Приложение N 2. Технология выполнения простой медицинской услуги 91500.09.12.05.005

Приложение N 2
к приказу Минздрава РТ
от 26 июля 2016 г. N 1557

Технология
выполнения простой медицинской услуги
91500.09.12.05.005

12.05.005 "Определение основных групп крови АВО"

Сведения о разработчиках

В разработке "Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.05.005 "Определение основных групп крови АВО" участвовали специалисты Министерства здравоохранения Республики Татарстан и Государственного автономного учреждения здравоохранения "Республиканский центр крови Министерства здравоохранения Республики Татарстан" (см. таблицу 1).

Таблица 1 - Сведения о разработчиках "Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.05.005 "Определение основных групп крови АВО"

Ф.И.О. разработчиков	Место работы, занимаемая, должность, степень, звание	Адрес места работы	Рабочий телефон
Фатихов Ильдар Разинович	Заместитель министра здравоохранения РТ	4200111, г. Казань, ул. Островского, д. 11/6
Лысенко Галина Викторовна	Начальник управления контроля стандартов и качества медицинской деятельности Министерства здравоохранения РТ, к.м.н.	4200111, г. Казань, ул. Островского, д. 11/6	(843) 231-79-73
Бурыкин Игорь Михайлович	Начальник отдела внедрения и мониторинга стандартов Министерства здравоохранения РТ, к.м.н.	4200111, г. Казань, ул. Островского, д. 11/6	(843) 231-79-74
Тураев Рамиль Габдельхакович	Главный врач ГАУЗ "РЦК МЗ РТ", к.м.н., ассистент кафедры "Анестезиологии-реаниматологии и трансфузиологии" КГМА Минздрава России	г. Казань, проспект Победы д. 85	(843) 237-69-00
Сибгатуллина Лилия Нагимзяновна	Заместитель главного врача по медицинской части ГАУЗ "РЦК МЗ РТ"	г. Казань, проспект Победы д. 85	(843) 237-54-59
Бельская Елена Евгеньевна	Заведующая клинико-диагностической лабораторией ГАУЗ "РЦК МЗ РТ", ассистент кафедры "Клиническая лабораторная диагностика" КГМА Минздрава России	г. Казань, проспект Победы д. 85	(843) 237-92-33

Рецензенты:

Фаткуллин Ильдар Фаридович, д.м.н., профессор, зав. кафедрой акушерства и гинекологии N 2 Казанского государственного медицинского университета, главный внештатный акушер-гинеколог МЗ РФ в Приволжском ФО, заслуженный деятель науки Республики Татарстан, заслуженный врач РТ, председатель Общества акушеров-гинекологов РТ.

Анисимов Андрей Юрьевич - главный внештатный хирург МЗ РТ, заместитель главного врача по хирургии ГАУЗ "Городская клиническая больница N 7 г. Казани", д.м.н., профессор кафедры "Скорой медицинской помощи" КГМА Минздрава РФ, член ассоциации хирургов-гепатологов России и стран СНГ

Галимова Ильмира Раисовна - главный акушер-гинеколог МЗ РТ, заместитель главного врача по акушерско-гинекологической помощи ГАУЗ "Республиканская клиническая больница МЗ РТ"

Сиразитдинов Дамир Талибович - главный специалист эксперт по клинической лабораторной диагностике МЗ РТ.

1. Область применения

Настоящий стандарт устанавливает порядок определения групп крови системы АВО. Настоящий стандарт распространяется на учреждения здравоохранения Республики Татарстан независимо от ведомственной принадлежности.

Основанием для разработки "Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.05.005 "Определение основных групп крови АВО", является Отраслевой классификатор "Простые медицинские услуги" (ОК ПМУ N 91500.09.0001-2001), утвержденный приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 10 апреля 2001 г. N 113.

2. Цели и задачи

ТВ ПМУ разработана с целью нормативного обеспечения и унификации процесса выполнения простой медицинской услуги 12.05.005 "Определение основных групп крови АВО" в медицинских учреждениях на территории Республики Татарстан.

ТВ ПМУ "Определение основных групп крови АВО" разработана для решения следующих задач:

- нормативного обеспечения внедрения стандарта ТВ ПМУ "Определение основных групп крови АВО";

- установления единых требований к оказанию ПМУ "Определение основных групп крови АВО";

- унификации расчетов трудозатрат на выполнение ТВ ПМУ "Определение основных групп крови АВО" в медицинских учреждениях на территории Республики Татарстан;

- контроля качества и безопасности, оказанной пациенту ПМУ "Определение основных групп крови АВО" в медицинских учреждениях на территории Республики Татарстан;

- проверки на соответствие установленным требованиям при проведении процедуры лицензирования;

- защиты прав пациента и врача при разрешении спорных и конфликтных вопросов.

ТВ ПМУ представляет собой систематизированный свод медицинских правил и условий, технического обеспечения, определяющий порядок и последовательность действий, выполняемых медицинским персоналом.

При разработке ТВ ПМУ "Определение основных групп крови АВО" использовались нормативные документы (приказы, инструкции, методические указания МЗ РФ и МЗ РТ), учитывались результаты научных исследований, практический опыт службы крови Республики Татарстан.

