Приложение 1. Общие требования к разработке ПДК веществ в водах водных объектов рыбохозяйственного значения

Приложение 1
к Методическим указаниям по
разработке нормативов
качества воды водных объектов
рыбохозяйственного значения, в
том числе нормативов
предельно допустимых
концентраций вредных веществ
в водах водных объектов
рыбохозяйственного значения

Общие требования
к разработке ПДК веществ в водах водных объектов рыбохозяйственного значения

1. Оценка класса опасности вещества

1.1. В основу классификации опасности вещества положены показатели, характеризующие различную степень опасности для водных биоресурсов химических соединений, загрязняющих воду водных объектов рыбохозяйственного значения, в зависимости от токсичности, степени накопления в организмах, способности вызывать отдаленные эффекты, лимитирующего показателя вредности.

1.2. Класс опасности вещества учитывает:

а) степень опасности вещества в связи с его появлением в водных экосистемах;

б) приоритет при контроле загрязнения среды;

в) обоснование рекомендаций о замене хозяйственного использования высоко опасных веществ на менее опасные.

1.3. Выявляются четыре класса опасности веществ, загрязняющих воду водных объектов рыбохозяйственного значения и токсичных для водных биоресурсов. При отнесении вещества к определенному классу опасности учитывается токсичность вещества по величине его ПДК, стабильность этого вещества в водном объекте и его кумулятивные свойства. Отнесение проводится по любому из указанных признаков, одному или нескольким.

1-й класс - чрезвычайно опасные вещества, лимитируемые по токсикологическому и рыбохозяйственному ЛПВ. Степень вредного воздействия на водные биоресурсы очень высокая.

Выделяется по следующим признакам:

а) ПДК вещества ниже 0,00001 мг/л;

б) материальная кумуляция высокая или сверхвысокая (коэффициент накопления больше 200);

в) стабильность вещества или токсичных продуктов его распада превышает 180 суток при 20°С ().

К данному классу относятся вещества исключительно антропогенного происхождения (ксенобиотики, не имеющие аналогов в природе).

2-й класс - высоко опасные вещества, лимитируемые по токсикологическому и рыбохозяйственному ЛПВ. Степень вредного воздействия на водные биоресурсы высокая.

Выделяется по следующим признакам:

а) ПДК вещества от 0,0001 до 0,00001 мг/л (вещества, для которых принимается значение ПДК - "отсутствие", относятся ко второму классу);

б) материальная кумуляция умеренная ( от 51 до 200). В отдельных случаях слабовыраженная ( 1,1-50);

в) стабильность вещества или токсичных продуктов его распада - 60-180 суток при 20°С (). Для северных районов, где преобладают низкие температуры воды, эти вещества лимитируются по классу 1.

3-й класс - опасные вещества, лимитируемые в основном по токсикологическому, иногда по рыбохозяйственному (в том числе и органолептическому) ЛПВ. Степень вредного воздействия на водные биоресурсы средняя.

Выделяется по следующим признакам:

а) ПДК вещества от 0,01 до 0,0001 мг/л;

б) материальная кумуляция слабовыраженная ( 1,1-50). Вещества не вызывают видимых патологических явлений и легко выводятся из организма;

в) стабильность вещества или токсичных продуктов его распада менее 60 суток при 20°С ().

К данному классу относятся как ксенобиотики, так и вещества природного происхождения (например, сероводород, сульфиды и др.).

4-й класс - умеренно опасные вещества, лимитируемые по любому ЛПВ. Степень вредного воздействия на водные биоресурсы низкая.

Выделяются по следующим признакам:

а) ПДК вещества выше 0,01 мг/л;

б) не обладают кумулятивными свойствами;

в) стабильность меньше 10 суток при 20°С ().

К данному классу относятся частично ксенобиотики (обычно биологически относительно инертные), но в значительной степени - вещества природного происхождения.

В 4-м классе выделяются вещества (4-й класс "экологический" - 4э), действие которых проявляется в изменении экологических условий в водном объекте. Это вещества, входящие в состав органики сапробного типа, компоненты минерализации природных вод, биогенные вещества и др.

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

1.1 Если из трех показателей, характеризующих класс опасности вещества (ПДК, стабильность, степень кумуляции), два последних являются более жесткими величинами при температуре °С, чем указано для класса опасности вещества в соответствии со значением его ПДК, тогда класс опасности данного вещества ужесточается на единицу.

