Методические указания по определению остаточных количеств метсульфурон-метила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур, соломке льна методом высокоэффективной жидкостной хроматографии МУК 4.1.1417-03 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Дата введения 30 июня 2003 г.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур, соломке льна массовой концентрации метсульфурон-метила в диапазонах 0,002-0,02 ; 0,05-0,5 мг/кг; 0,025-0,25 мг/кг; 0,1-1,0 мг/кг.

Метсульфурон-метил - действующее вещество препаратов:

МАГНУМ, ВДГ (600 г/кг), фирма-производитель "Август", Россия;

АЛС-2/03, ВДГ (600 г/кг), фирма-производитель "Алсико Агропром", Россия.

2-[(6-метил-4-метокси-1,3,5-триазин-2-илкарбамоил)сульфамоил]бензойная кислота, метиловый эфир (IUРАС)

Мол. масса 381,4

Белое кристаллическое вещество со слабым запахом эфира. Температура плавления 158°С. Давление паров при 25°С: мПа. Растворимость в органических растворителях при 20°С (г/л): дихлорметан - 121; ацетон - 36; метанол - 7,3; этанол - 2,3; ксилол - 0,58. Растворимость в воде при 25°С (г/л): 0,55 (рН 5); 2,79 (рН 7); 213 (рН 9).

Константа диссоциации рКа 3,3.

Метсульфурон-метил стабилен на воздухе при температуре до 140°С, а также в нейтральных и щелочных водных растворах при 25°С, гидролизуется в кислых растворах.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность для крыс >5000 мг/кг; острая дермальная токсичность для кроликов >2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность для крыс >5000 .

Область применения препарата

Метсульфурон-метил рекомендуется к применению в качестве гербицида против однолетних двудольных сорняков на посевах зерновых колосовых культур (пшеница яровая и озимая, ячмень, овес), льне-долгунце.

Гигиенические нормативы:

ДСД - 0,003 мг/кг массы тела

ОБУВ в атмосферном воздухе - 0,005 .

ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,7 .

ПДК в воде водоемов - 0,006 .

ОДК в почве - 0,1 мг/кг

ВМДУ в зерне - 0,05 мг/кг

1. Метрологические характеристики метода

Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 24
	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения %	Стандартное отклонение, S, %	Доверительный интервал среднего результата, %
Вода	0,002	0,002-0,02	95,15	2,27	3,31
Почва	0,04	0,04-0,4	85,36	3,06	4,46
Зерно пшеницы	0,025	0,025-0,25	87,45	3,81	5,55
Солома пшеницы	0,1	0,1-1,0	77,37	3,92	5,71
Соломка льна	0,1	0,1-1,0	81,17	2,80	4,08

Таблица 2

Полнота извлечения метсульфурон-метила из воды, почвы, зерна и соломы пшеницы, соломки льна (6 повторностей для каждой концентрации)

Среда	Внесено метсульфуронметила мг/кг	Обнаружено метсульфуронметила мг/кг	Полнота извлечения. %
1	2	3	4
Вода	0.002		94.50
	0.004		96.00
	0.01		94.70
	0.02		95.20
Почва	0.04		83.10
	0.08		85.04
	0.2		86.35
	0.4		86.96
Зерно пшеницы	0.025		84.56
	0.05		87.92
	0.125		86.71
	0.25		90.63
Солома пшеницы	0.1		78.83
	0.2		74.19
	0.5		76.58
	1.0		79.88
Соломка льна	0.1		78.18
	0.2		82.47
	0.5		81.00
	1.0		83.04

2. Метод измерений

Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемой пробы воды смесью органических растворителей, почвы и растительного материала - смесью метанол-фосфатный буфер (рН 7), очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах Диапак-С16. Экстракт соломы зерновых подвергают дополнительной очистке на концентрирующем патроне Диапак-С.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания зерновых колосовых культур и льна.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США)	Номер Госреестра 15945-97
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г	ГОСТ 7328
Иономер ЭВ-74	ГОСТ 22261-76
Колбы мерные вместимостью 50, 100 и 1000	ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10	ГОСТ 29227
Пипетки с одной меткой 2-го класса точности вместимостью 15	ГОСТ 29169
Пробирки градуированные вместимостью 5 или 10	ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 10, 25, 50, 100, 200, 500 и 1000	ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Метсульфурон-метил с содержанием действующего вещества 99,4% (Август, Россия)
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч.	ТУ-6-09-4326-76
Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над	ГОСТ 6709
н-Гексан, х.ч.	ТУ-6-09-3375
Калий фосфорнокислый однозамещенный , х.ч.	ГОСТ 4198
Кислота орто-фосфорная, х.ч., 85%	ГОСТ 6552
Кислота уксусная, ледяная, х.ч.	ГОСТ 61
Метилен хлористый (дихлорметан), х.ч.	ГОСТ 12794
Метиловый спирт (метанол), х.ч.	ГОСТ 6995
Натрий гидроксид (натр едкий), ч.д.а.	ГОСТ 4328
Натрий сернокислый, безводный, х.ч.	ГОСТ 4166
Натрий фосфорнокислый однозамещенный, 2-водный , ч.д.а.	ГОСТ 245
Натрий хлористый, х.ч.	ГОСТ 4233
Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.	ГОСТ 22300

