Приложение 2. Инструкция по забору и транспортировке в ГУЗ "Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями" министерства здравоохранения Хабаровского края биологического материала для проведения обследования на вирусную нагрузку ВИЧ и ДНК ВИЧ методом ПЦР и иммунный статус методом проточной цитометрии

Приложение 2
к приказу министра здравоохранения
Хабаровского края
и Управления Роспотребнадзора
по Хабаровскому краю
от 11 мая 2007 г. N 151/43

Инструкция
по забору и транспортировке в ГУЗ "Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями" министерства здравоохранения Хабаровского края биологического материала для проведения обследования на вирусную нагрузку ВИЧ и ДНК ВИЧ методом ПЦР и иммунный статус методом проточной цитометрии

1. Общие правила подготовки пациентов

1.1. Забор крови проводится с 8-00 до 10-00 часов утра.

1.2. С момента последнего приема пищи до забора крови должно пройти не менее 12 часов.

1.3. В день накануне взятия крови пациент должен воздержаться от употребления алкоголя, жирной пищи, а так же# от чрезмерной физической нагрузки.

1.4. При проведении пациенту внутривенных вливаний, пункцию вены для взятия крови необходимо осуществлять на другой руке.

1.5. При взятии пробы из артериальных или венозных катетеров, канюлю предварительно промывают изотоническим солевым раствором (физиологическим раствором), первые 5 мл крови следует выбросить, а затем взять пробу.

1.6. Необходимо удалить жгут сразу после прокола вены. Длительность наложения жгута не должна превышать 1 минуты.

1.7. Технологии забора и транспортировки биологического материала определяются в соответствии с таблицей.

2. Требования к забору и транспортировке биологического материала для ПЦР-диагностики

2.1. Забор крови производят натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8 - 1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 5 мл. Забор может осуществляться в специальную вакуумную систему типа "Venoject" (с ЭДТА) или "Vacuett" (сиреневые крышки - К3ЭДТА).

2.2. Кровь из шприца после забора аккуратно (без образования пены) переносит# в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом.

2.3. В качестве антикоагулянта может быть использован 6 % раствор ЭДТА в соотношении 1:20 или 3,8 % раствор цитрата натрия в соотношении 1:9.

2.4. Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз для перемешивания с антикоагулянтом. Недопустимо замораживание образцов цельной крови!

2.5. Отбор плазмы должен быть произведен в течение 6 часов с момента взятия материала, для чего образцы крови хранят при температуре 2 - 25 град. С.

2.6. Плазму крови получают центрифугированием пробирок с цельной кровью при 800-1600g (3 тыс. об./мин. на центрифуге "Элекон", Россия) в течение 20 мин. при комнатной температуре. Затем отбирают плазму в количестве не менее 1 мл отдельными наконечниками с аэрозольным барьером в стерильные пробирки объемом 1,5 мл.

2.7. Плазма может храниться при температуре 2 - 8 град. С в течение 5 суток; при температуре минус 40 град. С - 12 месяцев.

2.8. Транспортировка биологического материала в лабораторию государственного учреждения здравоохранения "Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями" министерства здравоохранения Хабаровского края осуществляется в соответствии с методическими указаниями МУ 4.2.2039-05 "Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории".

2.9. Образцы крови, полученные по алгоритму, изложенному в п. 2.1. - 2.4. должны быть доставлены в течение 6 часов с момента взятия для количественного определения нуклеиновых кислот - "вирусная нагрузка" и 12 часов для качественного определения нуклеиновых кислот методом ПЦР.

2.10. Кровь транспортируется в термоконтейнере с охлаждающими элементами при температуре 2 - 8 град. С.

2.11. Образцы плазмы, полученные по алгоритму, изложенному в п. 2.1. - 2.7. транспортируются при температуре 2 - 8 град. С в течение 3 суток или в замороженном виде в течение суток. Недопустимо оттаивание замороженных образцов плазмы!

3. Требования к забору и транспортировке биологического материала для исследования иммунного статуса

3.1. Забор крови производят натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8 - 1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 5 мл. Забор может осуществляться в специальную вакуумную систему типа "Vacuett" (сиреневые крышки - К3ЭДТА).

3.2. Объем крови должен составлять не менее 10 мл.

3.2. Кровь из шприца после забора аккуратно (без образования пены) переносит# в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом.

3.3. В качестве антикоагулянта может быть использован только 6 % раствор ЭДТА в соотношении 1,5 мг на 1 мл крови.

3.4. Необходимо соблюдать правильное соотношение крови и антикоагулянта.

3.5. Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают не менее 8 раз для перемешивания с антикоагулянтом. Встряхивание пробирки недопустимо!

3.6. Транспортировка биологического материала в лабораторию государственного учреждения здравоохранения "Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями" министерства здравоохранения Хабаровского края осуществляется в соответствии с методическими указаниями МУ 4.2.2039-05 "Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории".

3.7. Полученные образцы крови должны быть доставлены в лабораторию ГУЗ "Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями" министерства здравоохранения Хабаровского края в течение 48 часов с момента взятия.

3.8. Кровь транспортируется в термоконтейнере в вертикальном положении при температуре 18 - 25 град. С.

Заместитель начальника управления

И.Д. Филимончикова

Технологии пробоподготовки и доставки биоматериала для исследований

Контингенты	Диагности- ческий метод	Вид, объем биоматери- ала,	Пробоподготовка и условия забора крови	Условия хранения	Транспортировка
					Сертифицирован- ная тара	Срок доставки
Дети с перинатальным контактом по ВИЧ МКБ-10: (R.75)	Детекция ДНК ВИЧ методом ПЦР (качествен- ная реакция)	Кровь венозная 5,0 мл	- Вакуумная система типа "Venoject" (с ЭДТА) или "Vacuett" (сиреневые крышки - К3ЭДТА) - Одноразовая пластиковая пробирка с антикоагулянтом 6 % раствор ЭДТА в соотношении 1:20 или 3,8 % раствор цитрата натрия в соотношении 1:9	Не заморажи- вать	Термоконтейнер с хладоэлементом +2+8 С	12 часов с момента взятия крови
Дети и взрослые с установленным диагнозом ВИЧ-инфекции МКБ-10 (В20-В24, Z21)	Детекция РНК ВИЧ методом ПЦР количестве- нная	Кровь венозная 5,0 мл	- Вакуумная система типа "Venoject" (с ЭДТА) или "Vacuett" (сиреневые крышки - К3ЭДТА) - Одноразовая пластиковая пробирка с антикоагулянтом 6 % раствор ЭДТА в соотношении 1:20 или 3,8 % раствор цитрата натрия в соотношении 1:9	Не заморажи- вать	Термоконтейнер с хладоэлементом +2+8 С	6 часов с момента взятия крови
		Плазма не менее 1,0 мл	центрифугирование цельной кровью при 3 тыс. об./мин. в течение 20 мин. при комнатной температуре. Отбирают наконечниками с аэрозольным барьером в стерильные пробирки объемом 1,5 мл.	- При температуре 2 - 8°С в течение 5 суток; - при температуре минус 70 С - длительно. Не оттаивать	Термоконтейнер с хладоэлементом +2+8°С - Термоконтейнер с хладоэлементом 0 - 2°С	72 часа 24 часа в заморожен- ном виде
Дети с перинатальным контактом по ВИЧ МКБ-10: (R.75) Дети и взрослые с установленным диагнозом ВИЧ-инфекции МКБ-10 (В20-В24.,Z21)	Исследова- ние иммунного статуса методом проточной цитометрии	Кровь венозная 5,0 мл	- Вакуумная система типа "Venoject" (с ЭДТА) или "Vacuett" (сиреневые крышки - К3ЭДТА) - Одноразовая пластиковая пробирка с антикоагулянтом 6 % раствор ЭДТА в соотношении 1,5 мг на 1 мл крови. Переворачивать. Не встряхивать	Не заморажи- вать	Термоконтейнер, в вертикальном положении, +18+25°С	48 часов