставят на водяную баню (уровень воды в водяной бане и в пробе должен быть одинаковым).

При помешивании постепенно доводят температуру смеси до 70-75°С и выдерживают при данной температуре в течение 5 мин. После нагревания на водяной бане анализируемые образцы в стеклянных стаканчиках охлаждают до 37°С, закрывают часовым стеклом или крышкой, помещают в термостат на 37°С и выдерживают в течение 5 ч. От фотопленки по ширине отрезают полоски по 1 см, раскладывают по 2 штуки на дно 2-х чашек Петри внутренним слоем вверх, вокруг полосок пипеткой наливают 1-2 мл воды для создания в камере определенного уровня влажности. С помощью дырокола готовят кружки фильтровальной бумаги и пинцетом по 1 кружочку вносят в испытуемый раствор. Затем кружочки по 2 штуки раскладывают на каждой полоске фотопленки в чашках Петри.

Чашки Петри закрывают крышками и помещают в термостат с температурой 37°С, отмечают время начала реакции разжижения желатины под действием протеолитических ферментов споровых бактерий.

Через каждые 15 мин в течение 1,5-2 часов наблюдают за появлением на поверхности фотопленки прозрачных пятен. Для этого