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аллонж прямой с отводом для вакуума (для работы с концентрирующими патронами)
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с	ТУ 64-1-2851-78
Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
Вата хлопковая
Воронки делительные вместимостью 150, 250 и 500	ГОСТ 25336
Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм	ГОСТ 25336
Груша резиновая
Колбы плоскодонные вместимостью 200-250	ГОСТ 9737
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 100 и 250	ГОСТ 9737
Концентрирующие патроны Диапак-С16 (0,6 г)	ТУ 4215-002-05451931-94
Концентрирующие патроны Диапак-С (0,6 г)	ТУ 4215-002-05451931-94
Мельница лабораторная электрическая	ТУ 46-22-236-79
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм
Насос водоструйный	ГОСТ 10696
Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 50
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария	ТУ 25-11-917-74
Сито с диаметром отверстий 1 мм
Стаканы химические, вместимостью 100, 400 и 1000	ГОСТ 25336
Стекловата
Стеклянные палочки
Установка для перегонки растворителей
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Zorbax ODS, зернением 5 мкм
Шкаф сушильный	ТУ 64-1-1411-76
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100
Шприц медицинский с разъемом Льюера	ГОСТ 22090

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При работе с реактивами соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подготовка буферных растворов, подвижных фаз для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографических колонок, установление градуировочной характеристики, подготовка концентрирующих патронов для очистки экстрактов, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.2. Очистка этилацетата

Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

7.1.3. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2. Приготовление 1 N раствора гидроксида натрия

В мерную колбу вместимостью 250 помещают 10 г едкого натра, растворяют в 100-150 дистиллированной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.3. Приготовление растворов орто-фосфорной кислоты

Для приготовления 1 М раствора орто-фосфорной кислоты в мерную колбу вместимостью 100 помещают 6,9 орто-фосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

Для приготовления 0,01 М раствора орто-фосфорной кислоты в мерную колбу вместимостью 500 помещают 5 1М раствора орто-фосфорной кислоты, доводят до метки водой, тщательно перемешивают.

Для приготовления 0,005 М раствора орто-фосфорной кислоты в мерную колбу вместимостью 1000 помещают 5 1М раствора орто-фосфорной кислоты, доводят до метки водой, тщательно перемешивают.

7.4. Приготовление 0,005% раствора уксусной кислоты

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 100-150 воды, вносят 50 ледяной уксусной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.5. Приготовление 0,1% раствора уксусной кислоты в этилацетате

В мерную колбу вместимостью 100 помещают 50-70 этилацетата, вносят 0,5 ледяной уксусной кислоты, доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают.

7.6. Подготовка фосфатного буферного раствора (рН 7)

Навески двузамещенного фосфата натрия массой 0,73 г и двузамещенного фосфата калия массой 0,38 г помещают в мерную колбу вместимостью 250 , растворяют в 150-200 дистиллированной воды, доводят водой до метки. Контролируют pH буферного раствора с помощью иономера, доводят значение до pH 7, применяя 1N раствор едкого натра.

7.7. Подготовка фосфатного буферного раствора (рН 10)

Навески двузамещенного фосфата натрия массой 1,423 г и хлористого натрия (NaCl) массой 40 г помещают в химический стакан вместимостью 1000 и растворяют в 400 дистиллированной воды. Контролируют pН буферного раствора с помощью иономера, доводят значение до pН 10, применяя 1N раствор едкого натра.

7.8. Подготовка подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 670 0,01 М орто-фосфорной кислоты, 50 метанола, добавляют 280 ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.9. Подготовка подвижной фазы N 2 для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 700 0,01 М орто-фосфорной кислоты, добавляют 300 ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.10. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой N 1 или N 2 (приготовленной по п. 7.8 или п. 7.9.) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 0,4 или 1 до установления стабильной базовой линии.

