Приложение N 3. Технология выполнения простой медицинской услуги 12.05.006 "Определение резус-принадлежности"

Приложение N 3
к приказу МЗ РТ
от 15 июля 2010 г. N 908

Технология
выполнения простой медицинской услуги 12.05.006 "Определение резус-принадлежности"

Основанием для разработки "Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.05.006 "Определение резус-принадлежности", является Отраслевой классификатор "Простые медицинские услуги" (ОК ПМУ N 91500.09.0001-2001), утвержденный приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 10 апреля 2001 г. N 113.

1. Введение

1.1. Сокращения.

ГУЗ РСПК МЗ РТ - Государственное учреждение здравоохранения "Республиканская станция переливания крови Министерства здравоохранения Республики Татарстан"

КЛД - клиническая лабораторная диагностика

ЛПУ - лечебно-профилактическое учреждение

МЗ РТ - Министерство здравоохранения Республики Татарстан

МЗ РФ - Министерство здравоохранения Российской Федерации

ПМУ - простая медицинская услуга

РПГА - реакция прямой гемагглютинации

ТВ ПМУ - технология выполнения простой медицинской услуги

1.2. Определения

Простая медицинская услуга - неделимая услуга, выполняемая по формуле "пациент" + "специалист" = "один элемент профилактики, диагностики или лечения".

Иммуногематология - наука о групповых свойствах крови.

Система Резус - одна из наиболее полиморфных антигенных систем эритроцитов человека. Она включает около 50 серологически различных антигенов, не считая слабых, переходных и парциальных форм. На эритроцитах человека имеются 5 основных антигенов системы Резус (D, C, c, E, e). Наибольшее клиническое значение имеет антиген D. Обладая выраженными иммуногенными свойствами, антиген D в 95% является причиной гемолитической болезни новорожденного, а также причиной тяжелых посттрансфузионных осложнений. Лиц, имеющих антиген D, относят к Rh+, не имеющих антиген D относят к Rh-.

Антиген D имеет слабые варианты, объединяемые в группу Du, частота которой в популяции составляет около 1%. Эти эритроциты слабо или вообще не агглютинируются полными анти-Rh-антителами (IgМ) в реакции прямой агглютинации.

Реципиенты, содержащие антиген Du, должны быть отнесены к резус-отрицательным и им должна быть перелита только резус-отрицательная кровь, так как нормальный антиген D может вызвать у таких лиц иммунный ответ. Поэтому кровь реципиентов необязательно тестировать на присутствие Du.

Иммуногенность других (минорных) антигенов системы Резус значительно ниже и убывает в ряду: с>Е>С>е. Определение минорных антигенов системы Резус, как правило, производится при необходимости многократных трансфузий, в тех случаях, когда в сыворотке реципиента обнаружены иммунные антитела к антигенам системы Резус, в том числе при индивидуальном подборе крови.

Универсальный реагент антирезус Rh0(D) - применяется для определения резус-принадлежности крови, независимо от ее групповой принадлежности по системе АВ0. Реагент готовят из сывороток человека, содержащие неполные резус - антитела IgG с добавлением 33% раствора полиглюкина.

Цоликлон анти-D Супер - это реагент, содержащий моноклональные анти-D антитела, которые продуцируются гетерогибридомой, полученной в результате слияния человеческой лимфобластной линии с миеломной клеточной линией мыши. Моноклональные антитела принадлежат к классу иммуноглобулинов IgМ, являются полными антителами и вызывают прямую агглютинацию эритроцитов, содержащих D антиген.

Агглютинация - это реакция взаимодействия антигена со специфическим антителом, проявляется в виде агрегации (склеивания) эритроцитов.

Аутоантитела - это антитела, имеющие специфичность к собственным антигенам индивида.

Неспецифическая агглютинация - это агглютинация неожиданная, атипичная, не свойственная конкретной групповой антигенной системе. В основе неспецифической агглютинации лежат определенные специфические механизмы. На появление неспецифической агглютинации влияют: белковый состав среды, солевой состав среды, состояние свертывающей системы крови, гормонального фона.

Гелевая методика - это метод определения резус-принадлежности, основанный на комбинации методов агглютинации и гель-фильтрации. Проводится с помощью пластиковых диагностических карточек, которые состоят из микропробирок, заполненных полиакриламидным гелем и соответствующими реагентами.