3. Нормативные ссылки

Постановление Правительства Российской Федерации от 26.01.2010 г. N 29 "Технический регламент о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионно-инфузионной терапии"

Приказ МЗ СССР N 700 от 23.05.1985 г. "О мерах по дальнейшему предупреждению осложнений при переливании крови, ее компонентов, препаратов и кровезаменителей"

Приказ МЗ РФ от 25.12.1997 г. N 380 "О состоянии и мерах по совершенствованию лабораторного обеспечения диагностики и лечения пациентов в учреждениях здравоохранения Российской Федерации"

Приказ МЗ РФ N 2 от 09.01.1998 г. "Об утверждении инструкций по иммуносерологии"

Приказ МЗ РТ N 367 от 13.05.1999 г. "О мерах по предупреждению осложнений при переливании компонентов, препаратов крови, кровезаменителей"

Приказ МЗ РФ N 363 от 25.11.2002 г. "Об утверждении Инструкции по применению компонентов крови"

Приказ МЗ РТ N 1135 от 05.08.2004 г. "О совершенствовании работы по профилактике посттрансфузионных осложнений в учреждениях здравоохранения Республики Татарстан"

Приказ МЗ РФ от 28 марта 2012 г. N 278н "Об утверждении требований к организациям здравоохранения (структурным подразделениям), осуществляющим заготовку, переработку, хранение и обеспечение безопасности донорской крови и ее компонентов, и перечня оборудования для их оснащения"

Приказ МЗ РФ от 01.11.2012 г. N 572 "Об утверждении порядка оказания медицинской помощи по профилю "Акушерство и гинекология (за исключением использования вспомогательных репродуктивных технологий)"

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду приказ Министерства здравоохранения РФ от 1 ноября 2012 г. N 572н

Приказ МЗ РФ от 2 апреля 2013 г. N 183н "Об утверждении правил клинического использования донорской крови и (или) ее компонентов"

Приказ МЗ РТ от 27.04.2004 г. N 691 "О совершенствовании преконцепционной, пренатальной и постнатальной профилактики иммуноконфликтной беременности в Республике Татарстан"

Приказ МЗ РТ от 16.07.2004 г. N 1047 "О порядке получения, учета и хранения компонентов крови"

Приказ МЗ РТ от 15.07.2010 г. N 908 "Об установлении стандартов технологий исследования функции органов и тканей с использованием специальных процедур"

Методические указания N 52001-109 МЗ РФ, РНИИ гематологии и трансфузиологии "Требования к проведению иммуногематологических исследований доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ", Санкт-Петербург, 2002 г.

Методические рекомендации МЗ РФ "Алгоритмы исследования антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител в сложнодиагностируемых случаях", Санкт-Петербург, 2000 г.

СанПиН 2.1.3.2630-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность"

СанПиН 2.1.7.2790-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами"

4. Термины, определения и сокращения

4.1. В настоящем стандарте применены следующие термины и определения:

В настоящее время известны 38 групповых антигенных систем и их коллекций, включающие более 500 антигенов эритроцитов и белков плазмы. 10 из них имеют клиническое значение, т.е. при попадании в организм индивида АГ, отсутствующие у него, на них могут начать вырабатываться АТ. Клинически значимые трансфузионно опасные группы крови: АВО, MNS, Р, Резус (RH), Lutheran (LU), Kell, Lewis (LE), Duffy (FY), Kidd (JK), Diego (DI).

Антигены групп крови человека - это вещества, несущее признаки генетически чужеродной информации, при попадании в организм вызывающие иммунный ответ (выработку антител). Антигены эритроцитов человека являются структурными образованиями расположенными на вешней поверхности мембраны эритроцитов, обладающими способностью взаимодействовать с соответствующим АТ, образовывать комплекс АГ-АТ, наследуются от родителей, генотип групп крови в течение жизни не меняются.

Группы крови по системе АВО - антигенный состав крови, определяемый по наличию или отсутствию антигенов А и В на эритроцитах и антител анти-А и анти-В в сыворотке крови человека.

Групповые антигены (агглютиногены) А и В - это структурные образования, расположенные на внешней поверхности мембраны эритроцитов, обладающие способностью взаимодействовать с соответствующими антителами и образовывать комплекс антиген-антитело. Групповые антигены А и В обладают высокой иммуногенностью, что и определяет их клиническое значение в развитии немедленных посттрансфузионных осложнений гемолитического типа и гемолитической болезни новорожденных.

Естественные анти-А, анти-В антитела (агглютинины) - это иммуноглобулины классов IgM, IgG, IgA, которые постоянно находятся в сыворотке крови человека без всякого иммунного стимула. Они являются врожденными (регулярными) и не меняются в течение жизни. В сыворотке крови примерно 1% лиц, имеющих подгруппу А2(II), и почти 25% лиц, имеющих подгруппу A2B(IV), содержатся экстраагглютинины 1 (анти-A1 антитело), специфически взаимодействующее с эритроцитами A1(II), A1В(IV). Они не активны при 37°С и клинического значения не имеют, однако вызывают агглютинацию эритроцитов при проведении проб на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента.

Иммунные групповые анти-А, анти-В антитела - это антитела, вырабатываемые индивидуумом в ответ на внедрение отсутствующих групповых антигенов А, или В, или А и В.

Определение группы крови АВО - это идентификация антигенов и антител с помощью иммунологических стандартов (стандартных изогемагглютинирующих сывороток, стандартных эритроцитов АВО или цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ).

Прямой метод - это метод определения группы крови АВО по групповым антигенам А и В, основанный на реакции прямой гемагглютинации (далее по тексту РПГА). Прямой метод выполняется при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток или цоликлонов анти-A, анти-В, анти-АВ.

Перекрёстный метод - это метод определения группы крови АВО по одновременному выявлению групповых антигенов А и В и естественных анти-А, анти-В антител, основанный на РПГА.

Гелевый тест - это метод определения группы крови АВО, основанный на комбинации методов агглютинации и гель-фильтрации. Проводится с помощью пластиковых диагностических карточек, которые состоят из микропробирок, заполненных полиакриламидным гелем и соответствующими реагентами.

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки - это поликлональные иммунологические стандарты, приготовленные из крови нескольких человек, и содержащие естественные анти-А, анти-В антитела. Предназначены для выявления групповых антигенов А и B. Представляют собой прозрачную жидкость, окрашенную в соответствии с групповой принадлежностью и расфасованную в ампулы или флаконы.

Стандартные эритроциты АВО - это иммунологические стандарты, приготовленные из эритроцитной массы специально отобранных доноров. Предназначены для выявления естественных анти-А, анти-В антител перекрёстным методом.

Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ - это моноклональные иммунологические стандарты, приготовленные из концентрата асцитной жидкости мышей - носителей анти-А, анти-В гибридом. Предназначены для выявления групповых антигенов А и В. Представляют собой прозрачную жидкость, окрашенную в соответствии с групповой принадлежностью и расфасованную во флаконы.

Агглютинация - это реакция взаимодействия антигена со специфическим антителом, проявляется в виде склеивания эритроцитов.

Аутоантитела - это антитела, имеющие специфичность к собственным антигенам индивида.

Неспецифическая агглютинация - это агглютинация неожиданная, атипичная, не свойственная конкретной групповой антигенной системе. В основе неспецифической агглютинации лежат определённые специфические механизмы. На появление неспецифической агглютинации влияют белковый состав среды, солевой состав среды, состояние свёртывающей системы крови гормональный фон.

Полиагглютинабельность - способность исследуемого образца крови давать агглютинацию со всеми образцами стандартных изогемагглютинирующих сывороток, независимо от их групповой принадлежности.

4.2. Номенклатура системы групп крови АВО

В современной классификации принято буквенное обозначение групп крови АВО, которое включает в себя буквенное обозначение антигена (О, А, В или АВ), а также буквенное обозначение антител. По современной классификации антитела обозначают как анти-А и анти-В, взамен - и -изогемагглютининов (см. таблицу 2).

Таблица 2 - Обозначение групп крови АВО

Ранее принятое обозначение	Современное обозначение	Международная номенклатура ISBT
О (I)	О, анти-АВ	О
А (II)	А, анти-В	А
В (III)	В, анти-А	В
АВ0 (IV)	АВ0	АВ

4.3. В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:

ISBT - Международное общество переливания крови

МЗ РФ - Министерство здравоохранения Российской Федерации

МЗ РТ - Министерство здравоохранения Республики Татарстан

ГАУЗ РЦК МЗ РТ - Государственное автономное учреждение здравоохранения "Республиканский центр крови Министерства здравоохранения Республики Татарстан"

УЗ - учреждение здравоохранения

КЛД - клиническая лабораторная диагностика

ТВ ПМУ - технология выполнения простой медицинской услуги

ПМУ - простая медицинская услуга

РПГА - реакция прямой гемагглютинации

ГБН - гемолитическая болезнь новорожденных

ОПК - отделение переливания крови

КТТ - кабинет трансфузионной терапии

5. Применяемое оборудование, инструменты и материалы

5.1. Перечень применяемого оборудования указаны в таблице 3.

Таблица 3 - Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения, необходимые для определения групп крови АВО, а также альтернативные приборы и изделия медицинской техники

Наименование прибора, изделия медицинской техники и др.	Количество приборов, инструментов, изделий медицинской техники	Альтернативный прибор, изделие медицинской техники
Определение основных групп крови АВО прямым и перекрёстным методами
Стол лабораторный	1 шт.	Стол с покрытием из пластика
Стул	1 шт.
Настольная лампа	1 шт.	Настенная лампа
Планшет для иммуногематологических исследований	1 шт. на 1 исследование	Тарелка белого цвета фарфоровая или эмалированная
Пипетка Пастера	1 шт.	Автоматическая пипетка переменного объёма 20-200 мкл
Стеклянные палочки (лопаточки)	От 6 до 10 шт.	Палочка из пластмассы
Песочные часы на 3 и 5 минут	По 1 шт.	Секундомер
Лупа с 8-кратным увеличением	1 шт.
Штатив лабораторный на 10 гнёзд	1 шт.
Стеклянные баночки	2 шт.	Стеклянные стаканы
Центрифуга лабораторная ОПН-3	1 шт.	Центрифуга лабораторная СМ-6 М, ELMI и другие
Определение основных групп крови АВО гелевой методикой
Стол лабораторный	1 шт.	Стол с покрытием из пластика
Стул	1 шт.
Штатив лабораторный на 10 гнёзд	1 шт.
Стеклянные стаканы	2 шт.	Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная ОПН-3	1 шт.	Центрифуга лабораторная СМ-6 М, ELMI
Центрифуга для гелевых пластиковых карт	1 шт.
Автоматическая пипетка переменного объёма	5-40 мкл 1 шт. 100-1000 мкл 1 шт.
Штатив для автоматических пипеток переменного объема	1 шт.
Пробирка центрифужная	1 шт.

5.2. Расходные материалы

Таблица 4 - Иммунологические стандарты, используемые для определения группы крови АВО

Наименование реактива	Количество реактива, необходимое для выполнения 1-го исследования	Сроки и особенности хранения реактива, работы с ним*	Документ, регламентирующий использование реактива
Определение основных групп крови АВО прямым и перекрёстным методами
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки АВО	По одной большой капле (100 мкл) реактивов О, анти-АВ, А, анти-В и В, анти-А двух серий; 100 мкл, АВ0 - одной серии	Хранить при t+2...+8°С. Срок годности - 6 месяцев с даты изготовления. После вскрытия годен в течение 2 недель	Приказ МЗ РФ N 2 от 09.01.1998 г. "Об утверждении инструкций по иммуносерологии"
Стандартные эритроциты АВО	По одной маленькой капле (10 мкл) каждой группы	Хранить при t+2...+8°C. Срок годности - 2 месяца с даты изготовления. После вскрытия годен в течение 5-7 дней
Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ	По одной большой капле (100 мкл) каждой группы	Хранить при t+2...+8°С. Срок годности - 2 года с даты изготовления. После вскрытия годен в течение 1 месяца
Цоликлон анти-A1 (лектин) (для КДЛ и специализированных лабораторий)	Одна большая капля (100 мкл)	Хранить при t+2...+8°С. Срок годности - 2 года с даты изготовления. После вскрытия годен в течение 1 месяца
Раствор натрия хлорида, 0,9%	По 50 мкл в каждую лунку	Хранить при t+15...+25°С.
Определение основных групп крови АВО гелевой методикой
Диагностические карточки для определения группы крови	От 0,5 до 1 шт. в зависимости от используемой диагностической карты	Условия хранения в соответствие с требованиями производителя	Инструкции, прилагаемые к соответствующим диагностическим карточкам
Раствор для приготовления суспензии исследуемых эритроцитов	От 0,5 до 1,0 мл в зависимости от производителя	Условия хранения в соответствие с требованиями производителя	Инструкция, прилагаемая к раствору
Набор стандартных эритроцитов A1 и В	По 50 мкл каждого реактива	Хранить при t+2...+8°С	Инструкция, прилагаемая к набору

