Приложение N 2. Экспресс-метод диагностики картофельной болезни по определению активности споровых бактерий в хлебопекарном сырье и готовой продукции

Приложение N 2

Экспресс-метод диагностики картофельной болезни по определению активности споровых бактерий в хлебопекарном сырье и готовой продукции

Экспресс-метод определения активности споровых бактерий в хлебопекарном сырье (в пшеничной, подольской, овсяной муке, пшеничных отрубях, прессованных дрожжах и др.) и готовой продукции позволяет в течение 6 часов выявить активность споровых бактерий, вызывающих картофельную болезнь хлеба. Метод относится к группе биохимических и основан на определении протеолитической (желатиназной) активности споровых бактерий.

1. Отбор проб и подготовка их к испытанию

1.1. Отбор проб производится по ГОСТ 27668-88, ГОСТ 171-81, ГОСТ 5667-65.

1.2. Из лабораторного образца выделяют для определения активности споровых бактерий не менее 100 г.

Зерно пшеницы предварительно размалывают на лабораторной мельнице в течение 10 мин. В хлебе и хлебобулочных изделиях анализируют только мякиш, муку и прессованные дрожжи анализируют из средней пробы.

1.3. Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные общего назначения с допустимой погрешностью

взвешивания +- 0,05 г;

Термостат электрический суховоздушный ТС-80М-2;

Секундомер;

Баня водяная;

Электроплитка по ГОСТ 14919-83;

Термометр спиртовой стеклянный лабораторный по ГОСТ 28498-90;

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76;

Цилиндр мерный вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770-74;

Стаканчики мерные вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770-74;

Пипетки вместимостью 1 см3 по ГОСТ 25336-82;

Чашки Петри ГОСТ 25336-82;

Фотопленка черно-белая негативная ФН 32, ФН 64, ФН 125;

Картофельные хлопья (пюре) без сухого молока, эмульгаторов и консервантов;

Глюкоза ГОСТ 6038-79;

Пинцет.

Допускается применение аналогичного отечественного и импортного оборудования, лабораторной посуды и реактивов, метрологические характеристики которых соответствуют указанным параметрам.

2. Методика

В 2 стеклянных стаканчика объемом 100 см3 вносят по 3 г картофельных хлопьев (картофельного пюре), 0,5 г глюкозы и по 5 г анализируемого образца, наливают по 50 мл водопроводной воды с температурой 35-37°С, тщательно перемешивают и ставят на водяную баню (уровень воды в водяной бане и в пробе должен быть одинаковым).

При помешивании постепенно доводят температуру смеси до 70-75°С и выдерживают при данной температуре в течение 5 мин. После нагревания на водяной бане анализируемые образцы в стеклянных стаканчиках охлаждают до 37°С, закрывают часовым стеклом или крышкой, помещают в термостат на 37°С и выдерживают в течение 5 ч. От фотопленки по ширине отрезают полоски по 1 см, раскладывают по 2 штуки на дно 2-х чашек Петри внутренним слоем вверх, вокруг полосок пипеткой наливают 1-2 мл воды для создания в камере определенного уровня влажности. С помощью дырокола готовят кружки фильтровальной бумаги и пинцетом по 1 кружочку вносят в испытуемый раствор. Затем кружочки по 2 штуки раскладывают на каждой полоске фотопленки в чашках Петри.

Чашки Петри закрывают крышками и помещают в термостат с температурой 37°С, отмечают время начала реакции разжижения желатины под действием протеолитических ферментов споровых бактерий.

Через каждые 15 мин в течение 1,5-2 часов наблюдают за появлением на поверхности фотопленки прозрачных пятен. Для этого снимают с чашек Петри крышки и стеклянной палочкой осторожно отодвигают кружочки фильтровальной бумаги на фотопленке, а после снятия показаний помещают на место. Для более достоверного подтверждения наличия или отсутствия зоны разжижения желатины рекомендуется просматривать пленку в световом потоке со стороны дна чашки Петри. В этом случаи за счет повышенной освещенности зона разжижения выявляется более четко.

При наличии зоны разжижения на поверхности фотопленки отмечают продолжительность реакции с момента появления первых прозрачных пятен и по представленной ниже таблице устанавливают активность споровых бактерий и степень заболевания хлеба при использовании анализируемого хлебопекарного сырья. После этого наблюдение прекращается.

В случае отсутствия зоны разжижения желатины на фотопленке кружочки фильтровальной бумаги возвращают на место, чашку Петри закрывают крышкой, помещают в термостат и продолжают наблюдение.

Таблица

Пересчет результатов определения активности споровых бактерий по реакции на фотопленке на степень поражения хлеба картофельной болезнью

Продолжительность реакции разжижения желатины на фотопленке	Степень поражения хлеба
	Картофельной болезнью
15 мин.	Очень сильная через 12 ч
от 15 до 30 минут	Очень сильная степень. Через 18-20 часов
от 45 до 60 минут	Сильная степень. Через 22-24 часа
от 75 до 90 минут	Средняя степень. Через 24 часа
от 105 до 120 минут	Средняя степень. Через 36 часов