1.2 В связи с тем что Россия расположена в различных климатических зонах, учитывается температурный фактор прогрева водных объектов в течение года, и при необходимости класс опасности при высокой среднегодовой температуре воды (20°С) можно снижать, а при более низкой температуре воды (10°С и ниже) повышать, так как в этом случае деградация вещества соответственно увеличивается или замедляется в 3-10 раз.

2. Требования к приготовлению растворов исследуемых веществ при разработке ПДК

2.1 Все вещества (индивидуальные и смесевые) независимо от их растворимости в воде (полной, частичной или отсутствие таковой) должны исследоваться по единой схеме.

2.2 Исходные (маточные) растворы высокой концентрации готовят на дистиллированной воде при установлении норматива вещества для пресноводных водных объектов.

2.3 Исследуемые концентрации веществ (растворимых в воде) готовят из исходного раствора на той воде, которая используется для содержания тест-объекта.

Для стабильных веществ возможно приготовление исходных растворов высокой концентрации с последующим приготовлением рабочих растворов на протяжении срока, за который в исходном растворе концентрация вещества практически не меняется.

Для нестабильных веществ, когда концентрация их быстро изменяется в растворе, исходные растворы готовят регулярно к каждой очередной замене растворов в экспериментальных сосудах.

2.4 Нерастворимые в воде вещества (минеральные и органические порошки; маслянистые вещества; масла, жиры и их формы; смолистые, вязкие и клейкие органические вещества), как правило, являются высокостабильными.

Подход к созданию опытных концентраций должен быть всегда индивидуальным в отношении каждого из вышеуказанных веществ - в зависимости от его формы, химической природы и физико-химических свойств.

2.5 При исследовании нерастворимых в воде веществ важнейшими показателями будут органолептические - образование на поверхности воды мелких масляных шариков, пленки, снижение прозрачности и др., а также гидрохимические и микробиологические показатели (сапрофитная микрофлора, ).

2.6 Маслянистые вещества. Исходный раствор готовится в момент постановки опыта. Навеска таких веществ помещается в определенное количество воды и размешивается на магнитной мешалке при 1000 об/мин не менее 1-2 ч. Образуется раствор определенной мутности. Полученную мелкодисперсную водно-маслянную эмульсию используют для приготовления опытных концентраций заданного диапазона. При этом каждую опытную емкость перемешивают в течение 1 минуты для образования гомогенной среды, затем вносят тест-объекты.

2.7 Смолистые, вязкие и клейкие вещества. Исходный раствор вещества готовят аналогично тому, как указано в п. 2.6 настоящих Методических указаний. Навеска вещества должна постепенно, путем подогрева или без него, механическим путем дробиться и растираться до образования максимально однородной массы с водой. Ультразвуковые мешалки полностью гомогенизируют вещество в воде. Полученный исходный раствор используют для приготовления опытных концентраций как указано в п. 2.6 настоящих Методических указаний.

2.8 Твердые вещества (порошки, гранулы и т.п.), не смешиваемые с водой (всплываемые на поверхность или осаждающиеся на дно).

Навеску вещества необходимо тщательно растереть в ступке с небольшим количеством воды до образования однородной гомогенной массы. Продолжая растирание, в ступку постепенно добавлять все большее количество воды. Полученную водную суспензию вещества переливают из ступки в мерную колбу, ступку несколько раз ополаскивают чистой водой и переливают в ту же мерную колбу. Затем в мерную колбу доливают чистую воду до метки, закрывают пробкой, встряхивают. Полученную суспензию используют для приготовления опытных концентраций заданного диапазона. При этом в толще воды опытного сосуда большая часть препарата равномерно распределяется. Часть вещества оседает на дно или всплывает на поверхность. Периодически растворы перемешивают, встряхивая опытный сосуд.

2.9 Газообразные вещества (на примере метана, опыт в закрытых сосудах). Исходный раствор газа для проведения опытов с фитопланктоном готовят на дистиллированной воде, далее разбавляют его до нужной концентрации культуральной средой. Для проведения опытов на других трофических звеньях исходный раствор газа готовят на контрольной воде (отстойной водопроводной, аквариумной; природной или искусственной морской), разбавляя далее этой же водой до нужной концентрации.