* - Температура внутри холодильной камеры, где хранятся реактивы, контролируется средним медработником дважды в день. Показания термометра регистрируются в "Журнале регистрации температурного режима холодильников" (см. приложение 2).

5.3. Прочий расходуемый материал

Для выполнения ПМУ "Определение основных групп крови АВО" используются прочий расходуемый материал (см. таблицу 5).

Таблица 5 - Прочий расходуемый материал, используемый для определения группы крови АВО

Наименование	Количество	Примечание
Определение основных групп крови АВО прямым и перекрёстным методами
Ватно-марлевый тампон	На 1 тампон: вата - 3,0 гр., бинт - 30 см	Для подсушивания пипетки и стеклянной палочки
Медицинские перчатки одноразовые	1 пара на каждые 3 часа работы	Заменить немедленно при нарушении целостности или сильном загрязнении
Раствор натрия хлорида, 0,9%	0,2 л	Для промывания пипеток и палочек
Кожный антисептик	3,0 гр. на 1 обработку	Для обработки рук персона после окончания работы
Дезинфицирующий раствор	В соответствии с методическими указаниями по применению дез. средств, разрешённых к использованию в РФ и РТ	Для дезинфекции биологического материала, лабораторной посуды и рабочего места
Определение основных групп крови АВО гелевой методикой
Медицинские перчатки одноразовые	1 пара на каждые 3 часа работы	Заменить немедленно при нарушении целостности или сильном загрязнении
Спирт этиловый медицинский, 70,0%	10 гр. на 1 центрифугу в конце рабочего дня	Для обработки центрифуги
Наконечники для автоматических пипеток переменного объема, одноразовые	3 шт. на 1 исследование
Дезинфицирующий раствор	В соответствии с методическими указаниями по применению дез. средств, разрешённых к использованию в РФ и РТ	Для дезинфекции биологического материала, лабораторной посуды и рабочего места

6. Ответственность

Исполнители:

Определение группы крови АВО должны проводить специалисты, имеющие подготовку по вопросам иммуногематологии на специализированных циклах усовершенствования на базе учреждений дополнительного профессионального образования и/или на базе учреждений службы крови РТ (см. таблицу 3).

Должностные лица, несущие ответственность - руководители структурными подразделениями (заведующие отделениями) учреждения здравоохранения.

Таблица 6 - Требования к специалистам для выполнения ПМУ "Определение основных групп крови АВО"

Медицинское учреждение	Выполнение ПМУ "Определение основных групп крови АВО"	Медицинский персонал	Дополнительные требования к медицинскому персоналу
Стационар	Первично и перед каждым переливанием крови и её компонентов	Лечащий или дежурный врач Врач-трансфузиолог	Должны иметь специальную подготовку по вопросам иммуногематологии на специализированных циклах усовершенствования на базе учреждений дополнительного профессионального образования и/или на базе учреждений службы крови РТ не реже одного раза в 5 лет
	Централизованное переопределение	Врач КЛД или биолог КЛД
Другие ЛПУ	Для амбулаторных пациентов	Врач КЛД или биолог КЛД

7. Процедуры выполнения

7.1. Подготовительные работы

7.1.1. Требования к помещению

Для выполнения ПМУ "Определение основных групп крови АВО" должно быть оснащено отдельное место (или специальное помещение), которое оборудуется согласно требованиям приказа от 28 марта 2012 г. N 278н "Об утверждении требований к организациям здравоохранения (структурным подразделениям), осуществляющим заготовку, переработку, хранение и обеспечение безопасности донорской крови и ее компонентов, и перечня оборудования для их оснащения" (приложение N 5 приказа 278н).

Иммуногематологические исследования проводить в помещении с естественным освещением, температура воздуха в помещении должна быть в пределах +15°С...+25°С. Показатели микроклимата фиксировать в "Журнале учёта микроклимата помещения" (приложение 3).

7.1.2. Требования к образцам крови.

Перед процедурой забора крови на исследование у пациента уточнить его фамилию, имя и отчество. Если состояние реципиента не позволяет провести опрос, идентификация проводится путем сверки данных медицинской документации.

У новорожденных детей указывается пол и номер на идентификационном ручном браслете. У новорожденных первых часов жизни указываются фамилия и инициалы матери.

Предпочтительнее использовать пробирку вакутейнер, на которую нанести следующую информацию о пациенте: Ф.И.О., дату забора крови, для стационарных больных - номер медицинской карты. Кровь пациента забрать из вены в количестве 3-5 мл и перенести в подписанную пробирку.

Использовать для исследования кровь пациента не более двухдневного срока хранения при t+2°C...+8°C.

Допускается наличие незначительного гемолиза у пациентов с аутоиммунной гемолитической анемией.

Образцы крови, маркировка которых не соответствует требованиям настоящего документа, запрещается направлять и принимать для исследования в клинико-диагностической лаборатории.

7.1.3. Требования безопасности

К работе допускаются лица, прошедшие инструктаж по технике безопасности и получившие доступ к самостоятельной работе.

Все манипуляции проводить в медицинской одежде с использованием индивидуальных средств защиты (медицинские перчатки, защитные очки или щитки). С любыми образцами крови пациента следует обращаться как с потенциальными переносчиками инфекционных заболеваний.