1.3. Сведения о разработчиках

В разработке "Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.05.006 "Определение резус-принадлежности" участвовали специалисты Министерства здравоохранения Республики Татарстан и Государственного учреждения здравоохранения "Республиканская станция переливания крови Министерства здравоохранения Республики Татарстан" (см. таблицу 1).

Таблица 1

Сведения о разработчиках "Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.05.006 "Определение резус-принадлежности"

Ф.И.О. разработчиков	Место работы, занимаемая должность, степень, звание	Адрес места работы	Рабочий телефон
Лысенко Галина Викторовна	Начальник Управления качества медицинской помощи и отраслевой стандартизации МЗ РТ	4200111, г. Казань, ул. Островского, д. 11/6	(843) 231-79-73
Бурыкин Игорь Михайлович	Начальник отдела отраслевой стандартизации МЗ РТ, к.м.н.	4200111, г. Казань, ул. Островского, д. 11/6	(843) 231-79-74
Кочнев Александр Владимирович	Ведущий советник отдела отраслевой стандартизации МЗ РТ, к.м.н.	4200111, г. Казань, ул. Островского, д. 11/6	(843) 231-79-74
Закирова Ильмира Нуриахметовна	Ведущий консультант отдела отраслевой стандартизации МЗ РТ	4200111, г. Казань, ул. Островского, д. 11/6	(843) 231-79-76
Сидорук Евгений Александрович	Главный врач ГУЗ РСПК МЗ РТ, главный внештатный специалист трансфузиолог МЗ РТ, к.м.н.	420088, г. Казань, ул. Ново-Азинская, д. 33	(843) 272-28-03
Сибгатуллина Лилия Нагимзяновна	Заместитель главного врача по медицинской части ГУЗ РСПК МЗ РТ	420029, г. Казань, ул. Сибирский тракт, д. 33	(843) 273-43-72
Хамидуллина Эльмира Рашитовна	Заместитель главного врача по организационно-методической работе ГУЗ РСПК МЗ РТ	420088, г. Казань, ул. Ново-Азинская, д. 33	(843) 273-78-23
Гадыльшина Райса Сагитовна	Заведующая иммунологическим отделением ГУЗ РСПК МЗ РТ	420088, г. Казань, ул. Ново-Азинская, д. 33	(843) 272-26-61
Бельская Елена Евгеньевна	Врач клинической лабораторной диагностики иммунологического отделения ГУЗ РСПК МЗ РТ	420088, г. Казань, ул. Ново-Азинская, д. 33	(843) 272-26-61

Рецензенты:

Д.Т. Сиразитдинов - главный специалист эксперт МЗ РТ по клинической лабораторной диагностике.

Н.Н. Аксенова - заведующая кабинетом гемотрансфузий Государственного учреждения здравоохранения "Республиканский онкологический диспансер МЗ РТ", врач-хирург высшей категории, к.м.н.;

Мухамедов Д.Р. - врач анестезиолог-реаниматолог Муниципального бюджетного учреждения здравоохранения "Апастовская центральная районная больница".

1.4. Цели и задачи

ТВ ПМУ "Определение резус-принадлежности" разработана с целью нормативного обеспечения и унификации процесса выполнения простой медицинской услуги 12.05.006 "Определение резус-принадлежности" в медицинских учреждениях на территории Республики Татарстан.

ТВ ПМУ разработана для решения следующих задач:

- нормативного обеспечения внедрения стандарта ТВ ПМУ "Определение резус-принадлежности";

- установления единых требований к оказанию ПМУ "Определение резус-принадлежности";

- унификации расчетов трудозатрат на выполнение ТВ ПМУ "Определение резус-принадлежности" в медицинских учреждениях на территории Республики Татарстан;

- контроля качества и безопасности, оказанной пациенту ПМУ "Определение резус-принадлежности" в медицинских учреждениях на территории Республики Татарстан;

- проверки на соответствие установленным требованиям при проведении процедуры лицензирования;

- защиты прав пациента и врача при разрешении спорных и конфликтных вопросов.

ТВ ПМУ представляет собой систематизированный свод медицинских правил и условий, технического обеспечения, определяющий порядок и последовательность действий, выполняемых медицинским персоналом.