Для приготовления исходных растворов газа используют пластиковые бутыли емкостью 5л, заливая их соответствующей контрольной или дистиллированной водой. Бутыль закрывают пробкой с двумя отверстиями, в которые вставлены трубки длиной почти до дна сосуда. Трубки имеют зажимы. Газ с помощью редуктора из газового баллона подается в сосуд через одну из трубок. При этом 1/3 воды вытесняется из бутыли через вторую трубку, над водой оказывается только данный газ. Растворение газа в воде происходит при барбатации и встряхивании бутыли. Аналитическое определение концентрации исходного раствора газа проводят газохроматографическим методом.

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

3.0. Искусственную морскую воду (соленость 34) готовят внесением соответствующих солей в дистиллированную воду, аэрируют ее 10-12 ч, отстаивают 2 недели ("старение воды"). Используют искусственную морскую воду при токсикологических исследованиях только после ее "старения". До нужной солености ее разбавляют дистиллированной водой.

рН морской природной или искусственной воды имеет щелочную реакцию, характеризуется величинами в границах 7,8-9.

3. Определение требований к оценке стабильности вещества и стабильности его токсичности в водной среде

3.1. Химико-аналитическое исследование

3.1.1. Время, в течение которого вещество разрушается или улетучивается из раствора, характеризует его стабильность (устойчивость). На основании аналитических определений вычисляют время убывания концентрации вещества в растворе на 95%. Химико-аналитические определения проводят в лабораториях, аккредитованных Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (статья 5, Федерального закона от 26 июня 2008 N 102-ФЗ "Об обеспечении единства измерений" (Собрание законодательства Российской Федерации, 2008, N 26, ст. 3021).

Метод химического анализа вещества в воде предоставляется заказчиком разработки норматива ПДК вещества.

До начала проведения исследований проводят подготовку необходимого оборудования, приборов, посуды и реактивов согласно методу анализа.

Для исследований используют 8 стеклянных емкостей объемом не менее 20 . Число емкостей соответствует определенному дню исследований.

Емкости наполняют отстоянной природной профильтрованной водой пресноводного водного объекта (природной или искусственной морской водой соленостью 20-34). В воде, заливаемой в емкости для приготовления растворов исследуемого вещества, определяют его фоновое содержание.

Для создания в емкостях исходной исследуемой концентрации вещества хорошо растворимого в воде, соответствующие его навески вносят непосредственно в подготовленные емкости с водой и тщательно перемешивают. При наличии фонового содержания исследуемого вещества в воде, в опытном растворе учитывается суммарная концентрация вещества при внесении в воду. При выборе концентраций для оценки стабильности меньшая из них должна быть как минимум на 2 порядка выше чувствительности метода.

Для исследования веществ не растворимых или мало растворимых в воде используют емкости объемом менее 20 (малые емкости) с целью проведения полной экстракции вещества в сосуде (учитывая осаждение вещества на стенках сосуда).

Число емкостей соответствует определенному дню исследований.

Опыты проводят в емкостях с открытой поверхностью, при температуре °С и при естественном освещении. Исследованию подвергаются в двух повторностях три концентрации вещества, меньшая из которых на порядок выше чувствительности метода.

Перед каждым отбором проб для анализа, воду в емкостях тщательно перемешивают. Отбор проб и анализ их проводят после приготовления раствора (исходная концентрация - 0 сутки), затем на 1, 3, 5, 7, 10, 15, 20 и 30 сутки от начала эксперимента. Усредненные результаты анализа по повторностям за каждые сутки исследования вносят в таблицу 3.1.1, где представлены данные для одной концентрации.

Таблица 3.1.1.

Динамика распада вещества в воде в течение 30 суток, мг/л

Исходная концентрация, мг/л	Экспозиция раствора вещества, сутки
	1	3	5	7	10	15	20	30
	Концентрация вещества в растворе, мг/л
10	10	10	9	8	7	6	5	4

3.1.2. Расчет стабильности проводят методом регрессии с учетом того, что убывание концентрации вещества в растворах обычно имеет экспоненциальный характер и описывается уравнением:

где С - концентрация вещества в момент определения (мг/л);

Со - исходная концентрация (мг/л);

t - время (сутки);

- константа скорости убывания вещества в растворе (сутки).