7.1.4. Требования к объемам исследований в зависимости от медицинского учреждения

7.1.4.1. Стационар

При поступлении в стационар группу крови АВО пациенту определяет дежурный или лечащий врач прямым методом.

Во избежание ошибки процедуру взятия крови и определения группы крови АВО повторяют. Повторное определение групповой принадлежности крови осуществляется централизованно в лаборатории УЗ, кабинете переливания крови или в отделении переливания крови перекрестным методом или гелевой методикой. При направлении на централизованное переопределение образец крови пациента сопровождается направлением (см. приложение 4).

Для первичного определения при поступлении пациента и централизованного переопределения группы крови АВО перекрестным методом используются диагностические стандарты различных наименований или различных серий.

Результат переопределения вклеивается в медицинскую карту стационарного больного. При совпадении результатов первичного и централизованного переопределения групповая принадлежность крови пациента выносится на титульный лист медицинской карты, скрепляется подписью врача, проводившего первичное определение.

Категорически запрещается переносить сведения о групповой принадлежности крови пациента с любого другого документа!

Перед переливанием крови и её компонентов крови определение групповой принадлежности крови реципиента (из пробирки) и донора (из сегмента трубки контейнера) проводится прямым методом с использованием цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ.

Предтрансфузионный образец крови реципиента хранить при температуре t+2°C...+8°C в течение 5 суток. Остатки трансфузионной среды хранить при температуре t+2°C...+8°C в течение 48 часов.

Предтрансфузионный образец крови реципиента и остатки трансфузионной среды предназначены для исследования в специализированной лаборатории службы крови при возникновении посттрансфузионного осложнения гемолитического типа или посттрансфузионной реакции.

7.1.4.2. Женская консультация

При постановке на учет по беременности женщинам группу крови АВО определяют перекрёстным методом или гелевой методикой. Повторное определение группы крови АВО произвести в 28-30 недель беременности перекрестным методом или гелевой методикой.

Результат определения групп крови АВО, полученный в лаборатории женской консультации заносятся в "Журнал регистрации результатов иммуногематологического исследования крови" (см. приложение 5).

Категорически запрещается переносить сведения о групповой принадлежности крови пациента с любого другого документа.

При несовпадении результатов первичного и повторного исследования образец крови беременной женщины направить в специализированную лабораторию РЦК или ОПК для дальнейшего исследования.

7.1.4.3. Поликлиника

Для амбулаторно-поликлинических пациентов определение группы крови АВО производится перекрестным методом или гелевой методикой.

Результат определения групп крови АВО, полученный в лаборатории поликлиники заносятся в "Журнал регистрации результатов иммуногематологического исследования крови" (см. приложение 5).

Категорически запрещается переносить сведения о групповой принадлежности крови пациента с любого другого документа.

7.2. Методы определения группы крови по системе АВО

Определение групп крови проводиться с помощью соответствующих реагентов.

Прежде чем приступить к исследованию, необходимо произвести макроскопическую оценку диагностических стандартов: реактивы должны быть прозрачными, без осадка и других признаков загрязнения; вскрытые ампулы (флаконы) должны быть закрытыми для предотвращения подсыхания содержимого. Проверить срок годности реактивов с даты изготовления, указанной на этикетке, и со дня вскрытия реактива (срок годности флакона (ампулы) см. таблица 6).

Ампулы (флаконы) расположить в штативе в определенном порядке: 1 ряд слева направо - одна серия стандартных изогемагглютинирующих сывороток О (анти-АВ), А (анти-В) и В (анти-А); 2-ой ряд слева направо - вторая серия стандартных изогемагглютинирующих сывороток О (анти-АВ), А (анти-В) и В (анти-А); 3 ряд слева направо - стандартные эритроциты О, А и В.

При работе с цоликлонами порядок расположения реактивов в штативе следующий: слева направо - анти-А, анти-В, анти-АВ. При определении группы крови перекрёстным методом с использованием цоликлонов (для удобства при чтении результатов) расположение цоликлонов следующее: анти-АВ, анти-В, анти-А.

7.2.1. Определение основных групп крови АВО прямым методом при помощи стандартных изогемагглютинируюших сывороток АВО

Порядок проведения исследования:

Определение группы крови АВО производить на планшете со смачиваемой поверхностью.

1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. пациента, кровь которого исследуют, а также надписать специфичность изогемагглютинирующих сывороток АВО в порядке их нанесения.

2. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки АВО раскапать в два ряда: в первом ряду сыворотки одной серии О (анти-АВ), А (анти-В), В (анти-А), во втором ряду сыворотки другой серии О (анти-АВ), А (анти-В), В (анти-А) по одной большой капле (по 100 мкл) под соответствующими надписями.

3. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно взять пипеткой эритроциты и нанести маленькую каплю (10 мкл) рядом со стандартными сыворотками. Соотношение эритроцитов и сыворотки - 1:10 (см. рисунок 1).

"Рисунок 1 - Порядок расположения стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВО и их соотношение с исследуемой кровью"

4. Каждую каплю стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВО перемешать с каплей эритроцитов отдельной стеклянной палочкой (см. рисунок 2).

"Рисунок 2 - Перемешивание изогемагглютинирующих сывороток с исследуемыми эритроцитами"

Наблюдать за реакцией 5 минут при постоянном покачивании планшета. После окончания экспозиции в те капли, где имеется агглютинация, добавить по одной капле (50 мкл) раствора натрия хлорида, 0,9%, покачивая планшет.

5. Трактовка результатов реакции.

Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов, агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких или крупных красных агрегатов.

При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается.

Результаты могут быть выражены в 4-х различных комбинациях.

а) Исследуемая кровь принадлежит к группе О, если со всеми стандартными изогемагглютинирующими сыворотками АВО получены отрицательные результаты (см. рисунок 3).