При разработке ТВ ПМУ "Определение резус-принадлежности" использовались нормативные документы (приказы, инструкции, методические указания МЗ РФ и МЗ РТ), учитывались результаты научных исследований.

2. Требования отраслевых стандартов технологий выполнения ПМУ

2.1. Требования к специалистам и вспомогательному персоналу, включая требования к обеспечению безопасности

Определение резус-принадлежности проводят специалисты, имеющие подготовку по вопросам иммуногематологии на базе учреждений службы крови РТ и/или на специализированных циклах усовершенствования на базе учреждений дополнительного профессионального образования (см. таблицу 2).

Таблица 2

Требования к специалистам для выполнения ПМУ "Определение резус-принадлежности"

Медицинское учреждение	Выполнение ПМУ "Определение резус-принадлежности"	Медицинский персонал	Дополнительные требования к медицинскому персоналу
Стационар, в том числе дневной в амбулаторно-поликлинических условиях	Первично и перед каждым переливанием крови и ее компонентов	Лечащий или дежурный врач Врач-трансфузиолог	Должны иметь специальную подготовку по вопросам иммуногематологии на специализированных циклах усовершенствования на базе учреждений дополнительного профессионального образования и/или на базе учреждений службы крови РТ не реже одного раза в 5 лет
	Централизованное переопределение	Врач КЛД или биолог КЛД
Другие ЛПУ	Для амбулаторных пациентов	Врач КЛД или биолог КЛД

Все манипуляции проводятся в медицинской одежде с использованием индивидуальных средств защиты (медицинские перчатки, защитные очки или щитки). С любыми образцами крови пациента следует обращаться как с потенциальными переносчиками инфекционных заболеваний.

2.2. Условия выполнения ПМУ и функциональное назначение

Таблица 3

Условия выполнения ПМУ и функциональное назначение

Наименование ПМУ	Условия оказания	Функциональное назначение
12.05.006 "Определение резус-принадлежности"	Амбулаторно-поликлинические	Диагностика
12.05.006 "Определение резус-принадлежности"	Помощь в условиях стационара, в том числе дневного стационара	Диагностика

2.3. Материальные ресурсы.

Для выполнения ПМУ "Определение резус-принадлежности" должно быть оснащено отдельное место (или специальное помещение), которое оборудуется согласно требованиям приказа МЗ РФ от 09.01.1998 N 2 "Об утверждении инструкций по иммуносерологии".

2.3.1. Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения

Таблица 4

Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения, необходимые для определения резус-принадлежности, а также альтернативные приборы и изделия медицинской техники

Наименование прибора, изделия медицинской техники и др.	Количество приборов, инструментов, изделий медицинской техники	Альтернативный прибор, изделие медицинской техники
Определение резус-принадлежности при помощи универсального реагента антирезус Rh0(D)
Стол лабораторный	1 шт.	Стол с покрытием из пластика
Стул	1 шт.
Настольная лампа	1 шт.	Настенная лампа
Центрифужные пробирки	2 шт. на 1 исследование	Пробирки биологические
Пипетки Пастера	1 шт.	Автоматические пипетки переменного объема 20-200 мкл
Песочные часы на 3 минуты	1 шт.	Секундомер
Лупа с 4-8-х кратным увеличением	1 шт.
Штатив лабораторный на 10 гнезд	1 шт.
Стеклянные стаканы	2 шт.	Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная ОПН-3	1 шт.	Центрифуга лабораторная СМ-6 М, ELMI
Определение резус-принадлежности при помощи моноклонального реагента анти-D Супер
Стол лабораторный	1 шт.	Стол с покрытием из пластика
Стул	1 шт.
Настольная лампа	1 шт.	Настенная лампа
Планшеты для иммуногематологических исследований	1 шт. на 1 исследование	Тарелки фарфоровые или эмалированные
Пипетки Пастера	1 шт.	Автоматические пипетки переменного объема 20-200 мкл
Песочные часы на 3 минуты	1 шт.	Секундомер
Лупа с 4-8-хкратным увеличением	1 шт.
Штатив лабораторный на 10 гнезд	1 шт.
Центрифуга лабораторная ОПН-3	1 шт.	Центрифуга лабораторная СМ-6 М, ELMI
Стеклянные стаканы	2 шт.	Стеклянные баночки
Определение резус-принадлежности гелевой методикой
Стол лабораторный	1 шт.	Стол с покрытием из пластика
Стул	1 шт.
Штатив лабораторный на 10 гнезд	1 шт.
Стеклянные стаканы	2 шт.	Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная ОПН-3	1 шт.	Центрифуга лабораторная СМ-6М, ELMI
Центрифуга для гелевых пластиковых карт	1 шт.
Автоматическая пипетка переменного объема	5-40 мкл 1 шт. 100-1000 мкл 1 шт.
Штатив для автоматических пипеток переменного объема	1 шт.
Пробирки центрифужные	1 шт.

2.3.2. Реактивы

Для выполнения ПМУ "Определение резус-принадлежности" используются различные иммунологические стандарты (см. таблицу 5).

Таблица 5

Иммунологические стандарты, используемые для определения резус-принадлежности

Наименование реактива	Документ, регламентирующий использование реактива	Количество реактива, необходимое для выполнения 1-го исследования	Сроки и особенности хранения реактива, работы с ним*	Особенности уничтожения и обеззараживания реактива или продуктов реакций	Требования к обеспечению безопасности персонала при работе с реактивом
Определение резус-принадлежности при помощи универсального реагента антирезус Rh0(D)
Универсальный реагент антирезус Rh0(D)	Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 N 2 "Об утверждении инструкций по иммуносерологии"	2 капли (100 мкл)	Хранить при t+2...+8°С. Срок годности - 6 месяцев с даты изготовления. После вскрытия годен в течение 2 недель	Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез. средств с содержанием активного хлора, дезинфекция лабораторной посуды производится с применением дезинфицирующих средств, не содержащих активного хлора	Работа в медицинской спец. одежде, медицинских перчатках, защитных очках (щитках)
Раствор полиглюкина 33%		1 капля (50 мкл)	Хранить при t+18...+20°С. Срок годности -6 месяцев с даты изготовления. После вскрытия годен в течение срока годности
Раствор натрия хлорида, 0,9%		По 3-5 мл в каждую пробирку	Хранить при t+15...+25°С
Определение резус-принадлежности при помощи цоликлона анти-D Супер
Цоликлон анти-D Супер	Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 N 2 "Об утверждении инструкций по иммуносерологии"	2 капли (100 мкл)	Хранить при t+2...+8°С. Срок годности - 1 год с даты изготовления. После вскрытия годен в течение 1 месяца	Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез. средств с содержанием активного хлора, дезинфекция лабораторной посуды производится с применением дезинфицирующих средств, не содержащих активного хлора	Работа в медицинской спец. одежде, медицинских перчатках, защитных очках (щитках)
Определение резус-принадлежности гелевой методикой
Диагностические карты для определения резус-принадлежности	Инструкции, прилагаемые к соответствующим диагностическим картам	От 1/4 до 1 шт. в зависимости от используемой диагностической карты	Хранить при t+15...+25°С	Произвести дезинфекцию как биологических отходов (класс отходов Б)	Работа в медицинской спецодежде, медицинских перчатках, защитных очках (щитках)
Раствор для приготовления суспензии исследуемых эритроцитов	Инструкция, прилагаемая к раствору	От 0,5 до 1,0 мл в зависимости от производителя	Хранить при t+2...+8°С

* - Температура внутри холодильной камеры, где хранятся реактивы, контролируется средним медработником дважды в день. Показания термометра регистрируются в "Журнале регистрации температурного режима хранения диагностических стандартов для иммуногематологических исследований" (см. приложение 1).

2.3.3. Прочий расходуемый материал

Для выполнения ПМУ "Определение резус-принадлежности" используются прочий расходуемый материал (см. таблицу 6).