Принимаем ; ; t=х; , получаем уравнение

"а" и "b" вычисляем методом наименьших квадратов по уравнениям:

где n - число определений во времени.

На основании расчетов определяют время 95%-го распада вещества в воде. По времени 95%-го распада вещества в водной среде классифицируют его стабильность и определяют коэффициент запаса (Таблица 3.1.2.).

Этот же показатель может быть определен и графически. С этой целью строят график убывания концентрации вещества. На осях откладывают время и логарифм концентрации. Из точки на прямой, соответствующей логарифму 5% вещества от исходного уровня, опускают перпендикуляр. Точка пересечения его с осью времени и определит срок разрушения 95% вещества.

3.1.3. По степени стабильности в водной среде препарат относят к одной из шести групп, каждой из которых соответствует определенный коэффициент запаса (), приведенный в таблице 3.1.2.

Таблица 3.1.2.

Классификация* веществ по их стабильности в водной среде ( = 95%)

Группы	Стабильность	Время 95%-го распада, сутки	Коэффициент запаса (К_c)
1	Малая	до 10	1,0
2	Умеренная	11-60	2,5
3	Средняя	61-90	7,5
4	Высокая	91-180	13,5
5	Очень высокая	181-365	27,0
6	Сверхвысокая	более года	-

Примечание: * Методические указания по гигиенической оценке новых пестицидов. Киев: ВНИИГИНТОКС, 1969 г.)

3.1.4. Стабильность вещества учитывают: при определении класса опасности вещества (п. 1, Приложения 1 к настоящим Методическим указаниям), коэффициента запаса - при вынесении решения о величине ПДК для пестицидов.

3.2. Токсикологическое исследование

3.2.1 Необходимость исследования стабильности токсичности обусловлена тем, что химико-аналитические определения не позволяют оценить остаточную суммарную токсичность вещества и продуктов его превращения. Оценку остаточной токсичности проводят методами биотестирования. В качестве тест-объекта рекомендуется использовать организмы зоопланктона (например, одновозрастные дафнии - для пресноводных водных объектов). Возможно использование в качестве тест-объекта других представителей трофической цепи, например, рыб (личинки, мальки, сеголетки).

3.2.2 Исследованию подвергается одна концентрация вещества - за 24 ч, которая устанавливается для организма в соответствии с общими требованиями для опытов на острую токсичность вещества (п. 4.1.4 Приложения 2 к настоящим Методическим указаниям).

3.2.3 Раствор вещества данной концентрации ( за 24 ч) вносят в восемь емкостей. Каждая емкость соответствует постановке эксперимента в определенный день исследований.

3.2.4 На исходные (0) сутки, далее на 3, на 5, на 7, на 10, на 15, на 20 и на 30 сутки от начала эксперимента в соответствующие емкости вносят по одинаковому количеству тест-объектов (не менее 10 экземпляров). Перед каждым внесением тест-объектов в емкость с раствором, емкость тщательно перемешивают. Через 24 ч после внесения организмов в емкость, учитывают число погибших и удаляют их из емкости.

Опыты проводят в 3-кратной повторности. Каждому опыту соответствует контроль.

3.2.5 Полученные экспериментальные данные по соответствующим суткам исследования усредняют по повторностям и рассчитанные проценты погибших экземпляров тест-объекта вносят в таблицу 3.2.1., где представлены данные по динамике гибели тест-организмов за 30 суток в растворе вещества с за 24 ч, равной 10 мг/л.

Таблица 3.2.1.

Гибель тест-организмов (%) при убывании исходной концентрации вещества (ЛК50) по суткам экспозиции (среднее 3-х повторностей)

Концентрация, ЛК_50 за 24 часа 10 мг/л	Сутки исследований
	0	3	5	7	10	15	20	30
	Гибель тест-объекта, %
	50	46,6	40	30	16,6	3,3	0	0
	Концентрация вещества в соответствии с ее убыванием по суткам, мг/л
	10	9,3	8,0	6,0	3,3	0,66	0	0

3.2.6 На основании полученных данных по гибели тест-организмов в соответствующей емкости, методом пропорции определяется концентрация вещества для каждой величины процента погибших тест-объектов в эксперименте:

     так, 50,0% погибших организмов соответствуют 10,0 мг/л;

          46,6% - 9,3 мг/л;

          40,0% - 8,0 мг/л;

          30,0% - 6,0 мг/л;

          16,6% - 3,3 мг/л;

          3,3%  - 0,66 мг/л.

Полученные значения убывающих концентраций вещества (мг/л) по суткам экспозиции также заносят в таблицу 3.2.1.

В случае распада вещества на 20 и на 30 сутки, количество определений во времени (n) увеличивается с 6 до 7-8.

3.2.7 Далее расчет периода 95% распада вещества в воде определяют в соответствии с п. 3.1.2:

, где

С - концентрация вещества в момент определения (мг/л);

Со - исходная концентрация (мг/л);

t - время (сутки);

- константа скорости убывания вещества в растворе (сут.).

Принимают ; ; ; , получают решаемое регрессионное уравнение: .

Коэффициенты уравнения регрессии "а" и "b" вычисляют методом наименьших квадратов по уравнениям:

, где

n - число определений во времени.

3.2.8. Соответствующие данные (расчетные концентрации вещества из таблицы 3.2.1.) вносят в таблицу 3.2.2. и далее проводят преобразование экспериментальных результатов для дальнейшего расчета по формулам п. 3.2.7.

Таблица 3.2.2.

Данные для расчета распада вещества на 95%

Число определений во времени N	Сутки исследований t=x	концентрация вещества. С мг/л	логарифм концентрации lgC = y	x x lgC (х x у)	X(2)
1	0	10,0	1,0000	0	0
2	3	9,3	0,9685	2,9055	9
3	5	8,0	0,9031	4,5155	25
4	7	6,0	0,7782	5,4474	49
5	10	3,3	0,5185	5,180	100
6	15	0,66	-0,1805	-2,7075	225
Значения сумм вышеуказанных показателей (Сумма), вносимых в формулы расчета показателей а и b
N	Сумма(x)		Сумма(у)	Сумма(x x у)	Сумма(х)(2)
6	40		4,9878	16,3459	408

3.2.9. Определяют 5% концентрацию вещества от исходной концентрации (10 мг/л) при его распаде на 95%.

В рассматриваемом примере концентрация вещества 0,5 мг/л является 5%-й концентрацией от исходной (10 мг/л) при распаде вещества на 95%.

Определяют .

3.2.10. Определяют по данным табл. 3.2.2. значения коэффициентов регрессии а и b (п. 3.2.7.):

а=1,6288; b=-0,1196.

Подставляют полученные значения в решаемое регрессионное уравнение (п. 3.2.7): , откуда следует: , где х - время распада вещества на 95%;

При округлении полученного значения х до целого числа, записывают время распада вещества на 95% за 16 суток.

3.2.11. При наличии данных по химической стабильности вещества в растворе и данных по стабильности токсичности вещества может быть проведено сравнение полученных величин и сделан вывод о токсичности продуктов распада вещества.

4. Оценка влияния вещества на показатели водной среды

Влияние вещества на показатели водной среды характеризуется по органолептическим (запах, цвет, прозрачность, мутность взвесь, осадок), гидрохимическим (кислород, рН, нитриты, нитраты, аммоний) показателям, а также по показателям, характеризующим самоочищение воды (, численность сапрофитных микроорганизмов).

4.1. Оценка влияния вещества на органолептические показатели воды

Органолептические показатели воды при различных концентрациях вещества характеризуют по изменению запаха и цвета, вязкости, опалесценции. А также по изменению прозрачности, мутности, взвеси, образованию осадка в воде - указанные показатели определяют с помощью цилиндра высотой 40 см, емкостью 1 л, на белом основании с темными полосами, нанесенными крестообразно. Определение производят в хорошо освещенных помещениях, но не на прямом солнечном свету.

Запах воды при различных концентрациях вещества определяют при комнатной температуре непосредственно из колбы с притертой пробкой. Для этого открывают пробку и слегка втягивают носом воздух из колбы у самого ее горлышка и оценивают наличие запаха.

При этом отмечают интенсивность запаха по пятибальной шкале (Таблица 4.1.1).

