Приложение Б (обязательное). Определение содержания гистамина в кормовой муке животного происхождения для производства кормов для непродуктивных животных

Приложение Б
(обязательное)

Определение содержания гистамина в кормовой муке животного происхождения для производства кормов для непродуктивных животных

Б.1 Сущность метода

Метод основан на экстракции гистамина разбавленным раствором хлорной кислоты, последующем центрифугировании и количественном определении методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с постколоночной дериватизацией о-фталальдегидом и флуориметрическим детектированием полученной производной.

Б.2 Требования к условиям измерений

При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия эксплуатации анализатора:

- температура окружающего воздуха от 18 °С до 25 °С;

- относительная влажность воздуха не менее 15 % и не более 70 % при температуре 25 °С, с линейным снижением до 50 % при температуре 40 °С, без конденсации;

- атмосферное давление от 94,0 до 106,7 кПа (от 700 до 800 мм рт. ст.).

Б.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

Хроматограф жидкостный высокоэффективный ^*, включающий:

------------------------------

^*_{Примером хроматографической системы, соответствующей описанным требованиям, может служить хроматограф Waters модели 2695 Alliance со сканирующим флуориметрическим детектором Waters модели 2475 и хроматографической колонкой Waters Sunfire С18 размером 4,6 х 150 мм, под управлением программного обеспечения для сбора и обработки данных Empower 2.}

------------------------------

- насос градиентный для 2-компонентного (или более) градиента со встроенным дегазатором, предназначенный для подачи подвижной фазы со скоростью 1 см ³/мин, предпочтительно оснащенный функцией автоматической промывки уплотнений;

- автосамплер, позволяющий дозировать пробу объемом 10 мкл, оснащенный термостатом, способным поддерживать температуру 15 °С;

- колонку длиной 150 мм с внутренним диаметром 4,6 мм, с обращенной фазой С18 размером частиц 5,0 мкм;

- термостат колонок, обеспечивающий поддержание температуры 30 °С с точностью  0,1°;

- детектор флуориметрический, позволяющий производить измерение при длине волны возбуждения 340 нм и длине волны эмиссии 445 нм;

- комплекс программно-аппаратный сбора и обработки данных.

Система постколоночной дериватизации ^**, состоящая из следующего оборудования:

------------------------------

^**_{Допускается использование специализированного оборудования для постколоночной дериватизации, например: системы постколоночной дериватизации Waters, состоящей из модуля постколоночной дериватизации (Post-Column Reaction Module), модуля контроля температуры (Temperature Control Module II) и насоса для подачи дериватизирующего раствора (Reagent Manager).}

------------------------------

- насоса изократического, предназначенного для подачи дериватизирующего раствора со скоростью 0,6 см ³/мин, предпочтительно оснащенного функцией автоматической промывки уплотнений;

- реактора для проведения дериватизации, представляющего собой капилляр из PEEK (полиэфирэфиркетон) пластика с внешним диаметром 1/16 дюйма, внутренним диаметром 0,18 мм, длиной 1,5 м и Т-образный соединитель из PEEK (полиэфирэфиркетон) пластика для капилляров 1/16 дюйма.

Весы лабораторные специального класса точности (I) по ГОСТ Р 53228 с наибольшим пределом взвешивания 220 г, ценой деления 0,1 мг и пределом допускаемой абсолютной погрешности не более  0,15 мг при нагрузке не более 50 г и не более  0,3 мг при нагрузке свыше 50 г.

Весы лабораторные высокого класса точности (II) по ГОСТ Р 53228 с наибольшим пределом взвешивания 3000 г, ценой деления 0,01 г и пределом допускаемой абсолютной погрешности не более  0,05 г.

Дозаторы пипеточные одноканальные с объемом дозирования от 20 до 200 мкл и пределом допускаемого относительного отклонения среднего арифметического значения фактического объема дозы от номинального  (1,5...2,0) %; с объемом дозирования от 100 до 1000 мкл и пределом допускаемого относительного отклонения среднего арифметического значения фактического объема дозы от номинального  1,0 %; с объемом дозирования от 1000 до 5000 мкл и пределом допускаемого относительного отклонения среднего арифметического значения фактического объема дозы от номинального  1,0 %.

