Методические указания по определению остаточных количеств хизалофоп-П-этила в репках лука, корнеплодах моркови и кочанах капусты по основному метаболиту хизалофоп-П кислоте методом капиллярной газожидкостной хроматографии МУК 4.1.1953-05 (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 18 января 2005 г.)

Дата введения: 18 апреля 2005 г.

1. Вводная часть

1.1. Краткая характеристика препарата

Фирма-производитель: ЗАО Фирма "Август".

Торговое название: Миура, КЭ.

Действующее вещество (д.в.): хизалофоп-П-этил.

Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: (R)-2-[6-хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси] пропионовой кислоты этиловый эфир.

Структурная формула д.в.:

Эмпирическая формула д.в.: .

Молекулярная масса д.в.: 372,8.

Химически чистое вещество: светло-коричневые кристаллы.

Температура плавления д.в.: 76-77°С.

Давление паров д.в. при 20°С: 0,011 мПа.

Растворимость д.в. (г/л) при 20°С: в воде - 0,0004, в гексане - 5,0, этаноле - 22, ксилоле - 360, ацетоне - 650.

Стабильность д.в.: устойчив к действию света, разлагается до хизалофоп-П кислоты под действием разбавленных кислот и щелочей.

1.2. Краткая токсикологическая характеристика д.в.

Острая пероральная токсичность для крыс - 1180-1210 мг/кг, для мышей - 1750-1800 мг/кг. Не оказывает раздражающего действия на кожу.

Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов санитарно-бытового пользования - 0,0001 , ОДК в почве - 0,8 мг/кг, МДУ в свекле сахарной, моркови, луке и капусте - 0,05 мг/кг, МДУ в свекле столовой - 0,01 мг/кг, ВМДУ в картофеле, томатах, сое (семена, масло) - 0,05 мг/кг.

1.3. Область применения препарата

Миура, КЭ - гербицид для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорными растениями.

2. Метод определения хизалофоп-П-этила в репках лука, корнеплодах моркови и кочанах капусты по основному метаболиту хизалофоп-П кислоте с применением капиллярной газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на количественном определении хизалофоп-П кислоты, основного метаболита хизалофоп-П-этила, и включает извлечение остаточных количеств хизалофоп-П кислоты из анализируемого объекта органическими растворителями, очистку экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и метилирование хизалофоп-П кислоты диазометаном. Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением капиллярной газожидкостной хроматографии и термоионного детектора (ТИД).

2.1.2. Избирательность метода

Метод специфичен в присутствии других применяемых в сельском хозяйстве пестицидов. Способ очистки экстрактов, а также применение селективного детектора позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на результаты анализа.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Диапазоны измеряемых концентраций, пределы обнаружения и другие метрологические параметры метода представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Метрологическая характеристика метода

Анализируемые объекты	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал среднего, %
Репки лука	0,025	0,025-0,2	85,7	4,5	4,9
Корнеплоды моркови	0,025	0,025-0,2	84,1	4,3	5,5
Кочаны капусты	0,025	0,025-0,2	86,1	3,9	4,7

Таблица 2

Полнота определения хизалофоп-П кислоты в модельных пробах (n = 6)

Анализируемые объекты	Внесено, мг/кг	Извлечено, %	Доверительный интервал среднего результата, %
Репки лука	0,025	79,7
	0,05	84,5
	0,1	87,6
	0,2	90,8
Корнеплоды моркови	0,025	78,8
	0,05	82,3
	0,1	85,7
	0,2	89,5
Кочаны капусты	0,025	80,3
	0,05	84,6
	0,1	87,8
	0,2	91,5

2.2. Реактивы, растворы, материалы

Аналитический стандарт хизалофоп-П кислоты.

Азот газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-25-89.

Ацетон, осч, ТУ 2633-004-11291058-94.

Вата медицинская, ТУ 9393-001-00302238-97.

Вода дистиллированная и перегнанная над и щелочью.

Водород газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-27-90.

н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Гелий газообразный (сжатый) очищенный марки "А", ТУ 51-940-80.

Дихлорметан, хч, ТУ 6-09-2662-77.

Изооктан эталонный, ГОСТ 12433-83.

Калия гидроокись, чда, ГОСТ 24363-80.

Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда, ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, чда, ГОСТ 4233-77.

N-Нитрозометилмочевина, хч, ТУ 6-09-11-1643-82.

Серная кислота, осч, ГОСТ 14262-78.

Смесь ацетон : этанол, 80:20, по объему.

Смесь н-гексан : этиловый эфир, 70:30, по объему.

Спирт этиловый ректификат (этанол), ГОСТ 17299-78.

Фильтры бумажные, белая лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Эфир этиловый (серный), ОСТ 84-2006-88.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Газовый хроматограф с ТИД.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 15 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-52, толщина слоя - 0,45 мкм.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73 или аналогичный.

Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 34104-80.

Весы лабораторные типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Воронки делительные емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические конусные, ГОСТ 25336-82.

Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-76.

Колбы-концентраторы емкостью 150 и 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы плоскодонные емкостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колпачки алюминиевые для герметизации флаконов, ГОСТ Р51314-99.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный.

Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Приспособление для обжима колпачков на флаконах, ТУ 42-2-2442-73.

Пробирки мерные со шлифом емкостью 5,0 мл, ГОСТ 1770-74.

Стаканы химические емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.

Установка для упаривания растворителей в токе азота.

Установка ультразвуковая "Серьга" УЗМ002 или аналогичная.

Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 5,0 мл, ТУ 64-2-10-87.

Электроплитка, ГОСТ 14919-83.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Подготовка и очистка растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

2.4.2. Приготовление стандартных растворов

Основной раствор хизалофоп-П кислоты с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением в смеси ацетон : этанол (80:20) 0,01 г аналитического стандарта в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре +4-6°С не более трех месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 4,0, 2,0, 1,0 и 0,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора хизалофоп-П кислоты соответствующим последовательным разбавлением ацетоном.

Для приготовления калибровочных растворов в пробирки мерные со шлифом емкостью 5,0 мл вносят по 1,0 мл рабочих растворов хизалофоп-П кислоты с концентрациями 0,5, 1,0, 2,0 и 4,0 мкг/мл. Растворители в пробирках упаривают в токе азота досуха и проводят метилирование хизалофоп-П кислоты.

В пробирки с сухим остатком добавляют по 2,0 мл свежеприготовленного (п. 2.4.4) эфирного раствора диазометана. Пробирки закрывают притертыми пробками и ставят на 12-14 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4-6°С. После этого этиловый эфир в пробирках упаривают досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл изооктана и хроматографируют по п. 2.6.3.

2.4.3. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл приготовленных по п. 2.4.2 растворов, содержащих хизалофоп-П кислоту (в виде хизалофоп-П-метила) в концентрациях 0,5, 1,0, 2,0 и 4,0 мкг/мл. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм от концентрации хизалофоп-П кислоты в рабочих растворах в мкг/мл.

2.4.4. Приготовление эфирного раствора диазометана (из расчета метилирования хизалофоп-П кислоты в экстрактах 2-х проб)

N-Нитрозометилмочевину массой 0,5 г помещают во флакон емкостью 2,0-3,0 мл и герметизируют резиновой пробкой и колпачком с помощью приспособления для обжима колпачков на флаконах. Этиловый эфир объемом 4,0 мл вносят в другой флакон емкостью 5,0 мл, герметизируют резиновой пробкой и колпачком и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 минут.

После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр. диам. мм), одним концом погружая ее в этиловый эфир на всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен еще иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стенке 50% водный раствор гидроокиси калия ( мл) до прекращения реакции. Этиловый эфир при насыщении диазометаном окрашивается в ярко-желтый цвет.

Внимание! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо обязательно проводить в работающем вытяжном шкафу.

2.5. Отбор, первичная обработка и хранение проб

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 г., N 2051-79.

Репки лука после отбора проб моют, обсушивают фильтровальной бумагой, удаляют шелуху и из каждой репки по осевой линии вырезают 1/4 часть. Корнеплоды моркови после отбора проб моют, обсушивают фильтровальной бумагой и из каждого корнеплода по осевой линии вырезают 1/2 часть. Полученные усредненные пробы измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы.

Для длительного хранения аналитические пробы репок лука и корнеплодов моркови помещают в морозильную камеру с температурой -18°С и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

В пробах капусты из каждого кочана по осевой линии вырезают 1/8 часть. Полученную среднюю пробу измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы. Для длительного хранения аналитические пробы кочанов капусты помещают в морозильную камеру с температурой -18°С и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстрагирование и очистка экстракта

Аналитическую пробу массой г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, добавляют 150 мл смеси ацетон : этанол (80:20), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 минут. После этого экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в колбу с аналитической пробой вносят 150 мл смеси ацетон : этанол (80:20) и встряхивают в течение 60 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр белая лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель до объема 10-20 мл при температуре +40°С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллированной воды и 5,0 мл 10% водного раствора гидроокиси калия. Содержимое колбы перемешивают встряхиванием и выдерживают в холодильнике при температуре +4-6°С в течение 4-5 часов. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 20 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 мл дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 15-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Процедуру очистки экстракта с использованием 50 мл дихлорметана повторяют. Даже в воронку добавляют 30 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 мл н-гексана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний водный слой сливают в химический стакан емкостью 500 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной серной кислотой до рН 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 100 мл смеси гексан : этиловый эфир (70:30) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают и отбрасывают. В делительную воронку добавляют 200 мл бидистиллированной воды, 1,0 мл 5,0% водного раствора серной кислоты и 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают и отбрасывают. Данную процедуру очистки экстракта повторяют еще один раз. После этого верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл.

Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре +40°С до объема 3-5 мл. Остаток экстракта переносят в мерную пробирку со шлифом емкостью 5,0 мл и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре +40°С.

2.6.2. Метилирование хизалофоп-П кислоты

В пробирку с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного по п. 2.4.4 эфирного раствора диазометана. Пробирку закрывают притертой пробкой и ставят на 12-14 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4-6°С. После этого эфир в пробирке упаривают досуха в токе азота и сухой остаток растворяют в 0,5 мл изооктана. Газохроматографический анализ на содержание хизалофоп-П-этила проводят по п. 2.6.3.

2.6.3. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф с ТИД.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая длиной 15 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-52, толщина слоя - 0,45 мкм.

Температура колонки: программирование от 180°С (1 мин) до 280°С (15 мин) со скоростью 10°С/мин.

Температура испарителя: 250°С.

Температура детектора: 290°С.

Расход газов: газа-носителя (гелий марки "А") - 2,0 , водорода и воздуха к ТИД - 30 и 250 соответственно, дополнительного газа (гелий марки "А") к ТИД - 35 .

Количество вводимой пробы: 2 мкл.

Время удерживания хизалофоп-П-метила: мин.

Предел детектирования: 0,5 нг.

Линейный диапазон детектирования: 1,0-8,0 нг.

2.6.4. Обработка результатов анализа

Содержание хизалофоп-П кислоты рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:

, где:

X - содержание хизалофоп-П кислоты в пробе, мг/кг,

Н - высота (площадь) пика анализируемого вещества, мм ,

- высота (площадь) пика стандартного вещества, мм ,

А - концентрация стандартного рабочего раствора хизалофоп-П кислоты, мкг/мл,

V - количество экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл,

m - масса (г) аналитической пробы.

Пересчет на содержание хизалофоп-П-этила проводят по формуле:

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

5. Разработчики

В.И. Долженко, П.А. Тарарин, Т.А. Маханькова, Л.В. Григорьева, Е.И. Кожемякова (ВНИИ защиты растений).

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Г.Г. Онищенко