Приложение С (справочное). Среды Элендт (Elendt) М4 и М7

Приложение С
(справочное)

Среды Элендт (Elendt) М4 и М7

С.1 Адаптация к средам Элендт М4 и М7

В некоторых случаях наблюдаются трудности при пересадке дафний в питательные среды М4 и М7. Данные трудности можно преодолеть путем постепенной адаптации, т.е. постепенной пересадкой дафний из собственной среды в 30 %-ную, потом в 60 %-ную и затем в 100 %-ную среды Элендт. Период адаптации может составлять до одного месяца.

С.2 Приготовление сред М4 и М7

С.2.1 Приготовление объединенных растворов, содержащих микропримеси

Сначала в воде подходящей чистоты, например деионизированной, дистиллированной или обратного осмоса ¹⁾ готовят отдельные исходные растворы (I) индивидуальных микропримесей в соответствии с таблицей С.1. Из этих исходных растворов (I) готовят исходные объединенные растворы (II) М4 и М7, содержащие все микропримеси (объединенные растворы).

Таблица С.1 - Приготовление исходных растворов микропримесей

Исходный раствор (I) (одно вещество)	Количество вещества, добавляемого к воде, мг/дм 3	Концентрация (по отношению к среде М4)	Исходный объединенный раствор (II), см 3/дм 3 **
			М4	М7
Н 3ВO 3	57190	20000-кратная	1,0	0,25
	7210	20000-кратная	1,0	0,25
LiCl	6120	20000-кратная	1,0	0,25
RbCl	1420	20000-кратная	1,0	0,25
	3040	20000-кратная	1,0	0,25
NaBr	320	20000-кратная	1,0	0,25
	1230	20000-кратная	1,0	0,25
	335	20000-кратная	1,0	0,25
ZnCl 2	260	20000-кратная	1,0	1,00
	200	20000-кратная	1,0	1,00
Kl	65	20000-кратная	1,0	1,00
Na 2SeO 3	43,8	20000-кратная	1,0	1,00
NH 4VO 3	11,5	20000-кратная	1,0	1,0
*	5000	2000-кратная	-	-
*	1991	2000-кратная	-	-
21 Fe-EDTA *	-	1000-кратная	20,0	5,00
* Растворы и готовят отдельно, затем объединяют и сразу помещают в автоклав. Получают раствор 21 Fe-EDTA. ** Для приготовления исходных объединенных растворов (II) добавляют следующие количества исходных растворов (I) в воду 1) (см 3/дм 3).

------------------------------

¹⁾_{См. [1].}

------------------------------

С.2.2 Приготовление сред М4 и М7

Среды М4 и М7 готовят с использованием основных растворов (II), макронутриентов и витаминов в соответствии с таблицей С.2.

Таблица С.2 - Среды М4 и М7

Компонент	Количество компонента, добавляемого в воду, мг/дм 3	Концентрации (для среды М4)	Количество компонентов для приготовления среды, см 3/дм 3
			М4	М7
Исходные объединенные растворы (II), содержащие все микропримеси		20-кратная	50	50
Основной раствор макроэлементов (отдельные вещества)
	293800	1000-кратная	1,0	1,0
	246600	2000-кратная	0,5	0,5
KCl	58000	10000-кратная	0,1	0,1
NaHCO 3	64800	1000-кратная	1,0	1,0
	50000	5000-кратная	0,2	0,2
NaNO 3	2740	10000-кратная	0,1	0,1
KH 2PO 4	1430	10000-кратная	0,1	0,1
K 2HPO 4	1840	10000-кратная	0,1	0,1
Объединенный витаминный раствор *		10000-кратная	0,1	0,1
* Объединенный витаминный раствор готовят добавлением трех витаминов к 1 дм 3 воды:
Тиамина гидрохлорид	750,0	10000-кратная	-	-
Цианокобаламин (В 12)	10,0	10000-кратная	-	-
Биотин	7,5	10000-кратная	-	-
* Объединенный витаминный раствор хранят в замороженном состоянии небольшими порциями. Витамины добавляют к среде непосредственно перед использованием. Примечание 1 - Для предотвращения осаждения солей при приготовлении сред в мерную колбу вместимостью 1 дм 3 помещают от 500 до 800 см 3 деионизированной воды 1) и добавляют порции основных компонентов раствора, затем доводят водой до метки. Примечание 2 - Состав среды М4 приведен в документе 2).

------------------------------

¹⁾_{См. [1].}

²⁾_{См. [10].}

------------------------------