Таблица 6

Прочий расходуемый материал, необходимый для определения резус-принадлежности

Наименование	Количество	Примечание
Определение резус-принадлежности при помощи универсального реагента антирезус Rh0(D) или цоликлона анти-D Супер
Ватно-марлевый тампон	На 1 тампон: вата - 3,0 гр., бинт - 30 см	Для подсушивания пипетки и стеклянной палочки
Медицинские перчатки одноразовые	1 пара на каждые 3 часа работы	Заменить немедленно при нарушении целостности или сильном загрязнении
Раствор натрия хлорида, 0,9%	0,5 л	Для промывания пипеток и палочек
Спирт этиловый медицинский, 70,0%	3,0 гр. на 1 обработку	Для обработки рук персонала после окончания работы
Дезинфицирующий раствор	В соответствии с методическими указаниями по применению дез. средств, разрешенных к использованию в РФ и РТ	Для дезинфекции биологического материала, лабораторной посуды и рабочего места
Определение резус-принадлежности гелевой методикой
Медицинские перчатки одноразовые	1 пара на каждые 3 часа работы	Заменить немедленно при нарушении целостности или сильном загрязнении
Спирт этиловый медицинский, 70,0%	3,0 гр. на 1 обработку	Для обработки рук персонала после окончания работы
	10 гр. на 1 обработку	Для обработки центрифуги
Наконечники для автоматических пипеток переменного объема, одноразовые	3 шт. на 1 исследование
Дезинфицирующий раствор	В соответствии с методическими указаниями по применению дез. средств, разрешенных к использованию в РФ	Для дезинфекции биологического материала, лабораторной посуды и рабочего места

2.4. Характеристика методики выполнения ПМУ "Определение резус-принадлежности"

2.4.1. Требования к образцам крови.

Перед процедурой забора крови на исследование у пациента уточняются его фамилия, имя и отчество. Берется сухая чистая пробирка, на которую наносится следующая информация о пациенте: Ф.И.О., дата забора крови, для стационарных больных - N медицинской карты. Кровь пациента забирается из вены в количестве 3-5 мл и переносится в подписанную пробирку. Для исследования используют цельную кровь, отмытые эритроциты, эритроциты в плазме, сыворотке, консерванте или физиологическом растворе.

При наличии у пациента анемии (содержание гемоглобина крови менее 70 г/л) для получения достаточного количества эритроцитов использовать для исследования образец крови пациента, с консервантом (цитрат натрия, ЭДТА). Соотношение исследуемой крови и цитрата натрия 10:1, исследуемой крови и ЭДТА 100:1.

Использовать для исследования кровь пациента не более двухдневного срока хранения при t+2°С...+8°С.

Не использовать для исследований гемолизированную кровь. При наличии гемолиза процедуру взятия крови повторить.

2.4.2. Требования к помещению.

Иммуногематологические исследования проводятся в помещении с естественным освещением, температура воздуха в помещении должна быть в пределах +15°С...+25°С.

2.4.3. Требования к объемам исследований в зависимости от медицинского учреждения.

2.4.3.1. Стационар, в том числе дневной стационар в амбулаторно-поликлинических условиях.

При поступлении в стационар резус-принадлежность пациенту определяет дежурный или лечащий врач универсальным реагентом антирезус Rh0(D) или цоликлоном анти-D Супер. Во избежание ошибки процедуру взятия крови и определения резус-принадлежности повторяют. Повторное определение резус-принадлежности крови осуществляется централизованно универсальным реагентом антирезус Rh0(D), цоликлоном анти-D Супер или гелевой методикой в лаборатории ЛПУ, кабинете переливания крови или в отделении переливания крови. При направлении на централизованное переопределение образец крови пациента сопровождается направлением (см. приложение 2).

Для первичного определения при поступлении пациента и переопределения резус-принадлежности используются диагностические стандарты различных серий.

Результат переопределения вклеивается в медицинскую карту (см. приложение 2). При совпадении результатов первичного и централизованного переопределения резус-принадлежность крови пациента выносится на титульный лист медицинской карты, скрепляется подписью врача, проводившего первичное определение.

Категорически запрещается переносить сведения о резус-принадлежности крови пациента с любого другого документа!

Перед переливанием крови и ее компонентов определение резус-принадлежности крови реципиента проводится с использованием универсального реагента антирезус Rh0(D) или цоликлона анти-D Супер. Предтрансфузионный образец крови реципиента хранить при температуре t+2°С...+8°С в течение 5 суток для дальнейшего исследования крови реципиента в специализированной лаборатории службы крови при возникновении посттрансфузионного осложнения.