7.11 Подготовка смеси растворителей для приготовления стандартных растворов и растворения образцов

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 550 0,005 М орто-фосфорной кислоты, добавляют 450 ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.12. Приготовление градуировочных растворов

7.12.1. Исходный раствор метсульфурон-метила для градуировки (концентрация 1 )

В мерную колбу вместимостью 100 помещают 0,1 г метсульфурон-метила, растворяют в 50-70 метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы N 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного стандартного раствора.

7.12.2. Раствор N 1 метсульфурон-метила для градуировки (концентрация 10 )

В мерную колбу вместимостью 100 помещают 1 исходного стандартного раствора метсульфурон-метила с концентрацией 1 (п. 7.12.1.), разбавляют метанолом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Этот стандартный раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения метсульфурон-метила из исследуемых образцов.

7.12.3. Рабочие растворы N 2-5 метсульфурон-метила для градуировки (концентрация 0.05-0.5 )

В 4 мерные колбы вместимостью 100 помещают по 0.5, 1.0, 2.5 и 5.0 стандартного раствора N 1 с концентрацией 10 (п. 7.12.2.), доводят до метки смесью растворителей (приготовленной по п. 7.11.), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2-5 с концентрацией метсульфурон-метила 0.05, 0.1, 0.25 и 0.5 , соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более 3-х дней.

7.13. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации метсульфурон-метила в растворе , устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки NN 2-5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3.1 или 9.3.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

7.14. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-С16 для очистки экстрактов

Патрон Диапак-С16 устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума*, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом Льюера объемом не менее 10 , используемый в качестве емкости для элюента.

Концентрирующий патрон промывают последовательно 10 метанола, затем 15 бидистиллированной воды. Процедуру проводят с использованием вакуума, скорость потока растворителей через патрон не должна превышать 5 , при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

* Примечание: В отсутствие специального аллонжа, жидкость продавливают через патрон с помощью шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 1-2 капли в сек.

7.15. Проверка хроматографического поведения метсульфурон-метила на концентрирующем патроне Диапак-С16

В круглодонную колбу вместимостью 100 помещают 0,1 стандартного раствора N 1 метсульфурон-метила (п. 7.12.2), растворитель упаривают досуха при температуре не выше 35°С, остаток растворяют в 10 буферного раствора с pH 10 (п. 7.7) и вносят на концентриующий патрон, подготовленный по п. 7.14. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 1-2 капли в сек. Элюат отбрасывают.

Промывают патрон 10 0,005% уксусной кислоты (п. 7.4), затем 15 смеси ацетонитрил - 0,005 М фосфорная кислота (15:85, по объему). Высушивают патрон пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 5 мин. Метсульфурон-метил элюируют с патрона 10 ацетонитрила, собирая 2-е порции элюата по 5 каждая непосредственно в круглодонные колбы. Растворы в колбах упаривают досуха при температуре не выше 35°С. Остаток в каждой колбе растворяют в 2-х смеси растворителей (приготовленной по п. 7.11) и анализируют на содержание метсульфурон-метила по п. 9.3.1 или 9.3.2. При обнаружении вещества только в первой фракции элюирование метсульфурон-метила с патрона осуществляют 5 ацетонитрила; при наличии его в обеих, объем элюента увеличивают до 10 .

7.16. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-С для дополнительной очистки экстрактов соломы

Патрон Диапак-С устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума*, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом Льюера объемом не менее 10 , используемый в качестве емкости для элюента.

Концентрирующий патрон промывают последовательно 5 этилацетата, затем 5 смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему). Процедуру проводят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 , при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

* Примечание: В отсутствие специального аллонжа, жидкость продавливают через патрон с помощью шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 1-2 капли в сек.

7.17. Проверка хроматографического поведения метсульфурон-метила на концентрирующем патроне Диапак-С

В круглодонную колбу вместимостью 100 помещают 0,1 стандартного раствора N 1 метсульфурон-метила (п. 7.12.2), растворитель упаривают досуха при температуре не выше 35°С, остаток растворяют в 2 этилацетата, помещают на 30 сек. в ультразвуковую баню. Затем в колбу добавляют 8 гексана, смесь тщательно перемешивают и вносят на концентрирующий патрон, подготовленный по п. 7.16. Колбу обмывают 5 смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) и также вносят на патрон. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 1-2 капли в сек. Элюат отбрасывают.