Характер запаха определяют описательно: хлорный, землистый, болотный, хлорфенольный, запах нефти и нефтепродуктов, навозный, гнилостный и т.д.

Таблица 4.1.1.

Шкала определения запаха по его интенсивности

Балл	Интенсивность	Оценка
0	Нет	Запах не ощущается
1	Очень слабый	Запах, обнаруживаемый большинством наблюдателей
2	Слабый	Запах, обнаруживаемый всеми наблюдателями
3	Заметный	Запах легко ощущаемый
4	Отчетливый	Запах четко ощущаемый
5	Очень сильный	Запах сильный и резкий

Цвет среды с разными концентрациями вещества сравнивают с цветом контрольной среды, отмечая его интенсивность в каждой концентрации и отмечая концентрацию, при которой цвет среды не отличается от контроля.

Прозрачность. Границей изменения прозрачности считают глубину в сантиметрах, при которой исчезает четкая видимость линий на диске основания цилиндра.

Мутность воды характеризуют описательно: слабая опалесценция, опалесценция, сильная опалесценция, слабая мутность, заметная мутность, сильная мутность.

Осадок характеризуется по его величине - ничтожный, незначительный, заметный, большой. В случае большого осадка указывается толщина слоя осадка в отношении общего объема воды. При качественной характеристике указывают свойства осадка: кристаллический, аморфный, хлопьевидный, илистый, песчаный и т.п., отмечается также цвет осадка - бесцветный, серый, бурый и т.п.

В качестве примера приводится табличная запись отмечаемых изменений органолептических показателей воды при различных концентрациях вещества (карбоксиметилированный крахмал, таблица 4.1.1.а).

Таблица 4.1.1.а

Влияние карбоксиметилированного крахмала на органолептические показатели водной среды

Концентрация, мг/л	Органолептические показатели
	Запах	цвет	Прозрачность	Мутность	Осадок
	Вода
контроль	естественный	Естественный	40 см	отсутствует	отсутствует
Карбоксиметилированный крахмал (Floplex С 115)
2,0	отсутствие	без изменения	40 см	отсутствует	отсутствует
10,0	отсутствие	- " -	40 см	отсутствует	отсутствует
25,0	отсутствие	- " -	39 см	малая суспензия	отсутствует
50,0	отсутствие	- " -	39 см	малая суспензия	отсутствует
250,0	отсутствие	- " -	35 см	средняя суспензия	видимый
1250,0	отсутствие	- "-	30 см	густая суспензия	выраженный

4.2. Оценка влияния вещества на процессы самоочищения

4.2.1 Вводные замечания

Нарушение жизнедеятельности бактериального населения под действием химических веществ может привести к изменению качества водной среды и, в конечном итоге, к деградации экосистемы водного объекта. В связи с этим, при установлении ПДК вещества следует определять его влияние на разные группы бактерий-минерализаторов. Для экспериментального исследования предлагается следующая цепочка объектов:

а) сапрофиты, растущие на мясопептонном агаре (МПА) разведенном в 10 раз (МПА:10);

б) нитрификаторы 1-й фазы;

в) нитрификаторы 2-й фазы.

4.2.2 Характеристика тест-объекта

Наибольшей физиологической активностью обладают сапрофиты, первыми начинающие процесс минерализации, разлагая азотсодержащую органику до аммонийного азота. Их сменяют нитрификаторы 1-й фазы, окисляющие аммонийный азот до нитритов, а затем - нитрификаторы 2-й фазы, окисляющие нитриты до нитратов.

Для регистрации состояния бактерий в экспериментах предлагается следующий набор основных показателей:

а) Численность сапрофитов. Если исследуемое вещество легко усваивается бактериями, их численность значительно возрастает, превышая численность в контроле, а если токсично - количество микроорганизмов снижается.

б) Дыхание бактерий. Определяется по . Этот показатель характеризует физиологическую активность бактерий и не всегда коррелирует с численностью бактерий (в связи с тем, что токсическое действие некоторых ксенобиотиков выражается в увеличении численности бактерий на фоне снижения их физиологической активности).

в) Концентрация растворенного кислорода. Показатель аэробного состояния среды.

г) Аммонийный азот. Продукт метаболизма сапрофитов-аммонификаторов.

д) Азот нитритов. Продукт метаболизма нитрификаторов 1-й фазы.

