Методические указания МУК 4.1.1222-03 "Измерения концентраций кломазона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы, корнеплодах моркови и клубнях картофеля методом газожидкостной хроматографии" (дополнение к N 5006-89 от 8 июня 1989 г.) (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 марта 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1222-03
"Измерения концентраций кломазона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы, корнеплодах моркови и клубнях картофеля методом газожидкостной хроматографии"
(дополнение к N 5006-89 от 8 июня 1989 г.)
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 марта 2003 г.)

Дата введения - 1 июля 2003 г.

1. Вводная часть

Фирма-производитель: ФМС ЕВРОПА Н.В.

Торговое название: КОММАНД, ВР.

Действующее вещество: кломазон (ISO).

Действующее вещество: 2-(2-хлоробензил)-4,4-диметил-1,2-оксазолидин-3-он (IUPAC).

Структурная формула:

Эмпирическая формула: .

Молекулярная масса: 239,7.

Вязкая светло-коричневая жидкость с рыбным запахом.

Плотность 1,192 при 20°С.

Давление паров при 25°С 19,2 мПа.

Растворимость в воде 1,1 г/л.

Растворимость в органических растворителях (г/л, 20°С): хорошо растворим в ацетоне, ацетонитриле, хлороформе, циклогексаноне, гексане, гептане, хлористом метилене, метаноле, диметилформамиде, толуоле, диоксане и других органических растворителях.

Кломазон устойчив при хранении. При комнатной температуре может храниться без потерь в течение года, при 50°С - в течение 3 месяцев. В водных растворах период полураспада при солнечном свете более 30 дней.

Гигиенические нормативы. ВМДУ моркови, свеклы сахарной - 0,1 мг/кг.

Область применения препарата: Селективный системный гербицид, используемый для борьбы со злаковыми и некоторыми двудольными сорными растениями на посевах сои при довсходовом или предпосевном внесении с заделкой в почву, а также в смеси с другими гербицидами применяется на других культурах - рапсе, картофеле, бобовых, хлопчатнике.

2. Методика измерения концентраций кломазона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы, корнеплодах моркови и клубнях картофеля методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип методики

Методика основана на определении кломазона с помощью газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после извлечения гербицида из проб гексаном, очистке экстрактов на колонке с флорисилом и концентрировании.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для борьбы с сорной растительностью, защиты овощных и масличных культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды). Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб, а также сочетанием селективного детектора и условиями хроматографирования.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл.

Таблица

Метрологическая характеристика метода

Анализируемый объект	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал среднего при n = 5 и р = 0,95, %
Свекла сахарная (корнеплоды)	0,01	0,025-0,25	85	5,1	4,0
Свекла сахарная (ботва)	0,02	0,05-0,5	87	6,5	5,2
Морковь	0,01	0,025-0,25	86	6,0	4,8
Картофель	0,01	0,025-0,25	88	5,4	4,3

Минимально детектируемое количество кломазона в хроматографируемом объеме - 0,5 нг.

Граница суммарной погрешности измерения - 10%.

Линейный динамический диапазон детектирования - 0,5-5 нг.

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Аналитический стандарт кломазона с содержанием д.в. 99%, (ФМС, Европа НВ)
Азот газообразный высокой чистоты	ТУ 6-16-40-14-88
Бумага фильтровальная	ТУ 6-091678-86
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72
н-Гексан, х.ч.	ТУ 2631-03-05807999-98
Гелий очищенный марки Б	МРТУ 6-09-374-86
Натрий серно-кислый, безводный, ч.д.а. свежепрокаленный	ГОСТ 4166-76
Неподвижная жидкая фаза OV-17, Супелко Инк, США
Неподвижная жидкая фаза PS-400, Alltech Associates, Inc., США
Супелкосил (60-100 меш), Супелко Инк, США
Флориил (100-120 меш), Мерк, Германия
Хромосорб 750 зернением 100-120 меш, Serva, Германия
Этилацетат, х.ч.	ГОСТ 22300-76

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Газовый хроматограф, оснащенный термоионным детектором
Хроматографические колонки стеклянные, длиной 2 м и внутренним диаметром 2 мм
Аппарат для встряхивания	ТУ 6-921-1084-73
Баня водяная	ТУ 64-1-2850-16
Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные	ГОСТ 34104-80
Весы технические ВЛКТ-500 или аналогичные	ГОСТ 24104-80
Воронки лабораторные В-75-110	ГОСТ 25336-82
Испаритель вакуумный ротационный ИР-1М или аналогичный	ТУ 25-11917-74
Колбы круглодонные, вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл	ГОСТ 25336-82
Колбы плоскодонные, вместимостью 250 и 500 мл	ГОСТ 25336-82
Колбы мерные, вместимостью 25, 50, 100 и 1 000 мл	ГОСТ 1770-74
Микропипетки	ГОСТ 20292-74
Микрошприц МШ-10, МШ-10М	ТУ 2-833-106
Насос стеклянный вакуумный водоструйный	ГОСТ 10696-75
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5, 10 мл	ГОСТ 22292-74
Стаканы химические	ГОСТ 25336-82Е
Хроматографические стеклянные колонки, длиной 350 мм и внутренним диаметром 14 мм
Цилиндры мерные, вместимостью 100 и 500 мл	ГОСТ 1774-74