"Рисунок 3 - Исследуемая кровь группы О"

б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А, если в реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками О (анти-АВ) и В (анти-А) получен положительный результат, а со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой А (анти-В) получен отрицательный результат (см. рисунок 4).

"Рисунок 4. Исследуемая кровь группы А"

в) Исследуемая кровь принадлежит к группе В, если в реакции со стандартными изогемагглютинирующими сывороткам О (анти-АВ) и А (анти-В) получен положительный результат, а со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой В (анти-А) получен отрицательный результат (см. рисунок 5).

"Рисунок 5. Исследуемая кровь группы В"

г) В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми стандартными сыворотками, для исключения неспецифической агглютинации провести дополнительное контрольное исследование со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой АВ группы. Для этого на планшет нанести большую каплю (100 мкл) стандартной изогемагглютинирующей сыворотки АВ, рядом маленькую каплю (10 мкл) исследуемых эритроцитов. Капли перемешать стеклянной палочкой. Наблюдать за реакцией 5 минут.

Исследуемая кровь принадлежит к группе АВ, если со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой АВ получен отрицательный результат (см. рисунок 6).

"Рисунок 6. Исследуемая кровь группы АВ"

7.2.2. Определение основных групп крови АВО прямым методом при помощи цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ

Порядок проведения исследования:

Определение группы крови АВО производить на планшете со смачиваемой поверхностью.

1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. пациента, кровь которого исследуют, а также надписать специфичность цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ в порядке их нанесения.

2. Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ раскапать в один ряд по одной большой капле (по 100 мкл) под соответствующими надписями.

3. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно взять пипеткой эритроциты и нанести по одной маленькой капле (10-30 мкл) рядом с цоликлонами, соотношение эритроцитов и цоликлонов - 1:10 или 3:10 (см. рисунок 7).

"Рисунок 7. Порядок расположения цоликлонов и соотношение с исследуемыми эритроцитами"

4. Перемешать эритроциты с реагентами стеклянной палочкой. Наблюдать за реакцией 3 минуты при постоянном покачивании.

5. Трактовка результатов реакции.

Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов, агглютинаты видны невооруженным глазом в виде крупных красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья.

При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается.

Результаты могут быть выражены в 4-х различных комбинациях.

а) Исследуемая кровь принадлежит к группе О, если со всеми цоликлонами получены отрицательные результаты (см. рисунок 8).

"Рисунок 8. Исследуемая кровь группы О"

б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А, если в реакции с цоликлонами анти-А и анти-АВ получен положительный результат, а с цоликлоном анти-В получен отрицательный результат (см. рисунок 9).

"Рисунок 9. Исследуемая кровь группы А"

в) Исследуемая кровь принадлежит к группе В, если в реакции с цоликлонами анти-В и анти-АВ получен положительный результат, а с цоликлоном анти-А получен отрицательный результат (см. рисунок 10).

"Рисунок 10. Исследуемая кровь группы В"

г) В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми цоликлонами, для исключения неспецифической агглютинации произвести дополнительное контрольное исследование с раствором натрия хлорида, 0,9%. Для этого на планшет нанести большую каплю (100 мкл) раствора натрия хлорида, 0,9%, рядом добавить 10-30 мкл исследуемых эритроцитов. Капли перемешать стеклянной палочкой. Наблюдать за реакцией 3 минуты, покачивая планшет.

Исследуемая кровь принадлежит к группе АВ если в реакции с раствором натрия хлорида, 0,9% получен отрицательный результат (см. рисунок 11).

"Рисунок 11. Исследуемая кровь группы АВ"

7.2.3. Определение основных групп группы крови АВО перекрёстным методом при помощи стандартных сывороток АВО и стандартных эритроцитов АВО

Порядок проведения исследования:

Определение группы крови АВО производить на планшете со смачиваемой поверхностью.

1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. пациента, кровь которого исследуют, а также надписать специфичность изогемагглютинирующих сывороток АВО и стандартных эритроцитов АВО в порядке их нанесения.

2. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки АВО раскапать в два ряда: в первом ряду сыворотки одной серии О (анти-АВ), А (анти-В), В (анти-А), во втором ряду сыворотки другой серии О (анти-АВ), А (анти-В), В (анти-А) по одной большой капле (по 100 мкл) под соответствующими надписями.

3. В третий ряд раскапать по одной маленькой капле (10 мкл) стандартных эритроцитов О, А, В под соответствующими надписями.

4. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно взять пипеткой сыворотку крови пациента (100 мкл) и поместить рядом со стандартными эритроцитами АВО, соотношение стандартных эритроцитов и исследуемой сыворотки - 1:10. Этой же пипеткой из пробирки взять исследуемые эритроциты (10 мкл) и поместить рядом со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками АВО, соотношение исследуемых эритроцитов и стандартных сывороток - 1:10 (см. рисунок 12).

"Рисунок 12. Порядок расположения стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВО, стандартных эритроцитов АВО и соотношение с исследуемой кровью"

5. Каждую каплю исследуемого материала перемешать стеклянной палочкой с соответствующим диагностическим стандартом. Наблюдать за реакцией 5 минут, при постоянном покачивании планшета. После окончания экспозиции в те капли, где имеется агглютинация, добавить по одной капле (50 мкл) раствора натрия хлорида, 0,9%.

6. Трактовка результатов реакции.

Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов, агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких или крупных красных агрегатов.

При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается.

Результаты могут быть выражены в 4-х различных комбинациях.

а) Исследуемая кровь принадлежит к группе О, если в реакции со всеми стандартными изогемагглютинирующими сыворотками АВО и стандартными эритроцитами О получены отрицательные результаты, а положительные результаты получены в реакции со стандартными эритроцитами А и В (см. рисунок 13).