е) Азот нитратов. Продукт метаболизма нитрификаторов 2-й фазы.

ж) рН среды. Показатель активной реакции среды.

Длительность наблюдения обусловлена сроком полной минерализации азотсодержащей органики в нормальных условиях до стабильной формы азота в виде нитратов. Момент окончания опыта определяют выходом концентрации нитратов в контрольном экспериментальном сосуде на стационарный уровень (плато), что происходит на 25-30-е сутки.

4.2.3. Проведение исследований

4.2.3.1. Необходимое оборудование:

термостат-стерилизатор;

термостат с водяной рубашкой для поддержания температуры 20°С;

автоклав;

фотоэлектроколориметр или спектрофотометр;

потенциометр;

мерные колбы на 50, 100, 200, 250, 500 и 1000 ;

стеклянные кристаллизаторы на 5 ;

кислородные склянки вместимостью около 200 ;

чашки Петри;

пробирки, бюретки.

4.2.3.2. Предварительный опыт проводят с пятью или шестью концентрациями исследуемого вещества, различающимися на порядок. Исследование проводят в стеклянных кристаллизаторах, наполовину заполненных природной водой из чистого водного объекта, профильтрованной через мельничное сито N 76. Во все сосуды вносят пептон из расчета 3 , который обеспечивает , не превышающее 5 , и соответствующее количество исследуемого вещества. В контрольный сосуд исследуемое вещество не вносят.

В предварительном опыте контролируется только один показатель - численность сапрофитов, растущих на МПА:10. Посевы проводят в трехкратной повторности глубинным методом. Чашки Петри с посевами инкубируют при температуре °С в течение двух суток, после чего просчитывают количество выросших колоний. Отбор проб для посевов проводят ежедневно в течение 4-5 суток. На основании полученных результатов планируют основной опыт.

При работе с искусственной морской водой - в подготовленную искусственную морскую воду (п. 2.10 Приложения 1) вносят предварительно выращенную на МПА морскую естественную микрофлору из природной морской воды или морского аквариума (из расчета 1 тыс. кл/мл). Выдерживают при комнатной температуре в течение недели (время адаптации) - для размножения бактерий и стабилизации гидрохимических параметров. После этого проводят токсикологический эксперимент.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Вместо "п. 2.10 Приложения 1" имеется в виду "п. 3.0 Приложения 1"

4.2.3.3. Основной опыт ставят при тех же условиях, что и предварительный опыт. Оценивают действие вещества в пяти концентрациях, из которых максимальной служит та наименьшая концентрация, которая в предварительном опыте снижала численность сапрофитов по сравнению с контролем более чем на 25%. Другие концентрации различаются не более, чем в 5 раз. Опыт проводят в трех повторностях.

4.2.4. Учет и анализ результатов

В ходе длительного опыта учитывают следующие показатели:

рН - в исходные, на 10, 20 и 30 сутки;

растворенный кислород - в исходные, на 3, 5, 7, 10 и 15 сутки;

численность сапрофитов, растущих на МПА:10, - в исходные, на 1, 3, 5 и 7 сутки;

- в исходные, на 1, 3, 5 и 7 сутки;

азот аммонийный - в исходные, на 1, 3, 5, 7, 10 и 15 сутки;

азот нитритов - на 5, 7, 8, 9, 10, 12 и 15 сутки;

азот нитратов - на 7, 9, 10, 12, 15, 20, 25 и 30 сутки.

Химические определения проводят по общепринятым методикам.

Результаты перечисленных определений обрабатывают статистически и оценивают достоверность отклонения опытных величин от контрольных. Допустимыми концентрациями считаются такие, которые не вызывают достоверного отклонения исследуемых показателей от контрольных.

Открыть документ в системе ГАРАНТ

Открыть в бесплатной Интернет-версии Открыть в Интернет-версии (только для пользователей системы ГАРАНТ)

<< Приложение. Методические указания по разработке нормативов качества воды водных объектов рыбохозяйственного значения, в том числе нормативов...		Приложение 2. >> Требования к разработке максимальных допустимых концентраций вещества для пресноводных биологических тест-объектов
	Содержание Приказ Федерального агентства по рыболовству от 4 августа 2009 г. N 695 "Об утверждении Методических указаний по разработке...