Приложение 4. Проведение смывов для контроля контаминации лаборатории продуктами ПЦР

Приложение 4
к МУК 4.2.3701-21

Проведение смывов для контроля контаминации лаборатории продуктами ПЦР

1. Процедуру рекомендуется проводить с необходимой периодичностью в зависимости от интенсивности работы (не реже чем 1 раз в месяц; при ежедневном проведении исследований 1 раз в неделю) либо в случае получения положительных сигналов при амплификации отрицательных контролей этапов ПЦР.

2. Взятие смывов проводят в первой половине рабочего дня. Контрольные точки для смывов должны включать: рабочие и контактные поверхности лабораторного оборудования (автоматические дозаторы, центрифуги, микроцентрифуги/вортексы, амплификаторы, термостаты, холодильники); поверхности лабораторных материалов (штативы, пакеты с реактивами, упаковки расходных материалов, ножницы, пинцеты, маркеры и другое); рабочие и контактные поверхности лабораторных столов, боксов, ламинарных шкафов; прочие контактные поверхности (ручки дверей, кнопки компьютеров, компьютерные мыши, телефоны, компьютерные столы, прочая лабораторная мебель). При наличии отдельных помещений для размещения амплификаторов забор производится из тех же точек.

2.1. Необходимые материалы:

- среда для взятия смывов - ТЕ-буфер или деионизованная вода;

- палочки с ватными наконечниками или зонды с ватным тампоном;

- наборы реагентов для ПЦР, с которыми работает лаборатория.

2.2. Список контрольных точек, с которых производится взятие смывов:

- рукоятки пипеток в зоне выделения ДНК;

- поверхность термостата в зоне выделения ДНК;

- ручки холодильников в зоне ПЦР;

- рукоятки ламинарных шкафов в зоне ПЦР;

- поверхность вортекса в зоне ПЦР;

- рукоятки дозаторов в зоне ПЦР;

- ручки дверей всех лабораторных помещений;

- корпус и блоки приборов для ПЦР;

- клавиатура компьютеров в зоне ПЦР;

- телефон (если имеется в рабочих зонах).

3. Процедура взятия смывов:

- надеть перчатки, протереть их салфеткой, смоченной 70%-м раствором этилового спирта;

- в стерильных условиях отобрать необходимое количество стерильных пробирок объемом 1,5-2 мл и в каждую пробирку внести 300 мкл ТЕ-буфера/деионизованной воды;

- промаркировать пробирки в соответствии с названиями контрольных точек;

- взять смывы с каждой контрольной точки (в соответствии с п. 2.2. приложения 4 к настоящим МУК);

- для взятия смывов с каждой новой контрольной точки использовать отдельный зонд;

- при взятии смывов с ламинарного шкафа первоначально открыть переднее стекло, взять смывы с дозаторов, оборудования, штативов для наконечников и пробирок, с рабочих поверхностей, затем с ручек и кнопок. Далее закрыть переднее стекло и включить ультрафиолетовое облучение;

- пробирки со смывами перенести в зону постановки ПЦР.

3.1. Порядок взятия смывов с каждой контрольной точки:

а) открыть пробирку, смочить зонд с ватным тампоном в ТЕ-буфере/деионизованной воде, после чего пробирку закрыть;

б) вращательными движениями провести зондом по поверхности объекта (из списка контрольных точек);

в) открыть пробирку, тщательно прополоскать рабочую часть зонда в ТЕ-буфере/деионизованной воде, отжимая его о стенки пробирки и избегая разбрызгивания раствора;

г) удалить зонд в контейнер для отходов.

4. Постановка ПЦР. ПЦР-исследование полученных смывов с контрольных точек проводится в обычном порядке по инструкции к набору реагентов, начиная с этапа амплификации ДНК. Для этого в пробирку, подготовленную к амплификации, вместо необходимого объема ДНК вносится жидкость образца смыва исследуемой контрольной точки. С целью экономии реагентов перед проведением ПЦР допустимо объединять в отдельной пробирке (пулировать) по 10 мкл образцы смывов с контрольных точек в одной зоне (например, в ламинарном шкафу, в ПЦР-боксе, с приборов для ПЦР и так далее) и затем исследовать как один образец. При получении положительных результатов какого-либо пула для уточнения источника контаминации необходимо исследовать отдельные точки, входившие в пул.

5. Все результаты проведения смывов с целью контроля контаминации лаборатории продуктами ПЦР регистрируются в специальном журнале.

6. Интерпретация результатов исследования смывов с контрольных точек.

Результаты анализа смывов считаются достоверными только в случае получения корректных результатов для положительного и отрицательного контролей амплификации в соответствии с инструкцией к набору реагентов.

Контрольные точки, в которых выявлены положительные результаты ПЦР, необходимо подвергнуть обработке веществами, деградирующими ДНК (препараты, содержащие активный хлор), с последующей экспозицией в течение 30 минут, тщательным удалением дезинфицирующего раствора водопроводной водой и облучением в ультрафиолетовом спектре.