Приложение 1. Питательные среды для культивирования возбудителей европейского гнильца пчел

Приложение 1
к Методическим указаниям по
лабораторной диагностике
европейского гнильца пчел

Питательные среды для культивирования возбудителей европейского гнильца пчел

1. Среда Бейли. К 1 л дистиллированной воды добавляют по 10 г порошка глюкозы, растворимого крахмала и экстракта дрожжей и 13,6 г фосфорнокислого однозамещенного калия. Компоненты растворяют, добавляют 20 г агар-агара, смесь нагревают до его расплавления и доводят рН среды до 6,6. Среду стерилизуют в автоклаве при давлении 0,5 атм дробно в течение трех дней по 20 мин.

2. Среда Черепова. 300 г очищенных клубней картофеля (обязательно удалить глазки) варят в течение 15-20 мин в 1 л водопроводной воды, не допуская разваривания клубней. Отвар фильтруют через ватно-марлевый фильтр и доводят водой до первоначального объема. В отвар добавляют 20 г агар-агара и 3 г пептона, нагревают и тщательно перемешивают. Смесь стерилизуют в автоклаве при 1 атм в течение 20 мин, охлаждают до 45-50°С добавляют 3% экстракта пекарских дрожжей и 3% глюкозы, доводят рН до 6,8. Среду стерилизуют в аппарате Коха в течение трех дней по 30 мин или в автоклаве при 0,5 атм три дня по 15 мин.

3. Глюкозо-кровяной агар. На основе МПБ готовят МПА с содержанием 3% агара (рН 7,2-7,4). Среду разливают в колбы по 100 мл и стерилизуют при 1 атм 30 минут.

По мере надобности агар расплавляют в кипящей водяной бане, охлаждают до 48-50°С и добавляют 2% глюкозы и 15-20 мл свежевзятой стерильной дефибринированной крови лошади, барана или крупного рогатого скота. Смесь осторожно перемешивают, не допуская образования пены и разливают в чашки. После застывания среду выдерживают в термостате 4-6 часов для подсушивания.