Приложение В (справочное). Приготовление питательных сред

Приложение В
(справочное)

Приготовление питательных сред

В.1 Общие требования

Для приготовления питательных сред применяют химически чистые реактивы. Реактивы взвешивают с погрешностью, не превышающей  0,01 г.

Все работы с питательными средами проводят с соблюдением правил стерильности над пламенем газовой горелки.

В.2 Приготовление среды Постгейта В для выращивания сульфатредуцирующих бактерий

В.2.1. Приготовление основного раствора среды Постгейта В

В состав основной среды Постгейта В входят следующие реактивы:

калий фосфорнокислый однозамещенный (КН ₂РО ₄) ... 0,5 г

аммоний хлористый (NH ₄CI) ... 1,0 г

кальций сернокислый 2-водный () ... 1,0 г

магний сернокислый 7-водный () ... 2,0 г

кальций молочнокислый 5-водный () ... 3,5 г

водопроводная вода ... 988 см ³

Допускается замена кальция молочнокислого на натрий молочнокислый (3,5 г).

В.2.2. Приготовление добавок

Добавки к основной среде Постгейта В готовят каждую отдельно. В стерильный основной раствор перед посевом вносят добавки (на 1 дм ³ среды):

- дрожжевой экстракт: готовят в виде 10 %-го раствора и добавляют 10 см ³ (массовая концентрация компонента в приготовленной среде 1 г/дм ³);

- железо сернокислое закисное 7-водное (): готовят в виде 5 %-ного раствора в 1-2 %-ном растворе соляной или серной кислоты и добавляют 10 см ³ (массовая концентрация компонента в приготовленной среде 0,5 г/дм ³);

- натрий углекислый кислый (NaHCO ₃) готовят в виде 10 %-ного водного раствора, который используют для установления рН среды в интервале от 7,2 до 7,5.

Раствор натрия сульфида готовят следующим образом: 1 %-ный раствор сульфида натрия в 1 %-ном растворе натрия углекислого кислого разливают в стеклянные ампулы объемом 2 см ³, ампулы запаивают и стерилизуют автоклавированием при давлении 0,5 атм и температуре 112,5 °С в течение 20 мин. Перед посевом ампулы вскрывают и приливают 1-2 см ² раствора в основную среду до появления темно-серой окраски среды.

В.3 Приготовление среды Бейеринка для культивирования тионовых бактерий

В состав среды Бейеринка входят следующие реактивы:

натрий серноватистокислый 5-водный () ... 5,0 г

хлористый аммоний (NH ₄CI) ... 0,1 г

натрий углекислый кислый (NaHCO ₃) ... 1,0 г

натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный () ... 0,2 г

хлористый магний 6-водный () ... 0,1 г

железо сернокислое закисное 7-водное () ... 0,005 г

водопроводная вода ... 1000 см ³

Значение рН готовой среды устанавливают при помощи концентрированной серной кислоты в пределах 7,0-7,2.

Натрий серноватистокислый и натрий углекислый кислый готовят и стерилизуют отдельно.

Натрий серноватистокислый готовят в виде 50 %-ного водного раствора и вносят в стерильную среду 10 см ³ (массовая концентрация компонента в приготовленной среде 5 г/дм ³).

Натрий углекислый кислый готовят в виде 10 %-ного раствора и вносят в стерильную среду 10 см ³ (массовая концентрация компонента в приготовленной среде 1 г/дм ³).

В.4 Стерилизация посуды и питательных сред

В.4.1 Посуду моют водой при температуре (60  10) °С с использованием моющего средства по ГОСТ 25644 и затем промывают дистиллированной водой.

В.4.2 Посуду, подготовленную по В.4.1, заворачивают в бумагу, предварительно закрыв колбы, пробирки, пипетки ватными пробками, и стерилизуют в сухожаровом шкафу при температуре (160  2) °С в течение (150  5) мин.

В.4.3 Стерильную посуду хранят в бумаге в сухом помещении в отдельном шкафу не более 10 суток.

В.4.4 Питательные среды разливают в стерильные колбы, приготовленные в соответствии с В.4.1, В.4.2, В.4.3, закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм и температуре 127 °С в течение 30 мин.

В.4.5 Добавки к питательным средам стерилизуют отдельно при 0,5 атм и температуре 112,5 °С в течение 20 мин.

В.4.6 Не допускается смачивание краев колб и ватно-марлевых пробок.