Приложение 2. Правила отбора проб биологического материала для лабораторной микробиологической диагностики сальмонеллеза

Приложение 2
к приказу Департамента
здравоохранения г. Москвы
от 21 апреля 2011 г. N 365

Правила
отбора проб биологического материала для лабораторной микробиологической диагностики сальмонеллеза

(Основание: методические указания МУ 4.2.2723-10 "Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды", МУ 4.2.2039-05 "Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории")

Показания к исследованию

Исследование на сальмонеллез проводят с целью диагностики заболеваний, выявления сальмонеллоносительства, определения соответствия гигиеническим требованиям безопасности пищевых продуктов, выявления обсемененности сальмонеллой объектов внешней среды, а также при расследовании вспышек сальмонеллеза с целью установления источников и факторов передачи возбудителей инфекции.

Отбор проб, транспортировка клинического материала

Для исследования на наличие сальмонелл отбирают испражнения, рвотные массы и промывные воды желудка, кровь, мочу, а при наличии специальных показаний - желчь, дуоденальное содержимое, спинномозговую жидкость и аутопсийный материал.

Общие требования к отбору проб биологического материала для микробиологического исследования

Патологический материал следует доставлять в лабораторию в возможно короткий срок, но не позднее 12 часов после отбора, испражнения (фекалии) - не позднее 3-4 часов. Кровь высевают у постели больного.

В случае невозможности доставки в установленные сроки материал посылают в консерванте или на транспортной среде. В подобных случаях биологический материал до исследования хранят при температуре 4-6°С не более 24 часов.

Для предохранения от инфицирования медицинского персонала и пациентов при отборе проб биоматериала и доставке его в лабораторию (исключения возможности контаминации их за счет смежных областей кожи, других органов, внешней среды и т.п.) необходимо:

- не контаминировать наружную поверхность посуды при сборе и доставке проб;

- не контаминировать сопроводительные документы (направления);

- свести к минимуму непосредственный контакт пробы биоматериала с руками медицинского работника, собирающего и доставляющего его в лабораторию;

- использовать стерильные одноразовые или разрешенные к применению для этих целей в установленном порядке контейнеры (емкости) для сбора, хранения и доставки проб;

- транспортировать пробы в переносках или укладках с раздельными гнездами;

- соблюдать асептические условия для предотвращения инфицирования пациента в процессе выполнения инвазивных мероприятий;

- собирать пробы в стерильную одноразовую пластиковую или стеклянную посуду (не контаминированную биоматериалом, не имеющую трещин, отколотых краев и других дефектов).

Пробы биологического материала необходимо собирать следующим образом:

- до начала антибактериальной терапии, при отсутствии такой возможности - непосредственно перед повторным введением (приемом) препаратов;

- в количестве (вес, объем), необходимом для выполнения анализа, т.к. недостаточное количество биоматериала приводит к получению ложных результатов;

- с минимальным загрязнением материала нормальной микрофлорой, т.к. ее избыток приводит к ошибочной трактовке полученных результатов.

При сборе проб следят за тем, чтобы в лаборатории при вскрытии емкости с биоматериалом не образовывался аэрозоль: пробы крови и других жидкостей организма аккуратно без образования пены переносят из шприца в сухую и/или наполненную средой (антикоагулянтом) посуду. При отборе проб крови предпочтительно следует использовать вакуумсодержащие системы.

Сопроводительным документом в лабораторию является направление на микробиологическое исследование по форме N 204-у (утверждена приказом МЗ СССР от 04.10.1080 г. N 1030), где указываются: учреждение здравоохранения, дата и время взятия материала (часы), фамилия, имя, отчество и возраст пациента; отделение, в котором он находится; номер медицинской карты стационарного больного или амбулаторной карты, номер участка (для АПУ), адрес места жительства, место работы или учебы; диагноз, дата заболевания, показания к обследованию (в направлении подчеркивается); материал, посылаемый на исследование (в направлении подчеркивается), цель и наименование исследования; антибактериальные (иммунные) препараты, если проба сдается на фоне антибиотико- и/или иммунотерапии; фамилию, имя, отчество лечащего врача (консультанта), направляющего материал на исследование. При направлении биоматериалов, полученных при вскрытии, указывают также отделение, в котором умер больной.