Дозатор бутылочный с объемом дозирования от 5 до 50 см ³ и пределом допускаемой относительной погрешности дозирования  1,0 %.

рН-метр универсальный любой марки.

Система вакуумной фильтрации растворителей.

Фильтры мембранные с размером пор 0,22 мкм для фильтрования растворителей, материал фильтра PVDF (поливинилиденфторид).

Фильтры шприцевые с размером пор 0,2 мкм, материал фильтра PTFE (политетрафторэтилен), со стекловолоконным префильтром.

Центрифуга лабораторная, обеспечивающая скорость центрифугирования 3800 об/мин.

Холодильник по ГОСТ 26678.

Шейкер орбитальный (аппарат для встряхивания проб) любой марки.

Ванна ультразвуковая лабораторная с регулятором времени.

Мешалка магнитная с регулированием скорости вращения.

Цилиндры градуированные 2-го класса точности, вместимостью 100, 1000, 2000 см ³ по ГОСТ 1770.

Стаканы химические В-1-1000 и В-1-2000 по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 1-го класса точности, вместимостью 5, 10, 50, 1000, 2000 см ³ по ГОСТ 1770.

Колбы конические вместимостью 100 и 250 см ³ по ГОСТ 25336.

Емкости из темного стекла вместимостью 1000 и 2500 см ³ с закручивающейся крышкой.

Флаконы - виалы хроматографические стеклянные вместимостью 2,0 см ³.

Шприцы инъекционные однократного применения стерильные вместимостью 5, 10 или 20 см ³ по ГОСТ ISO 7886-1.

Пробирки центрифужные пластиковые с завинчивающийся крышкой вместимостью 50 см ³.

Пленка парафиновая герметизирующая.

Бумага индикаторная универсальная (рН 0-12).

Мельница ультрацентробежная с ситом размером отверстий 0,75 мм.

Вода лабораторная для анализа по ГОСТ Р 52501, 1-й степени чистоты.

Гистамина дигидрохлорид с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

о-фталальдегид с массовой долей основного вещества не менее 97 %.

2-меркаптоэтанол с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

Додециловый эфир трикозаэтиленгликоля, 30 %-ный водный раствор.

Кислота хлорная, раствор с массовой долей 70 %.

Кислота борная с массовой долей основного вещества не менее 99,8 %.

Калия гидроокись по ГОСТ 24363, ч. д. а.

Ацетонитрил для ВЭЖХ.

Метанол для ВЭЖХ.

Кислота уксусная ледяная для ВЭЖХ.

Изопропанол для ВЭЖХ.

1-октансульфонат натрия с массовой долей основного вещества не менее 98 %.

Ацетат натрия с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и вспомогательного оборудования с техническими характеристиками, а также реактивов и материалов, по качеству не хуже указанных в настоящем стандарте.

Б.4 Отбор и подготовка проб

Б.4.1 Отбор проб - по ГОСТ 17681.

Б.4.2 Подготовка проб - по ГОСТ 17681-82 (пункт 1.3) со следующим дополнением.

Б.4.2.1 Выделенную пробу массой от 100 до 150 г измельчают на ультрацентробежной мельнице с ситом размером отверстий 0,75 мм и перемешивают.

Б.5 Подготовка к измерению

Б.5.1 Перед проведением испытаний реактивы и калибровочный раствор выдерживают при комнатной температуре не менее 1 ч.

Подготовку к работе оборудования (весы, жидкостный хроматограф, систему для проведения постколоночной дериватизации, орбитальный шейкер) проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации приборов.

При подготовке к работе хроматографа устанавливают температуру автосамплера на 15 °С и температуру колонки на 30 °С.

Подключают противоположные стороны Т-образного соединителя к выходу с хроматографической колонки и к выходу с изократического насоса. Третий выход (перпендикулярный двум другим) подключают к детектору через капилляр, служащий реактором. Т-образный соединитель и реактор помещают в термостат для колонки.

