Приложение Б (справочное). Определение афлатоксина М1 в молоке без обработки трифторуксусной кислотой

Приложение Б
(справочное)

Определение афлатоксина М ₁ в молоке без обработки трифторуксусной кислотой

Б.1 Допускается проводить определение массовой доли афлатоксина М ₁ в молоке и кисломолочных продуктах без его перевода в интенсивно флуоресцирующее соединение обработкой трифторуксусной кислотой.

Б.2 Общий порядок проведения измерений изложен в тексте настоящего стандарта. В настоящем приложении описаны особенности приготовления градуировочных растворов, проведения градуировки хроматографа, контроля стабильности градуировочной характеристики и выполнения измерения.

Б.3 Приготовление градуировочных растворов афлатоксина М ₁ в подвижной фазе номинального значения массовой концентрации 50; 10; 5 нг/см ³

Б.3.1 В колбу для упаривания помещают указанное в таблице 2 (см. 11.5.1.3) количество раствора афлатоксина М ₁ номинального значения массовой концентрации 0,02 мкг/см ³ (см. 11.5.1.1), удаляют растворитель упариванием в вакууме при температуре от 40 °С до 45 °С.

Б.3.2 Сухой остаток растворяют в соответствующем объеме подвижной фазы (см. 11.2), перемешивают и выдерживают перед измерениями не менее 10 мин в закрытом сосуде. Действительное значение массовой концентрации растворов вычисляют по формуле (2).

Растворы используют в течение 1 ч.

Б.4 Приготовление проверочного раствора афлатоксина М ₁ в подвижной фазе номинального значения массовой концентрации 12 нг/см ³.

Б.4.1 В колбу для упаривания помещают 1 см ³ раствора афлатоксина М ₁ номинального значения массовой концентрации 0,006 мкг/см ³ (см. 11.5.1.2), удаляют растворитель упариванием в вакууме. Сухой остаток растворяют в 0,5 см ³ подвижной фазы (см. 11.3), перемешивают и выдерживают перед измерениями не менее 10 мин в закрытом сосуде. Действительное значение массовой концентрации раствора вычисляют по формуле (2).

Б.5 Градуировка хроматографа. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Б.5.1 В качестве образцов для градуировки хроматографа используют растворы афлатоксина М ₁ в подвижной фазе, приготовленные по Б.3. Диапазон построения градуировочной характеристики составляет от 5 до 50 нг/см ³.

Б.5.2 Для градуировки хроматографа выполняют все операции по 11.9.

Б.5.3 Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят ежедневно перед началом работы.

Б.5.4 Массовую концентрацию афлатоксина М ₁ для проведения контроля выбирают исходя из предполагаемого его содержания в анализируемых пробах; рекомендуется использовать раствор афлатоксина М ₁ номинального значения массовой концентрации 12 нг/см ³, приготовленный по Б.4.

Б.5.5 Для контроля стабильности градуировочной характеристики выполняют все операции по 11.9.

Б.6 Выполнение измерений

Б.6.1 Экстракция афлатоксина М ₁ из проб и проведение очистки экстракта на концентрирующем патроне для подготовки проб методом ТФЭ.

Б.6.2 Экстракцию афлатоксина М ₁ из проб проводят в соответствии с 12.1 в зависимости от типа проб. Очистку полученного экстракта проводят в соответствии с 12.2.

Б.6.3 Подготовка к хроматографическому анализу

Б.6.4 К сухому остатку, полученному по Б.6.1, добавляют 0,5 см ³ подвижной фазы, перемешивают и выдерживают не менее 5 мин в закрытом сосуде.

Примечание - Допускается растворять сухой остаток в ином объеме подвижной фазы от 0,5 до 5 см ³, в зависимости от ожидаемой концентрации афлатоксина М ₁, учитывая этот объем V ₃ в формулах (10), (12).

Б.6.5 Затем добавляют 2 см ³ гексана и снова интенсивно перемешивают. Ждут расслоения двух не смешивающихся между собой фаз и аккуратно, при помощи градуированной пипетки вместимостью 1 см ³ или одноканального пипеточного дозатора от 100 до 1000 мм ³, переносят примерно 0,3 см ³ нижнего слоя в пробирку для микропроб однократного применения вместимостью 1,5 см ³. Полученный концентрат используют для хроматографического анализа по 12.4 в течение 1 ч.

Б.6.6 Обработку и оформление полученных результатов проводят в соответствии с разделами 13, 14 настоящего стандарта.