"Рисунок 13. Исследуемая кровь группы О, анти-АВ"

б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А, если в реакциях со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками О (анти-АВ), В (анти-А) и со стандартными эритроцитами В получены положительные результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой А (анти-В) и стандартными эритроцитами О и А (см. рисунок 14).

"Рисунок 14. Исследуемая кровь группы А, анти-В"

в) Исследуемая кровь принадлежит к группе В, если в реакциях со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками О (анти-АВ), А (анти-В) и со стандартными эритроцитами А получены положительные результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой В (анти-А) и стандартными эритроцитами О и В (см. рисунок 15).

"Рисунок 15. Исследуемая кровь группы В, анти-А"

г) В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми стандартными сыворотками, а со всеми стандартными эритроцитами получен отрицательный результат, для исключения неспецифической агглютинации провести дополнительное контрольное исследование со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой АВ группы. Для этого на планшет нанести большую каплю (100 мкл) стандартной изогемагглютинирующей сыворотки АВ, рядом маленькую каплю (10 мкл) исследуемых эритроцитов. Капли перемешать стеклянной палочкой. Наблюдать за реакцией 5 минут при покачивании планшета.

Исследуемая кровь принадлежит к группе АВ, если со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой АВ получен отрицательный результат (см. рисунок 16).

"Рисунок 16. Исследуемая кровь группы АВ"

7.2.4. Определение основных групп группы крови АВО перекрёстным методом при помощи цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ и стандартных эритроцитов АВО

Порядок проведения исследования:

Определение группы крови АВО производить на планшете со смачиваемой поверхностью.

1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. пациента, кровь которого исследуют, а также надписать специфичность цоликлонов анти-АВ, анти-В, анти-А и стандартных эритроцитов АВО в порядке их нанесения.

2. Цоликлоны анти-АВ, анти-В, анти-А раскапать в один ряд по одной большой капле (по 100 мкл) под соответствующими надписями.

3. Во второй ряд раскапать по одной маленькой капле (10-30 мкл) стандартных эритроцитов О, А, В групп.

4. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно взять пипеткой сыворотку крови пациента (100 мкл) и поместить рядом со стандартными эритроцитами АВО, соотношение стандартных эритроцитов и исследуемой сыворотки - 1:10. Этой же пипеткой из пробирки взять исследуемые эритроциты (10-30 мкл) и поместить рядом с цоликлонами анти-АВ, анти-В, анти-А, соотношение исследуемых эритроцитов и цоликлонов - 1:10 или 3:10 (см. рисунок 17)

"Рисунок 17. Порядок расположения цоликлонов и стандартных эритроцитов АВО и соотношение с исследуемыми эритроцитами"

5. Каждую каплю исследуемого материала перемешать стеклянной палочкой с соответствующим диагностическим стандартом. Наблюдать за реакцией 3 минуты, при постоянном покачивании планшета.

6. Трактовка результатов реакции.

Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов, агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких или крупных красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья.

При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается.

Результаты могут быть выражены в 4-х различных комбинациях.

а) Исследуемая кровь принадлежит к группе О, если в реакции если со всеми цоликлонами и стандартными эритроцитами О получены отрицательные результаты, а положительные результаты получены в реакции со стандартными эритроцитами А и В (см. рисунок 18).

"Рисунок 18. Исследуемая кровь группы О, анти-АВ"

б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А, если в реакции с цоликлонами анти-А и анти-АВ и со стандартными эритроцитами В получены положительные результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях с цоликлоном анти-В и стандартными эритроцитами О и А (см. рисунок 19).

"Рисунок 19. Исследуемая кровь группы А, анти-В"

в) Исследуемая кровь принадлежит к группе В, если в реакции с цоликлонами анти-В и анти-АВ и со стандартными эритроцитами А получены положительные результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях с цоликлоном анти-А и стандартными эритроцитами О и В (см. рисунок 20).

"Рисунок 20. Исследуемая кровь группы В, анти-А"

г) В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми цоликлонами, а со всеми стандартными эритроцитами получен отрицательный результат провести дополнительное контрольное исследование с раствором натрия хлорида, 0,9% (для исключения неспецифической агглютинации). Для этого на планшет нанести большую каплю (100 мкл) раствора натрия хлорида, 0,9%, рядом добавить маленькую каплю (10-30 мкл) исследуемых эритроцитов. Капли перемешать стеклянной палочкой. Наблюдать за реакцией 5 минут.

Исследуемая кровь принадлежит к группе АВ, если с раствором натрия хлорида, 0,9% получен отрицательный результат (см. рисунок 21).

"Рисунок 21. Исследуемая кровь группы АВ"

7.2.5. Определение основных групп крови АВО при помощи гелевой методики

7.2.5.1. Определение основных групп крови АВО при помощи идентификации групповых антигенов А и В в геле.

Для определения группы крови АВО использовать диагностическую карту, содержащую микропробирки для идентификации групповых антигенов А и В. Микропробирки для идентификации групповых антигенов А и В имеют цветную и соответствующую буквенную (А, В, АВ) маркировку.

Перед исследованием провести макроскопическую оценку диагностической карты. Не использовать карту, если в микропробирках наблюдается изменение цвета, в геле имеются взвешенные пузырьки, наблюдается уменьшение объёма геля или его растрескивание. Микропробирки должны содержать надосадочную жидкость. Если наблюдается рассредоточенное каплеобразование в верхней части микропробирки, рекомендуется центрифугировать карты перед использованием. Если капли не оседают, карту не использовать.

В настоящее время существует множество модификаций карт для определения групп крови. К каждой карте прилагается инструкция по использованию. Перед работой необходимо внимательно ознакомиться с прилагаемой инструкцией.

7.2.5.2. Определение основных групп крови АВО при помощи идентификации групповых антигенов А, В и естественных анти-А, анти-В антител в геле.