Хроматографическую систему промывают подвижной фазой в течение не менее 30 мин, постепенно увеличивая скорость потока от 0,4 до 1,0 см ³/мин.

При подготовке к работе системы постколоночной дериватизации устанавливают скорость потока дериватизирующего раствора 0,6 см ³/мин. Проверяют рН раствора, выходящего из насоса, с помощью индикаторной бумаги - рН должен быть более 10 для полноты протекания реакции дериватизации. Систему промывают не менее 60 мин.

Б.5.2 Приготовление растворов

Б.5.2.1 Приготовление исходного раствора гистамина

Для приготовления калибровочных растворов гистамина сначала готовят исходный раствор с концентрацией  1000 мг/дм ³. Для этого в мерную колбу вместимостью 50 см ³ взвешивают необходимое количество соли гистамина в соответствии с таблицей Б.1 (точность взвешивания -  0,005 г) с записью результата до четвертого десятичного знака и добавляют небольшое количество воды для лабораторного анализа (20 см ³). Визуально проверяют растворение соли, при наличии нерастворенного осадка растворение проводят в ультразвуковой ванне. Доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Раствор хранят в колбе с притертыми пробками в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С не более 3 мес.

Примечание - При расчете концентрации исходного раствора учитывают содержание основного вещества в реактиве.

Таблица Б.1

Наименование соли	Масса навески соли гистамина, г	Молярная масса соли гистамина, г/моль	Молярная масса гистамина (основания), г/моль	Чистота реактива, %
Гистамина дигидрохлорид	0,0828	184,07	111,15	99

Точную концентрацию гистамина в исходном растворе С _и.р, мг/дм ³, рассчитывают по формуле

,

(Б.1)

где - масса навески соли гистамина, г;

- молярная масса гистамина (основания), г/моль;

Р - чистота реактива (содержание основного вещества), %;

- молярная масса соли гистамина, г/моль;

0,05 - объем колбы для разведения, дм ³.

Б.5.2.2 Приготовление промежуточного раствора гистамина

Для приготовления промежуточного раствора гистамина с концентрацией 40 мг/дм ³ в мерную колбу вместимостью 50 см ³ с помощью пипеточного дозатора вносят 2 см ³ исходного раствора гистамина, доводят объем раствора до метки 0,6 н раствором хлорной кислоты по Б.5.2.4 и перемешивают.

Раствор хранят в колбе с притертой пробкой в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С не более 14 сут.

Точную концентрацию гистамина в промежуточном растворе С _п.р, мг/дм ³, рассчитывают по формуле

,

(Б.2)

где - концентрация гистамина в исходном растворе, мг/дм ³;

2 - объем исходного раствора, см ³;

50 - объем раствора после разведения, см ³.

Б.5.2.3 Приготовление калибровочных растворов гистамина

Для приготовления калибровочных растворов в мерные колбы вместимостью 10 см ³ с помощью пипеточного дозатора вносят необходимое количество промежуточного раствора гистамина в соответствии с таблицей Б.2, доводят объем раствора до метки 0,6 н раствором хлорной кислоты по Б.5.2.4 и перемешивают.

Растворы хранят в колбах с притертой пробкой в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С не более 7 сут.

Таблица Б.2

Калибровочный раствор	1	2	3	4	5
С к.р, мг/дм 3	0,4	1	4	10	20
V п.р, мкл	100	250	1000	2500	5000

Точную концентрацию гистамина в каждом калибровочном растворе С _к.р, мг/дм ³, рассчитывают по формуле

,

(Б.3))

где - концентрация гистамина в промежуточном растворе, мг/дм ³;

- объем промежуточного раствора, взятый для разведения, мкл;

10 - объем раствора после разведения, см ³.

Б.5.2.4 Приготовление экстрагирующего раствора

В качестве экстрагирующего раствора используют 0,6 н раствор хлорной кислоты. Для этого в мерную колбу вместимостью 1000 см ³ приливают от 200 до 300 см ³ воды, затем с помощью мерного цилиндра отмеривают 51,5 см ³ 70 %-ной хлорной кислоты и осторожно вливают в колбу, перемешивают. После охлаждения до комнатной температуры доводят объем до метки водой, перемешивают и гомогенизируют в ультразвуковой ванне 5 мин.

Раствор хранят при комнатной температуре не более 7 сут.

Б.5.2.5 Приготовление ацетатного буфера

Взвешивают (2,15  0,05) г 1-октансульфоната натрия и (16,4  0,1) г ацетата натрия, помещают в мерный стакан вместимостью 1000 см ³, добавляют 950 см ³ воды и растворяют перемешиванием на магнитной мешалке. Доводят рН раствора до (4,5  0,1) добавлением ледяной уксусной кислоты. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см ³, доводят объем раствора до метки водой и перемешивают. Затем раствор гомогенизируют в ультразвуковой ванне в течение 5 мин и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм с использованием системы вакуумной фильтрации растворителей, отбросив первую порцию фильтрата.

Раствор хранят при комнатной температуре не более 7 сут.

Б.5.2.6 Приготовление подвижной фазы А

Взвешивают (2,15  0,05) г 1-октансульфоната натрия и (8,2  0,1) г ацетата натрия, помещают в мерный стакан вместимостью 1000 см ³, добавляют 950 см ³ воды и растворяют перемешиванием на магнитной мешалке. Доводят рН раствора до (5,2  0,1) добавлением ледяной уксусной кислоты. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см ³, доводят объем раствора до метки водой и перемешивают. Затем раствор гомогенизируют в ультразвуковой ванне в течение 5 мин и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм с использованием системы вакуумной фильтрации растворителей, отбросив первую порцию фильтрата.

Раствор хранят при комнатной температуре не более 7 сут.

Б.5.2.7 Приготовление подвижной фазы В

Смешивают 990 см ³ ацетатного буфера по Б.5.2.5 и 510 см ³ ацетонитрила (соотношение 66:34 по объему). Раствор тщательно перемешивают на магнитной мешалке в течение 5 мин, переливают в емкость из темного стекла и гомогенизируют в ультразвуковой ванне в течение 5 мин.

Раствор хранят при комнатной температуре не более 7 сут.

Б.5.2.8 Приготовление 50 %-ного раствора гидроксида калия

В коническую колбу вместимостью 100 см ³ взвешивают 25 г гидроксида калия, добавляют небольшими порциями 25 см ³ воды и охлаждают раствор до комнатной температуры.

Раствор хранят в колбах с притертой пробкой в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С не более 1 мес.

Б.5.2.9 Приготовление боратного буфера

Взвешивают (30,2  0,1) г борной кислоты в стакане вместимостью 1000 см ³, добавляют 500 см ³ воды и перемешивают на магнитной мешалке.

В стакане вместимостью 1000 см ³ растворяют (26,2  0,1) г гидроксида калия в 400 см ³ воды и охлаждают раствор до комнатной температуры.

К раствору борной кислоты приливают раствор гидроксида калия. Полностью растворяют борную кислоту при перемешивании на магнитной мешалке. Проверяют рН полученного раствора и, в случае необходимости, доводят рН до 10,5-11 добавлением 50 %-ного раствора гидроксида калия по Б.5.2.8. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см ³, доводят объем до метки водой и перемешивают. Затем раствор гомогенизируют в ультразвуковой ванне в течение 5 мин и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм с использованием системы вакуумной фильтрации растворителей, отбросив первую порцию фильтрата.

Раствор хранят при комнатной температуре не более 7 сут.

Б.5.2.10 Приготовление дериватизирующего раствора

В мерную колбу вместимостью 5 см ³ взвешивают (0,200  0,001) г о-фталальдегида, доводят объем до метки метанолом и перемешивают. При необходимости раствор гомогенизируют в ультразвуковой ванне.

Мерным цилиндром отмеривают 1000 см ³ боратного буфера по Б.5.2.9. В емкость из темного стекла вливают порцию боратного буфера (от 300 до 400 см ³). С помощью пипеточного дозатора добавляют 3 см ³ раствора додецилового эфира трикозаэтиленгликоля и 3 см ³ 2-меркаптоэтанола, затем добавляют 5 см ³ раствора о-фталальдегида и перемешивают. После этого добавляют оставшийся боратный буфер, снова перемешивают и гомогенизируют в ультразвуковой ванне в течение 15 мин.

Раствор хранят в емкости из темного стекла в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С не более 4 сут.

Б.5.2.11 Приготовление раствора для промывки уплотнений насоса

Смешивают 900 см ³ воды и 100 см ³ изопропанола. Раствор перемешивают и гомогенизируют в ультразвуковой ванне в течение 5 мин.

Раствор хранят при комнатной температуре не более 1 мес.

Б.5.3 Экстракция гистамина из пробы

В плоскодонную колбу вместимостью 250 см ³ взвешивают (5  0,1) г гомогенизированной пробы с записью результата до четвертого десятичного знака. Допускается уменьшение массы навески до (1  0,1) г в том случае, если ожидается, что концентрация гистамина в пробе превышает концентрацию наиболее концентрированного калибровочного раствора (20 мг/дм ³). Дозатором или мерным цилиндром добавляют 100 см ³ экстрагирующего раствора по Б.5.2.4, закрывают колбу парафиновой пленкой и ставят на орбитальный шейкер на 45 мин при скорости 140 об/мин для проведения экстракции.

После этого пробу перемешивают до однородного состояния, переносят от 40 до 50 см ³ экстракта в центрифужную пробирку и центрифугируют 10 мин при скорости 3800 об/мин.

С помощью шприца отбирают 2 см ³ надосадочной жидкости и фильтруют в виалу через шприцевой фильтр с размером пор 0,2 мкм.

Б.6 Проведение измерений

Б.6.1 Условия хроматографических измерений

Условия проведения измерений методом ВЭЖХ подбирают в зависимости от вида применяемого жидкостного хроматографа, флуориметрического детектора и хроматографической колонки.

В качестве примера могут быть приведены следующие условия определения гистамина, выполненные на системе ВЭЖХ с хроматографической колонкой С18; 4,6 х 150 мм; 5,0 мкм.

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (двухкомпонентная подвижная фаза).

Устанавливают следующие настройки хроматографической системы для проведения анализа:

скорость потока подвижной фазы - 1 см ³/мин;

температура колонки - 30 °С;

температура внутри автосамплера - 15 °С;

скорость потока дериватизирующего раствора - 0,6 см ³/мин;

температура дериватизации - 30 °С;

время разделения - 80 мин;

задержка между вводами пробы - 2 мин;

объем вводимой пробы - 10 мкл.

Градиент подвижной фазы устанавливают в соответствии с таблицей Б.3.

Таблица Б.3

Время, мин	Соотношение компонентов подвижной фазы
	А, %	В, %
0	80	20
21	70	30
51	45	55
62	45	55
68	30	70
73	30	70
75	80	20
80	80	20

Б.6.2 Настройка флуориметрического детектора

Для флуориметрического детектора устанавливают следующие настройки:

длина волны возбуждения - 340 нм;

длина волны эмиссии - 445 нм.

Последовательность образцов должна включать следующие позиции:

бланк 1 (холостой опыт) - ввод раствора для экстракции для проверки чистоты посуды, реактивов и системы;

калибровочные растворы в порядке увеличения концентрации гистамина;

бланк 2 (холостой опыт) - ввод раствора для экстракции для проверки чистоты посуды, реактивов и системы;

анализируемые пробы - не более 10 инжекций.

Длительное время разделения - 80 мин - обусловлено необходимостью элюировать с колонки не только гистамин, но и другие биогенные амины и экстрагированные компоненты пробы. Примерное время удерживания гистамина и других биогенных аминов приведено в таблице Б.4.

Таблица Б.4

Биогенный амин	Время удерживания, мин
Тирамин	31
Путресцин	33
Кадаверин	35
Гистамин	38
Спермин	58
Спермидин	73

Б.6.3 Построение калибровочной зависимости

Калибровочная зависимость строится автоматически с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных при хроматографировании калибровочных растворов в каждой серии анализа.

Приготовленные по Б.5.2.3 калибровочные растворы подвергают ВЭЖХ анализу в условиях, выбранных в соответствии с Б.6.1, Б.6.2. Полученные хроматограммы обрабатывают с использованием компьютерной системы обработки данных хроматографа. Определяют абсолютное время удерживания гистамина.

С использованием средств программного обеспечения строят линейную зависимость площади пика гистамина от его концентрации в калибровочном растворе, рассчитанной по Б.5.2.3. При этом калибровочная зависимость должна принудительно проходить через нулевую точку, поэтому необходимо настроить соответствующие параметры обработки данных.

Полученный коэффициент корреляции калибровочной зависимости должен быть не менее 0,99. Значение невязок для каждой точки градуировки не должно превышать 20 %.

Б.6.4 Выполнение измерений

Б.6.4.1 В виалы вместимостью 2 см ³ вносят приготовленный по Б.5.3 экстракт пробы и проводят измерения на системе ВЭЖХ при условиях, указанных в Б.6.1, Б.6.2.

Б.6.4.2 Обработку хроматограмм осуществляют автоматически с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных по установленным критериям. После автоматической обработки оценивают правильность интегрирования пиков на хроматограммах анализируемых проб и, при необходимости, вносят коррективы.

Затем определяют времена удерживания проинтегрированных пиков, которые не должны отличаться от времен удерживания гистамина в калибровочных растворах более чем на 2 % с максимальным отклонением 1 мин.

Содержание гистамина, мг/дм ³, в анализируемых пробах рассчитывают по калибровочной зависимости, полученной по Б.6.3.

Б.6.4.3 Если содержание гистамина в виале превышает концентрацию наиболее концентрированного калибровочного раствора (20 мг/дм ³), необходимо разбавить экстракт экстрагирующим раствором по Б.5.2.4 и повторить определение. Для этого непосредственно перед анализом необходимо разбавить экстракт так, чтобы концентрация попала в середину диапазона калибровки (в 2-5 раз).

Необходимое количество экстрагирующего раствора для разбавления рассчитывают по следующим формулам:

;

(Б.4)

,

(Б.5)

где - объем экстракта для разбавления, см ³;

- конечный объем экстракта в виале, см ³ (должен находиться в диапазоне 1,8-1,5 см ³);

n - количество раз, в которое необходимо разбавить исходный экстракт;

- объем экстрагирующего раствора (Б.5.2.4) для разбавления, см ³.

Пример расчета - Для образца получена концентрация гистамина в виале, равная 30 мг/дм ³. Для того чтобы попасть в диапазон калибровки, необходимо разбавить образец 3 раза. Для этого в пустую виалу с помощью пипеточного дозатора отбирают 0,5 см ³ экстракта и добавляют 1,0 см ³ экстрагирующего раствора (Б.5.2.4). Финальный объем экстракта в виале - 1,5 см ³.

Б.7 Обработка результатов

На основании полученных данных содержание гистамина С, мг/кг, в анализируемой пробе рассчитывают по формуле

,

(Б.6)

где - содержание гистамина в виале, мг/дм ³;

m - масса навески, г;

- объем экстрагирующего раствора, см ³;

- конечный объем экстракта в виале, см ³;

- объем экстракта для разбавления, см ³.

Примечание - Если не проводилось разбавление по Б.6.4.3, то принять V ₂ = V ₁ = 2 см ³.

Б.8 Метрологические характеристики

Данный метод позволяет проводить измерения со следующими метрологическими характеристиками:

- предел количественного определения данного метода - 2 мг/кг;

- неопределенность результатов измерения при концентрации < 10 мг/кг - 60 % при минимуме 2 мг/кг; при концентрации  10 мг/кг - 45 %.

Б.9 Требования безопасности

Б.9.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.018, ГОСТ 12.4.009 и электробезопасности при работе с электроприборами по ГОСТ 12.1.019.

Б.9.2 Помещение, в котором проводят испытания, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021. Чистота воздуха в рабочей зоне должна соответствовать требованиям ГОСТ 12.1.005.

Б.9.3 Работу с химическими реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.