Приложение В (обязательное). Ключевые параметры и критерии приемлемости для признания системы ВЭЖХ/УВЭЖХ-спектрофотометрии, пригодной для выполнения измерений МТТ-формазана, экстрагируемого из тканей RhE

Приложение В
(обязательное)

Ключевые параметры и критерии приемлемости для признания системы ВЭЖХ/УВЭЖХ-спектрофотометрии, пригодной для выполнения измерений МТТ-формазана, экстрагируемого из тканей RhE.

Таблица В.1 - Параметры и критерии приемлемости применения метода ВЭЖХ/УВЭЖХ-спектрофотометрии

Параметр	Протокол выполнения измерений согласно руководству FDA [36], [37]	Критерии приемлемости
Избирательность	Исследование изопропанола, контрольной пробы, полученной из жизнеспособной ткани (изопропанолового экстракта из жизнеспособных тканей RhE, не подвергавшихся какой-либо обработке), контрольной пробы, полученной из нежизнеспособных клеток (изопропанолового экстракта из нежизнеспособных тканей RhE, не подвергавшихся какой-либо обработке)	Площадь помехи 20 % от площади LLOQ 1)
Прецизионность	Образцы для контроля качества (т.е. раствор МТТ-формазана с концентрацией 1,6 мкг/см 3, 16 мкг/см 3 и 160 мкг/см 3) в изопропаноле (n = 5)	КВ 15 % или 20 % для LLOQ
Точность	Образцы для контроля качества в изопропаноле (n = 5)	% отклонение 15 % или 20 % для LLOQ
Влияние матрицы	Образцы для контроля качества представляют собой контрольную пробу, полученную из жизнеспособных тканей (n = 5)	85 % влияние матрицы % 115 %
Перенос	Анализ изопропанола после исследования стандартной пробы для ULOQ 2)	Площадь помехи 20 % от площади LLOQ 1)
Воспроизводимость (в течение дня)	3 отдельные градуировочные кривые (для 6 последовательно разбавленных 1:3 растворов МТТ-формазана в изопропаноле, начиная с ULOQ, т.е. 200 мкг/см 3). Образцы для контроля качества в изопропаноле (n = 5)	Градуировочные кривые: % отклонение 15 % или 20 % для LLOQ. Образцы для контроля качества: % отклонение 15 % и КВ 15 %
Воспроизводимость (в разные дни)	День 1: 1 градуировочная кривая и образцы для контроля качества в изопропаноле (n = 3). День 2: 1 к градуировочная кривая и образцы для контроля качества в изопропаноле (n = 3). День 3: 1 градуировочная кривая и образцы для контроля качества в изопропаноле (n = 3)
Краткосрочная стабильность МТТ-формазана в экстракте из ткани RhE	Контрольные пробы для контроля качества, полученные из жизнеспособных тканей (n = 3), анализируются в день приготовления и после 24 ч хранения при комнатной температуре	% отклонение 15 %
Долгосрочная стабильность МТТ-формазана в экстракте из ткани RhE, при необходимости	Контрольные пробы для контроля качества, полученные из жизнеспособных тканей (n = 3), исследуются в день приготовления и после нескольких дней хранения при заданном значении температуры (например, 4 °С, - 20 °С, - 80 °С)	% отклонение 15 %
1) LLOQ: (Lower Limit of Quantification) - нижний предел количественного определения, который должен соответствовать 1-2 % показателя жизнеспособности тканей, т.е. 0,8 мкг/см 3. 2) ULOQ: (Upper Limit of Quantification) - верхний предел количественного определения, который должен соответствовать приблизительно двухкратному значению максимальной ожидаемой концентрации МТТ-формазана в изопропаноловых экстрактах для отрицательных контрольных проб, т.е. 200 мкг/см 3.