Высушивают патрон под вакуумом в течение 2 мин. Метсульфурон-метил элюируют с патрона 10 0,1% уксусной кислоты в этилацетате (п. 7.5), собирая 2-е порции элюата по 5 каждая непосредственно в круглодонные колбы. Растворы в колбах упаривают досуха при температуре не выше 35°С. Остаток в каждой колбе растворяют в 2-х смеси растворителей (приготовленной по п. 7.11) и анализируют на содержание метсульфурон-метила по п. 9.3.1 или 9.3.2. При обнаружении вещества только в первой фракции элюирование метсульфурон-метила с патрона осуществляют 5 0,1% уксусной кислоты в этилацетате; при наличии его в обеих, объем элюента увеличивают до 10 .

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79 г.).

Отобранные пробы воды анализируют в день отбора или хранят при 4°С в течение 3-х дней.

Пробы зерна, соломы и соломки льна подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре.

Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Непосредственно перед анализом образцы зерна, соломы и соломки льна измельчают на лабораторной мельнице.

9. Выполнение определения

9.1. Вода

100 анализируемого образца воды помещают в коническую колбу вместимостью 250-300 , вносят 1,18 г двузамещенного фосфата натрия , перемешивают до полного растворения соли, с помощью 1 N едкого натра доводят рН раствора до 10, осуществляя его контроль по иономеру. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 250 , добавляют 25 смеси гексан - хлористый метилен (20:80, по объему), интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой сливают и отбрасывают. Операцию промывки водного раствора смесью гексан-хлористый метилен (20:80) повторяют еще дважды порциями по 15 и 10 .

Водную фазу переносят в коническую колбу вместимостью 250-300 , подкисляют с помощью 1 М орто-фосфорной кислоты до рН 3, контролируя его значение по иономеру. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 150-250 , добавляют 30 смеси гексан - хлористый метилен (65:35, по объему), интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин. Верхний органический слой собирают в коническую колбу вместимостью 100 . Водную фазу вновь переносят в делительную воронку. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 20 и 15 смеси гексан - хлористый метилен (65:35, по объему). Объединенную органическую фазу фильтруют через хлопковую вату, помещенную в конусную химическую воронку, в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35°С. Сухой остаток в колбе растворяют в 4-х смеси растворителей (приготовленной по п. 7.10) и анализируют на содержание метсульфурон-метила по п. 9.3.1 или 9.3.2.

9.2. Почва, зерно, солома, соломка льна

9.2.1. Экстракция

Образец суховоздушной почвы, размолотого зерна массой 10 г, соломы или соломки льна массой 5 г помещают в коническую колбу вместимостью 250-300 , вносят 125 смеси метанол-фосфатный буфер, рН 7 (80:20, по объему, п. 7.6), помещают на встряхиватель на 30 мин, затем выдерживают на ультразвуковой бане 3 мин (при анализе образцов почвы и зерна); образцы соломы и соломки льна встряхивают 1 час, не помещая в ультразвуковую баню.

Раствор фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр "красная лента" под вакуумом. Осадок на фильтре промывают 75 смеси метанол - фосфатный буфер, рН 7 (80:20, по объему). Экстракт и промывку переносят в мерный цилиндр вместимостью 250 с пришлифованной пробкой, перемешивают, измеряют объем раствора, 1/2 его часть (эквивалентную 5 г почвы и зерна или 2,5 г соломы и соломки льна) переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2, 9.2.3., а также 9.2.4. (для соломы).

9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Экстракт, полученный по п. 9.2.1. и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (~20 ) при температуре не выше 35°С, внимательно следя за процессом и не допуская переброса жидкости при вспенивании. К водному остатку добавляют 30 фосфатного буферного раствора, рН 10 (п. 7.7), содержимое колбы тщательно перемешивают. Контролируют рН раствора на иономере, доводят его значение до 10 с помощью 1 N едкого натра.

Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 250 , добавляют 20 смеси гексан - хлористый метилен (20:80, по объему), интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой сливают и отбрасывают. Операцию промывки водного раствора смесью гексан -хлористый метилен (20:80) повторяют еще дважды порциями по 20 .