2.4. Отбор и подготовка проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.

Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре -18°С.

Корнеплоды и клубни картофеля, не размораживая, измельчают на терке, зеленую массу растений - ножницами.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии

Готовую насадку (5% PS-400 или 3% OV-17 на хромосорбе 750) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и выдерживают при температуре 260°С в течение 10-12 ч.

2.5.2. Подготовка растворителей

Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.

Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя испаряют при помощи вакуумного ротационного испарителя при температуре 40°С досуха, обмывают стенки колбы 2 мл растворителя и хроматографируют полученный раствор. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

2.5.3. Приготовление растворов

Раствор гексан-этилацетат в соотношении 95:5 по объему. В мерную колбу на 1 л наливают 50 мл этилацетата и доводят объем до метки гексаном.

Раствор гексан-этилацетат в соотношении 90:10 по объему. В мерную колбу на 1 л наливают 100 мл этилацетата и доводят объем до метки гексаном.

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

Взвешивают 100 мг аналитического стандарта кломазона, переносят в мерную колбу объемом 100 мл, доводят объем до метки гексаном (основной стандартный раствор N 1 с концентрацией 1 мг/мл).

Методом последовательного разбавления стандартного раствора N 1 гексаном готовят рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,25, 0,5, 1, 2,5 мкг/мл, которые используются при определении степени извлечения и построения калибровочного графика.

Основные и рабочие стандартные растворы устойчивы при хранении в холодильнике при температуре 4°С в течение трех месяцев.

2.5.5. Подготовка флорисила (супелкосила) и хроматографических колонок для очистки экстрактов

Флорисил (супелкосил) прокаливают в муфельной печи при температуре 350-400°С в течение не менее 16 ч. Остужают в эксикаторе. Сорбент помещают в плоскодонную колбу, добавляют 3% дистиллированной воды (по весу) и встряхивают содержимое колбы на механическом встряхивателе в течение 2 ч. Оставляют стоять на 48 ч, периодически встряхивая содержимое колбы (2 раза в сутки по 30 мин).

В нижнюю часть колонки для очистки экстрактов помещают тампон из стекловаты. Заполняют колонку на 1/4 гексаном. Навеску флорисила или супелкосила (10 г) смешивают в химическом стакане с 15-20 мл гексана. Заполняют колонку суспензией флорисила (супелкосила) в гексане. Уровень растворителя над флорисилом должен составлять 10-15 мм. Промывают колонку последовательно 30 мл этилацетата и 50 мл гексана.

Для каждой приготовленной партии флорисила (супелкосила) проверяют объем удерживания кломазона на хроматографической колонке.

2.5.6. Определение объема удерживания кломазона на хроматографической колонке

Уровень растворителя в хроматографической колонке с флорисилом понижают почти до верхнего слоя сорбента. При помощи стеклянной или автоматической пипетки вносят 1 мл раствора кломазона в гексане концентрацией 10 мкг/мл. Дают раствору впитаться, приоткрывая кран колонки и осторожно сливая растворитель, так чтобы слой растворителя над верхним краем сорбента составлял см. Промывают колонку 100 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5. Элюат отбрасывают. Элюируют кломазон из колонки смесью гексан-этилацетат в соотношении 9:1 со скоростью 2 мл/мин. Отбирают фракции объемом 10 мл в мерные цилиндры на 10 мл. Всего отбирают 6-7 фракций. Из цилиндров растворы переливают в круглодонные колбы на 50 мл (каждую фракцию помещают в отдельную колбу). Каждый цилиндр ополаскивают 1-2 мл гексана, который также вносят в соответствующую колбу. Выпаривают растворитель в каждой колбе на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не более 40°С до объема примерно 1 мл. Переносят экстракты в мерные пробирки со шлифом. Стенки колб обмывают 0,7-0,8 мл гексана, который также переносят в соответствующие пробирки. Доводят объем раствора гексана в каждой пробирке точно до 2 мл и хроматографируют. Суммарный объем фракций, в которых обнаружен кломазон, представляет собой объем растворителя, который необходим для элюирования кломазона из колонки.