Определение резус-принадлежности донорской крови из сегмента трубки контейнера перед трансфузией не проводится.

2.4.3.2. Женская консультация.

При постановке на учет по беременности резус-принадлежность определяют универсальным реагентом антирезус Rh0(D) или цоликлоном анти-D Супер.

Повторное определение резус-принадлежности производят в 28-30 недель беременности при помощи универсального реагента антирезус Rh0(D) или цоликлона анти-D Супер другой серии, или гелевой методикой.

Результат определения резус-принадлежности, полученный в лаборатории женской консультации заносится в "Журнал регистрации результатов определения групповой и резус-принадлежности" (см. приложение 3).

Категорически запрещается переносить сведения о резус-принадлежности крови пациента с любого другого документа!

При несовпадении результатов первичного и повторного исследования образец крови беременной женщины направить в специализированную лабораторию СПК или ОПК для дальнейшего исследования.

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

2.4.3.2. Поликлиника.

Для амбулаторно-поликлинических пациентов определение резус-принадлежности производится универсальным реагентом антирезус Rh0(D), цоликлоном анти-D Супер или гелевой методикой в клинико-диагностической лаборатории.

Результат определения резус-принадлежности, полученный в лаборатории поликлиники заносится в "Журнал регистрации результатов определения групповой и резус-принадлежности" (см. приложение 3).

Категорически запрещается переносить сведения о резус-принадлежности крови пациента с любого другого документа!

2.4.4. Методы определения резус-принадлежности.

Резус-принадлежность определяется в реакции агглютинации с помощью моноклональных реагентов или изоиммунных антирезусных сывороток, предназначенных для выявления Rh0(D)-антигена в реакции прямой агглютинации (на плоскости и в пробирочном тесте; в солевой среде; в присутствии высокомолекулярных усилителей; с эритроцитами, обработанными протеолитическими ферментами) или в непрямом антиглобулиновом тесте (непрямая проба Кумбса). Метод определения зависит от класса антител в реагенте: если в нем присутствуют полные антитела (класса IgM), то реагент используется для определения резус-фактора методом прямой агглютинации в солевой среде или на плоскости; если в нем содержатся неполные антитела (класса IgG), то он используется в реакции агглютинации в присутствии высокомолекулярных усилителей (альбумина, 10% раствора желатина, 33% раствора полиглюкина и др.), с эритроцитами, обработанными протеолитическими ферментами, в непрямом антиглобулиновом тесте.

Прежде чем приступить к исследованию, необходимо произвести макроскопическую оценку реагентов: реагенты должны быть прозрачными, без осадка и других признаков загрязнения; ампулы (флаконы) после вскрытия должны быть закрытыми для предотвращения подсыхания реагентов. Проверить срок годности реагентов (сроки годности реагентов см. таблица 5).

Перед работой иммунологические стандарты выдержать при комнатной температуре около 1 часа.

2.4.4.1. Определение резус-принадлежности при помощи универсального реагента антирезус Rh0(D) для экспресс-метода в пробирках без подогрева.

Порядок проведения исследования:

1. Взять две пробирки, подписать.

2. В первую пробирку (опыт) добавить две капли универсального реагента антирезус (100 мкл). Во вторую (контрольная пробирка)- две капли раствора натрия хлорида 0,9% (100 мкл) и одну каплю (50 мкл) 33% раствора полиглюкина.

3. В обе пробирки добавить по одной капле (50 мкл) исследуемых эритроцитов (см. рисунок 1).

"Рисунок 1. Внесение исследуемых эритроцитов"

4. Содержимое пробирок перемешать встряхиванием и затем медленно поворачивать по оси, наклоняя почти до горизонтального положения так, чтобы содержимое растекалось по ее стенкам (см. рисунок 2). Эту процедуру выполнять в течение трех минут.

"Рисунок 2. Перемешивание содержимого пробирок"

5. Через три минуты в обе пробирки добавить по 3-5 мл физ. раствора. Содержимое пробирок перемешать 2-3-кратным перевертыванием пробирок, не встряхивая.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу.

При наличии агглютинации в виде взвеси мелких или крупных красных комочков на фоне просветленной или полностью обесцвеченной жидкости исследуемую кровь считают резус-положительной Rh0(D)+(полож.) (см. рисунок 3)

"Рисунок 3. Исследуемая кровь Rh0(D)+ (положительная)"

При отсутствии агглютинации (в пробирке наблюдается равномерно окрашенная слегка опалесцирующая жидкость без признаков агглютинации эритроцитов) исследуемую кровь следует считать резус-отрицательной Rh0(D)-(отр.) (см. рисунок 4).

"Рисунок 4. Исследуемая кровь Rh0(D)- (отрицательная)"

Результат исследования учитывается как истинный только при отрицательном результате в контрольной пробирке. При наличии агглютинации в контрольной пробирке исследование повторить после процедуры отмывания эритроцитов. Для этого в центрифужную пробирку внести исследуемые эритроциты (0,5-1 мл), добавить раствор натрия хлорида 0,9% до верха пробирки. Пробирку закрыть пробкой. Содержимое пробирки перемешать путем 1-2-хкратного перевертывания пробирки. Центрифугировать при 1500-200 об/мин. в течение 5 минут. Осторожно удалить надосадочную жидкость. Процедуру повторить 3-4 раза. После процедуры отмывания исследование повторить.

2.4.4.2. Определение резус-принадлежности при помощи цоликлона анти-D Супер

Техника определения:

1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. пациента, кровь которого исследуют. На планшет нанести одну большую каплю (100 мкл) цоликлона анти-D Супер.

2. Радом нанести одну маленькую каплю (10 мкл) исследуемых эритроцитов.

3. Перемешать стеклянной палочкой. Через 10-20 секунд пластину мягко покачать. Наблюдать за реакцией три минуты. Через три минуты считать результат реакции.

Трактовка результатов производится по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов.

Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов, агглютинаты видны невооруженным глазом в виде или крупных агрегатов. Кровь относится к Rh0(D)+ (полож.) (см. рисунок 5)

"Рисунок 5. Исследуемая кровь Rh0(D)+ (положительная)"

При отрицательном результате (-) капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается. Кровь Rh0(D)- (отр.) (см. рисунок 6)

"Рисунок 6. Исследуемая кровь Rh0(D)- (отрицательная)"

2.4.4.3. Определение резус-принадлежности при помощи гелевой методики.

Для определения резус-принадлежности использовать диагностическую карту, содержащую микропробирки для идентификации антигена D системы Резус. Микропробирки имеют цветную (серую) и соответствующую буквенную маркировку (D).

В настоящее время существует множество модификаций карт для определения резус-принадлежности крови. К каждой карте прилагается инструкция по использованию. Перед работой необходимо внимательно ознакомиться с прилагаемой инструкцией.

Перед исследованием провести макроскопическую оценку диагностической карты. Не использовать карту, если в микропробирках наблюдается изменение цвета, в геле имеются взвешенные пузырьки, наблюдается уменьшение объема геля или его растрескивание. Микропробирки должны содержать надосадочную жидкость. Если наблюдается рассредоточенное каплеобразование в верхней части микропробирки, рекомендуется центрифугировать карты перед использованием. Если капли не оседают, карту не использовать.

2.5. Дополнительные сведения об особенностях выполнения ПМУ "Определение резус-принадлежности".

У некоторых категорий пациентов встречаются затруднения при определении резус-принадлежности. Индивидуальные особенности, характер затруднений и способы решения проблемы представлены в таблице 8.

Таблица 8

Категории пациентов, у которых встречаются затруднения при определении резус-принадлежности

N п/п	Категория пациентов	Индивидуальные особенности	Характер затруднения	Способ решения проблемы
1.	Беременные	Слабо выражена активность антигена D	Слабо выраженная агглютинация, почти не различимая глазом. Вероятность пропустить реакцию агглютинации	Использовать различные типы реагентов. При затруднении направить кровь больного в специализированную лабораторию службы крови
2.	Больные с гематологическими или онкологическими заболеваниями и другие	Ослабление активности или полная утрата антигена D	Слабо выраженная агглютинация или ее отсутствие	Использовать различные типы реагентов. При затруднении направить кровь больного в специализированную лабораторию службы крови
		Наличие неспецифических алло- и/или аутоантител	Положительные результаты контроля	Использовать гелевую методику. При затруднении