Отбор пробы просветных фекалий. Фекалии тотчас после дефекации собирают из предварительно продезинфицированных, тщательно промытых (особое внимание следует уделять удалению дезинфектантов, оказывающих ингибирующее действие на микрофлору фекалий и существенно искажающих результаты исследования), ополоснутых заварным кипятком и охлажденных до комнатной температуры судна или горшка сразу после дефекации в стерильный одноразовый контейнер при помощи вмонтированного в его крышку стерильного шпателя-ложечки. В экстремальных ситуациях (реанимационные больные, маленькие дети) материал собирают в такой же контейнер с ложечкой или ректальным тампоном; возможен также сбор материала со стерильной сухой пеленки, не касаясь ткани.

Пробы можно также собирать с помощью специальных стерильных палочек или проволочной петли, приготовленных из нержавеющего металла (алюминий, сталь, титан).

При наличии в испражнениях патологических примесей слизи, крови, хлопьев, гноя они отбираются отдельно от пробы фекалий.

Наиболее подходящей емкостью для сбора фекалий является специальный стерильный одноразовый контейнер с широким горлом и завинчивающейся крышкой, содержащий одноразовую ложечку-шпатель, вмонтированную в крышку контейнера. Если фекалии жидкие, контейнер заполняют не более чем на 1/3 объема для предохранения от разбрызгивания материала при вскрытии емкости в лаборатории. Если фекалии оформленные, плотные - помещают в контейнер 3-4 ложечки (1,5-2,0 г). Материал, собранный с несвежего постельного белья, искажает результат, а заполненный до верха контейнер не подлежит исследованию.

В случае отсутствия в лаборатории одноразовой посуды порцию фекалий помещают в специально смонтированную стерильную стеклянную посуду, разрешенную к использованию в установленном порядке.

Отбор проб пристеночных фекалий. В случае невозможности получения испражнений после дефекации, материал берут непосредственно из прямой кишки с помощью "зонд тампона", вводя его в кишку на 8-10 см, осторожно вращая тампон вокруг оси, собирают материал с крипт ануса и так же осторожно извлекают тампон.

Тампон помещают в стерильную пробирку однократного применения или в транспортировочную емкость с агаризованной средой без угля или в стерильную стеклянную пробирку, или в стерильную пробирку с забуференным физиологическим раствором с глицерином либо с пептонной водой.

При профилактических обследованиях здоровых лиц на сальмонеллоносительство накануне взятия испражнений для исследования допустимо применение солевого слабительного (25-30 г. магнезии сульфата - ), растворенного в теплой воде.

Не принимается для исследования на сальмонеллоносительство материал, взятый на дому в отсутствии медицинского работника.

Кровь для исследования берут в начале заболевания, а также повторно в период лихорадки или в разгар рецидивов стерильным шприцем из локтевой вены в объеме 2-10 мл (в зависимости от возраста пациента), в более поздние сроки или при слабовыраженной клинической картине - 15-20 мл. Взятую кровь высевают у постели больного непосредственно во флаконы с питательной средой для культивирования сальмонелл.

У детей до одного года кровь берут в доступных количествах из пальца, пятки или мочки уха.

Рвотные массы и промывные воды желудка отбирают при заболевании, сопровождающемся соответствующей симптоматикой, в объеме до 100 мл. Для исследования используют первые порции промывных вод, полученные без применения бактерицидных средств.

В случае кислой реакции (рН<4,5) рвотных масс их перед посевом нейтрализуют 10%-ным раствором бикарбоната натрия, промывные воды центрифугируют 15 минут при 3000 об/мин и исследуют осадок. В случае невозможности центрифугирования допускается высев нативного материала.

Желчь (дуоденальное содержимое) собирают в стерильные пробирки. При этом отдельно собирают дуоденальное содержимое, пузырную желчь и желчь из желчных протоков (порции А, В и С соответственно).

Кислая реакция, белесоватый оттенок, наличие хлопьев свидетельствуют о примеси желудочного сока и делают материал непригодным для бактериологического исследования.

Спинномозговая жидкость подлежит исследованию при наличии менингеального или менингоэнцефалитического синдромов.

Пробу (3-5 мл) помещают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию, предохраняя материал от замораживания (можно использовать термос).

Мочу для исследования собирают после тщательного туалета наружных половых органов. Первую порцию мочи отбраковывают (не берут для анализа), остальную (в количестве 20-30 мл) собирают в сте