Водную фазу переносят в химический стакан вместимостью 100 , подкисляют с помощью 1 М орто-фосфорной кислоты до рН 3, контролируя его значение по иономеру. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 150-250 , добавляют 30 смеси гексан - хлористый метилен (65:35, по объему), интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин. Верхний органический слой собирают в мерный цилиндр вместимостью 50 с пришлифованной пробкой. Водную фазу вновь переносят в делительную воронку. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 15 смеси гексан-хлористый метилен (65:35, по объему). Объединенную органическую фазу в мерном цилиндре тщательно перемешивают, измеряют объем раствора.

При анализе образцов почвы, соломы и соломки льна 1/2 часть раствора в цилиндре (эквивалентную 2,5 г почвы, 1,25 г соломы или соломки льна) переносят в делительную воронку вместимостью 150 . При анализе проб зерна органическую фазу переносят в делительную воронку полностью.

Затем в делительную воронку добавляют 10 фосфатного буферного раствора, рН 10 (п. 7.7), интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин. Нижний водный слой отделяют и подвергают дополнительной очистке по п. 9.2.3.

9.2.3. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак-С16

Водный раствор, полученный по п. 9.2.2., вносят на концентриующий патрон Диапак-С16, подготовленный по п. 7.14. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 1-2 капли в сек. Элюат отбрасывают.

Промывают патрон 10 0,005% уксусной кислоты (п. 7.4), затем 15 смеси ацетонитрил - 0,005 М фосфорная кислота (15:85, по объему). Высушивают патрон пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 5 мин. Метсульфурон-метил элюируют с патрона 5 или 10 (в соответствии с п. 7.15) ацетонитрила, собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35°С. Остаток в колбе, растворяют в 2,5 (образцы зерна и соломки льна) или в 2-х (образцы почвы) смеси растворителей (подготовленной по п. 7.11) и анализируют на содержание метсульфурон-метила по п. 9.3.1 или 9.3.2.

Экстракты проб соломы подвергают дополнительной очистке по п. 9.2.4.

9.2.4. Очистка экстракта соломы на концентрирующем патроне Диапак-С

Сухой остаток в колбе, полученный при очистке проб соломы по п. 9.2.3, растворяют в 2 этилацетата, помещают на 30 сек. в ультразвуковую баню. Затем в колбу добавляют 8 гексана, смесь тщательно перемешивают и вносят на концентриующий патрон Диапак-С, подготовленный по п. 7.16. Колбу обмывают 5 смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) и также вносят на патрон. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 1-2 капли в сек. Элюат отбрасывают.

Высушивают патрон под вакуумом в течение 2 мин. Метсульфурон-метил элюируют с патрона 5 или 10 (в соответствии с п. 7.17) 0,1% уксусной кислоты в этилацетате (п. 7.5), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35°С. Остаток в колбе растворяют в 2,5 смеси растворителей (приготовленной по п. 7.11) и анализируют на содержание метсульфурон-метила по п. 9.3.1 или 9.3.2.

9.3. Условия хроматографирования

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США)

9.3.1. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: 0,01 М орто-фосфорная кислота - метанол - ацетонитрил (67:5:28, по объему)

Скорость потока элюента: 0,4

Рабочая длина волны: 230 нм

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20

Ориентировочное время выхода метсульфурон-метила: 12,1-12,5 мин

9.3.2. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Zorbax ODS, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: 0,01 М орто-фосфорная кислота - ацетонитрил (70:30, по объему)

Скорость потока элюента: 1,0

Рабочая длина волны: 230 нм

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20

Ориентировочное время выхода метсульфурон-метила: 12,7-13,0 мин

Образцы, дающие пики, большие, чем стандартный раствор метсульфурон-метила с концентрацией 0,5 , разбавляют смесью растворителей (приготовленной по п. 7.11).

10. Обработка результатов анализа

Содержание метсульфурон-метила в пробе рассчитывают по формуле:

, где

X - содержание метсульфурон-метила в пробе, мг/кг;

А - концентрация метсульфурон-метила, найденная по градуировочному графику, ;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

m - масса (объем) анализируемого образца, г .

K - коэффициент пересчета, учитывающий объем экстрактов проб, используемый для анализа, равный для воды - 1, зерна - 2, почвы, соломы и соломки льна - 4.

ГАРАНТ:

Нумерация разделов приводится в соответствии с источником

4. Разработчики

Юдина Т.В., д.б.н., зав. лаб., Федорова Н.Е., д,б.н., вед. научн. сотр., Волкова В.Н. к.х.н., научн. сотр.

Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана)

141000, г. Мытищи Московской обл., ул. Семашко, д. 2, лаборатория аналитических методов контроля.

Телефон: (095) 586-1276

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко