Методические указания по определению остаточных количеств галоксифоп-Р-метила в репках лука методом капиллярной газожидкостной хроматографии МУК 4.1.1942-05 (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 18 января 2005 г.)

Дата введения: 18 апреля 2005 г.

1. Вводная часть

1.1. Краткая характеристика препарата.

Фирма-изготовитель: Дау АгроСаенсес.

Торговое название: Зеллек-супер.

Действующее вещество: галоксифоп-Р-метил.

Название по номенклатуре ИЮПАК: (R)-2-[4-(3-хлоро-5-трифторометил-2-пиридилокси)фенокси]пропионовой кислоты метиловый эфир.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: .

Молекулярная масса: 375,7.

Химически чистый метиловый эфир галоксифоп-Р кислоты представляет собой светло-коричневую жидкость. В биологических средах легко гидролизуется до галоксифоп-Р кислоты.

Название галоксифоп-Р кислоты по номенклатуре ИЮПАК: (R)-2-[4-(3-хлоро-5-трифторометил-2-пиридилокси)фенокси]пропионовая кислота.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: .

Молекулярная масса: 361,7.

Химически чистое вещество: бесцветные кристаллы.

Температура плавления: 107-108°С.

Растворимость (г/л) при 25°С: в воде - 0,043, хорошо растворяется в большинстве органических растворителях.

1.2. Краткая токсикологическая характеристика галоксифоп-Р-метила.

для крыс - 393-599 мг/кг, для кроликов - > 5000 мг/кг. Не оказывает раздражающего действия на кожу, слабо раздражает глаза.

Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов - 0,001 мг/л, ОДК в почве - 0,15 мг/кг, МДУ в свекле сахарной и кормовой, подсолнечнике и сое (семена), масле растительном - 0,05 мг/кг, в рапсе (семена) -0,2 мг/кг, ВМДУ в картофеле - 0,01 мг/кг.

1.3. Область применения препарата.

Гербицид для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорными растениями.

2. Метод определения галоксифоп-Р-метила в репках лука с применением капиллярной газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении остаточных количеств галоксифоп-Р кислоты из анализируемого объекта органическими растворителями, проведении очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и метилирвании галоксифоп-Р кислоты диазометаном.

Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением капиллярной газожидкостной хроматографии и использованием детектора электронного захвата (ДЭЗ).

2.1.2. Избирательность метода

Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование капиллярной колонки и селективного детектора позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на результаты анализа.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Диапазоны измеряемых концентраций, пределы обнаружения и другие метрологические параметры метода представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Метрологические параметры метода

Метрологические параметры	Анализируемые объекты:
	Репки лука
Предел обнаружения, мг/кг	0,01
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	0,01-0,08
Среднее значение определения, %	82,7
Стандартное отклонение, %	5,2
Относительное стандартное отклонение, %	2,8

Таблица 2

Полнота определения галоксифоп-Р-метила в модельных пробах (n = 6)

Анализируемые объекты	Внесено, мг/кг	Извлечено, %	Доверительный интервал среднего результата, %
Репки лука	0,01	75,5
	0,02	80,3
	0,04	85,4
	0,08	89,7

2.2. Реактивы, растворы, материалы

Аналитический стандарт галоксифоп-Р кислоты.

Азот газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-25-89.

Ацетон, осч, ТУ 2633-004-11291058-94.

Вода дистиллированная и перегнанная над и щелочью.

н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Дихлорметан, хч, ТУ 6-09-2662-77.

Изооктан эталонный, ГОСТ 12433-83.

Калия гидроокись, чда, ГОСТ 24363-80.

Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда, ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, чда, ГОСТ 4233-77.

N-Нитрозометилмочевина, хч, ТУ 6-09-11-1643-82.

Серная кислота, осч, ГОСТ 14262-78.

Смесь н-гексан: этиловый эфир, 70:30, по объему.

Фильтры бумажные, красная лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Фильтры бумажные, белая лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Эфир этиловый (серный), ОСТ 84-2006-88.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Газовый хроматограф с ДЭЗ.

Колонка хромографическая кварцевая капиллярная длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой ВР-50 (OV-17, HP-17, DB-17), толщина слоя 0,5 мкм.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73 или аналогичный.

Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 34104-80.

Весы лабораторные типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Воронки делительные емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические конусные, ГОСТ 25336-82.

Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-76.

Колбы-концентраторы емкостью 150 и 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы плоскодонные емкостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 50,100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колпачки алюминиевые для герметизации флаконов, ГОСТ Р.51314-99.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный.

Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Приспособление для обжима колпачков на флаконах, ТУ 42-2-2442-73.

Пробирки мерные со шлифом емкостью 5,0 мл, ГОСТ 1770-74.

Стаканы химические емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.

Установка для упаривания растворителей в токе азота.

Установка ультразвуковая "Серьга" УЗМ002 или аналогичная.

Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 5,0 мл, ТУ 64-2-10-87.

Электроплитка, ГОСТ 14919-83.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Подготовка и очистка растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40°С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

2.4.2. Приготовление стандартных растворов

Основной раствор галоксифоп-Р кислоты с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением в ацетоне 0,01 г аналитического стандарта в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре +4-6°С не более трех месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 1,6, 0,8, 0,4 и 0,2 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора галоксифоп-Р кислоты последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре +4-6°С не более месяца.

Для приготовления калибровочных растворов в мерные пробирки со шлифом емкостью 5,0 мл вносят по 1,0 мл рабочих растворов галоксифоп-Р кислоты с концентрациями 0,2, 0,4, 0,8 и 1,6 мкг/мл. Растворитель в пробирках упаривают в токе азота досуха и проводят метилирование галоксифоп-Р кислоты по п. 2.4.3.

2.4.3. Метилирование галоксифоп-Р кислоты

В пробирки с сухим остатком добавляют по 2,0 мл свежеприготовленного по п. 2.4.5. эфирного раствора диазометана. Пробирки закрывают пробками и ставят на 12-14 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4-6°С. После этого эфир в пробирках упаривают досуха в токе азота и сухой остаток растворяют в 1,0 мл изооктана.

2.4.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа (п. 2.6.3.) вводят по 1 мкл приготовленных по п. 2.4.3. растворов, содержащих галоксифоп-Р-метил в концентрациях 0,2, 0,4, 0,8 и 1,6 мкг/мл. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм от концентрации галоксифоп-Р-метила в рабочем растворе в мкг/мл.

2.4.5. Приготовление эфирного раствора диазометана (из расчета метилирования галоксифоп-Р кислоты в экстрактах 2-х проб)

N-Нитрозометилмочевину массой 0,5 г помещают во флакон емкостью 2,0-3,0 мл и герметизируют резиновой пробкой и колпачком с помощью приспособления для обжима колпачков на флаконах. Этиловый эфир количеством 4,0 мл вносят в другой флакон емкостью 5,0 мл, герметизируют резиновой пробкой и колпачком и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 минут.

После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр. диам. ~ 1,5-2,0 мм), одним концом погружая ее в этиловый эфир на всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен еще иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стенке 50% водный раствор гидроокиси калия ( мл) до прекращения реакции. Этиловый эфир при насыщении диазометаном окрашивается в ярко-желтый цвет.

Внимание! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо обязательно проводить в работающем вытяжном шкафу.

2.5. Отбор, первичная обработка и хранение проб

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 г., N 2051-79.

Репки лука после отбора проб моют, обсушивают фильтровальной бумагой, удаляют шелуху и из каждой репки по осевой линии вырезают 1/4 часть. Полученную среднюю пробу измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы.

#длительного хранения аналитические пробы репок лука помещают в морозильную камеру с температурой -18°С и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстрагирование галоксифоп-Р кислоты

Аналитическую пробу репок лука массой г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, добавляют 150 мл ацетона, слегка встряхивают и подвергают обработав ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 мин. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой вносят 150 мл ацетона и встряхивают в течение 60 минут. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Содержимое колбы с пробой промывают 50 мл ацетона, который также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель до объема 10-20 мл при температуре +40°С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллированной воды, 2,0 мл 5,0% водного раствора серной кислоты и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. Колбу-концентратор помещают в холодильник и выдерживают при температуре +4-6°С в течение 4-5 часов. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 10% водный раствор гидроокиси калия до pH 9-10, 20 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 мл дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 15-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Процедуру очистки экстракта с использованием 50 мл дихлорметана повторяют. Далее в воронку добавляют 30 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 мл н-гексана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний ацетоно-водный слой сливают в химический стакан емкостью 500 мл, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной серной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. В воронку добавляют 100 мл смеси гексан : этиловый эфир (70:30) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают и отбрасывают. В делительную воронку добавляют 200 мл бидистиллированной воды, 1,0 мл 5,0% водного раствора серной кислоты и 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают и отбрасывают. Данную процедуру очистки экстракта повторяют еще один раз. После этого верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0-1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 150 мл.

Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре +40°С до объема 3-5 мл. Остаток экстракта переносят в мерную пробирку со шлифом емкостью 5,0 мл и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре +40°С.

2.6.2. Метилирование галоксифоп-Р кислоты

В пробирку с сухим остатком добавляют 2,0 мл свежеприготовленного по п. 2.4.5, эфирного раствора диазометана. Пробирку закрывают притертой пробкой и ставят на 12-14 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4-6°С. После этого эфир в пробирке упаривают досуха в токе азота и сухой остаток растворяют в 1,0 мл изооктана. Газохроматографический анализ на содержание галоксифоп-Р-метила проводят по п. 2.6.3.

2.6.3. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф с ДЭЗ.

Колонка хроматографическая капиллярная длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой ВР-50 (OV-17, НР-17, DB-17), толщина слоя - 0,5 мкм.

Температура колонки: программирование от 100°С (3 мин) до 280°С (25 мин) со скоростью 8,0° С/мин.

Температура испарителя: 240°С.

Температура детектора: 300°С.

Расход газов: газа-носителя (азот в/ч) - 1,5 , дополнительного газа (азот в/ч) к ДЭЗ - 40 .

Объем вводимой пробы: 1 мкл.

Время удерживания галоксифоп-Р-метила: мин.

Предел детектирования: 0,1 нг.

Линейный диапазон детектирования: 0,2-2,0 нг.

2.6.4. Обработка результатов анализа.

Содержание галоксифоп-Р-метила рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:

, где:

X - содержание галоксифоп-Р-метила в пробе, мг/кг,

Н - высота (площадь) пика анализируемого вещества, мм ,

Q - концентрация стандартного раствора галоксифоп-Р-метила, мкг/мл,

V - количество экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл,

- высота (площадь) пика стандартного вещества, мм ,

m - масса (г) аналитической пробы.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

5. Разработчики

П.А. Тарарин, Т.А. Маханькова, Л.В. Григорьева (ВНИИ защиты растений).

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Г.Г. Онищенко