Для определения группы крови АВО использовать диагностическую карту, содержащую микропробирки для идентификации групповых антигенов А, В и естественных анти-А, анти-В антител. Микропробирки для идентификации групповых антигенов А и В имеют цветную и соответствующую буквенную (А, В, АВ) маркировку. Микропробирки для идентификации естественных анти-А, анти-В антител имеют белую и соответствующую буквенную (A1, В) маркировку.

Перед исследованием провести макроскопическую оценку диагностической карты. Не использовать карту, если в микропробирках наблюдается изменение цвета, в геле имеются взвешенные пузырьки, наблюдается уменьшение объёма геля или его растрескивание. Микропробирки должны содержать надосадочную жидкость. Если наблюдается рассредоточенное каплеобразование в верхней части микропробирки, рекомендуется центрифугировать карты перед использованием. Если капли не оседают карту не использовать.

В настоящее время существует множество модификаций карт для определения групп крови перекрёстным способом гелевой методикой. К каждой карте прилагается инструкция по использованию. Перед работой необходимо внимательно ознакомится с прилагаемой инструкцией.

7.2.5.3. Регистрация результатов исследования

Результат исследования занести в медицинскую документацию:

- трансфузионную карту

- "Журнал регистрации результатов иммуногематологического исследования крови"

ГАРАНТ:

Нумерация разделов приводится в соответствии с источником

7. Действия при обнаружении несоответствий

7.1. При наличие значительных затруднений при определении групповой принадлежности крови пациента в клинико-диагностической лаборатории УЗ образец направить в клинико-диагностическую лабораторию ГАУЗ "Республиканский центр крови МЗ РТ" для дальнейшего исследования (см. приложение 6). В направлении указать результаты исследования и характер затруднений.

7.2. Дополнительные сведения об особенностях выполнения

У некоторых категорий пациентов встречаются затруднения при определении групповой принадлежности. Индивидуальные особенности, характер затруднений и способы решения проблемы представлены в таблице 7.

Таблица 7 - Категории пациентов, у которых встречаются затруднения при определении основных групп крови АВО

N п/п	Категория пациентов	Индивидуальные особенности	Характер затруднения	Способ решения проблемы
1.	Новорожденные	Слабо выражена активность групповых антигенов А и В	Слабо выраженная агглютинация, вероятность пропустить реакцию агглютинации	Использовать прямой метод с цоликлонами анти-А, анти-В, анти-АВ или гелевую методику
		Отсутствие в сыворотке естественных групповых анти-А, анти-В антител	Отсутствие агглютинации во всех лунках со стандартными эритроцитами АВО при исследовании перекрестным методом
2.	Беременные	Ослабление активности групповых антигенов А и В	Слабо выраженная агглютинация, вероятность пропустить реакцию агглютинации	Использовать различные реактивы в перекрёстном методе
3.	Больные с гематологическими или онкологическими заболеваниями и другими видами патологических состояний (ожоги, цирроз печени, сепсис и др.)	Ослабление активности или полная утрата групповых антигенов А и В вследствие приема цитостатиков, больших доз гормональных препаратов, радиотерапия, химиотерапия	Слабо выраженная агглютинация или ее отсутствие. Несовпадение результатов исследования, полученных со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками АВО (цоликлонами анти-А, анти-В, анти-АВ) и стандартными эритроцитами АВО	Использовать различные реактивы в перекрёстном методе. При необходимости гемотрансфузии эритроцитсодержащих компонентов крови образец крови больного направить в специализированную лабораторию службы крови для индивидуального подбора
		Наличие неспецифических алло- и/или аутоантител	Ложно-положительные реакции агглютинации	Использовать перекрёстный метод или гелевую методику. При необходимости гемотрансфузии эритроцитсодержащих компонентов крови образец крови больного направить в специализированную лабораторию службы крови для индивидуального подбора
		Полиагглютинабельность исследуемого образца	Положительные результаты контроля	Использование гелевой методики. При необходимости гемотрансфузии эритроцитсодержащих компонентов крови образец крови больного направить в специализированную лабораторию службы крови для индивидуального подбора
4.	У различных категорий пациентов	Слабые варианты антигена А	Несовпадение результатов исследования, полученных со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками АВО (цоликлонами анти-А, анти-В, анти-АВ) и стандартными эритроцитами АВО	Использовать цоликлон анти-А1 (лектин) или гелевую методику. При необходимости гемотрансфузии эритроцитсодержащих компонентов крови образец крови больного направить в специализированную лабораторию службы крови для индивидуального подбора
		Массивная гемотрансфузия или трансфузия несовместимых переносчиков газов крови по АВО	Сомнительный результат исследования	Использовать гелевую методику. При необходимости гемотрансфузии эритроцитсодержащих компонентов крови образец крови больного направить в специализированную лабораторию службы крови для индивидуального подбора
		Гиперлипидемия	Возможна неспецифическая агглютинация	Исследуемые эритроциты отмыть. При необходимости гемотрансфузии эритроцитсодержащих компонентов крови образец крови больного направить в специализированную лабораторию службы крови для индивидуального подбора
		Внутривенное введение растворов декстранов или желатина	Ложноположительные реакции агглютинации и (или) положительный результат контроля (в т.ч. аутоконтроля)	Исследуемые эритроциты отмыть. При необходимости гемотрансфузии эритроцитсодержащих компонентов крови образец крови больного направить в специализированную лабораторию службы крови для индивидуального подбора
		Отсутствие естественных групповых анти-А, анти-В антител	Отсутствие результатов исследования со стандартными эритроцитами АВО	При необходимости гемотрансфузии СЗП переливать свежезамороженную плазму группы АВ в качестве универсального донора плазмы
		Двойная популяция при определении группы крови гелевым методом	Одновременное наличие и отсутствие агглютинации в одном микропробирке	При необходимости гемотрансфузии эритроцитсодержащих компонентов крови образец крови больного направить в специализированную лабораторию службы крови для индивидуального подбора