2.5.7. Построение калибровочного графика

Рабочие стандартные растворы кломазона с концентрацией 0,25, 0,5, 1, 2,5 мкг/мл хроматографируют, а затем на основании данных хроматографирования рабочих стандартных растворов строят калибровочный график, откладывая на оси ординат площади (высоты) пиков, на оси абсцисс - концентрацию кломазона.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации. Находят среднее значение высоты (площади) пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график зависимости высоты в мм (мв) или площади хроматографического пика от концентрации кломазона в растворе, мкг/мл.

2.5.8. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения производится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6. Описание измерения

2.6.1. Экстракция

Навеску измельченной пробы картофеля, моркови, корнеплодов сахарной свеклы (20 г) или ботвы сахарной свеклы (10 г) помещают в коническую колбу емкостью 500 мл, добавляют в нее 100 мл гексана и встряхивают на механическом встряхивателе в течение 30 мин. Содержимое колбы фильтруют в круглодонную колбу методом декантации через фильтр "белая лента" со слоем безводного сульфата натрия высотой 1-2 см. Экстракцию повторяют дважды используя 100 и 50 мл гексана. Осадок на фильтре промывают тремя порциями гексана по 20 мл. Объединенный экстракт упаривают до объема 2-3 мл на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40°С. Далее проводят очистку пробы на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.

2.6.2. Очистка на колонке с флорисилом (супелкосилом)

Перед внесением пробы уровень растворителя в колонке понижают почти до верхнего края сорбента. Пипеткой количественно переносят анализируемую пробу из колбы в колонку и дают ей впитаться. Колбу ополаскивают двумя порциями гексана по 2 мл, которые также вносят в колонку. Дают раствору впитаться, приоткрывая кран колонки и осторожно сливая растворитель, так чтобы слой растворителя над верхним краем сорбента составлял см. Промывают колонку 100 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5. Растворитель отбрасывают. Элюируют кломазон из колонки 50 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 9:1 со скоростью 2 мл/мин. Элюат собирают в круглодонную колбу на 100 мл. Выпаривают растворитель на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не более 40°С до объема примерно 1 мл. Переносят экстракт в мерную пробирку со шлифом. Стенки колб обмывают 0,7-0,8 мл гексана, который также переносят в пробирку. Доводят объем раствора гексана в мерной пробирке точно до 2 мл и хроматографируют по п. 2.7.

2.7. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором (PYE-UNICAM серии 200, цвет серии 500 или аналогичные).

Основной вариант.

Носитель - хромосорб 750 (100-120 меш). Неподвижная фаза - 5% PS-400.

Колонка стеклянная, длиной 1,8 м и внутренним диаметром 2 мм.

Газ-носитель - гелий или азот.

Скорость потока: гелий (азот) - 25 ; водород - 35 ;

воздух - 300 .

Температура: термостата колонок 190°С; термостата испарителя 250°С; термостата детектора 300°С.

Время удерживания кломазона мин.

Альтернативный вариант.

Носитель - хромосорб 750 (100-120 меш). Неподвижная фаза - 3% OV-17.

Колонка стеклянная, длиной 2 м и внутренним диаметром 2 мм.

Скорость потока: гелий (азот) - 20 ; водород - 30 ;

воздух - 300

Температура: термостата колонок 190; термостата испарителя 250°С; термостата детектора 300°С.

При этих условиях хроматографирования время удерживания кломазона мин.

Вводимый в хроматограф объем пробы - 2 мкл.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией кломазона 2,5 мкг/мл, разбавляют.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание кломазона в пробах вычисляют по формуле:

, где:

С - концентрация стандартного раствора кломазона, мкг/мл;

- объем анализируемой пробы, подготовленной для хроматографического анализа, мл;

- объем раствора анализируемой пробы, вводимого в хроматограф, мкл;

- объем стандартного раствора, вводимого в хроматограф, мкл;

А - масса пробы, отобранной для анализа, г;

- площадь пика кломазона в пробе ( или ) или высота пика (мв или мм);

- площадь пика кломазона в стандартном растворе ( или ) или высота пика (мв или мм).

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать все требования безопасности, рекомендуемые при работе с растворителями, токсичными и легковоспламеняющимися веществами, а также правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии и личной гигиены при работе в химических лабораториях.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

5. Разработчики

Долженко В.И. (Всероссийский НИИ защиты растений, г. Санкт-Петербург - Пушкин), Басова Ю.Г., Сабуров Г.Г., Маслаков С.Е. (Санкт-Петербургский НИИ лесного хозяйства, г. Санкт-Петербург).

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко