Приложение С (справочное). Приготовление и стандартизация суспензий

Приложение С
(справочное)

Приготовление и стандартизация суспензий

С.1 Культуры эталонных штаммов

Чтобы улучшить повторяемость и воспроизводимость результатов, рекомендуется использовать третью (по крайней мере вторую) субкультуру, выращенную на агаризованной среде, полученную от культур, хранимых и приготовленных согласно [5], для приготовления посевного материала бактерий. При использовании Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus субкультуры восстанавливают в течение 18-24 ч. При использовании Candida albicans пригодна первая или вторая субкультура, выращенная в течение 36-48 ч.

С.2 Приготовление клеточных суспензий

Берут 10 см ³ разбавителя и вносят в стерильную колбу вместимостью 100 см ³, содержащую 5 г стеклянных бусинок. Петлей переносят клетки, выращенные на агаризованной среде, в разбавитель. Клетки должны быть ресуспендированы в разбавителе путем погружения петли и приведения ее в соприкосновение со стенкой колбы с целью перемещения клеток в жидкость. Встряхивают колбу в течение 2-3 мин (используя, если возможно, механический шейкер/встряхивающее устройство). Удаляют верхнюю часть суспензии (избегая любого контакта со стеклянными бусинками) и переносят полученную суспензию в стерильную колбу (пробирку).

С.3 Стандартизация суспензий

Регулируют число клеток в суспензии до значений КОЕ/см ³ - КОЕ/см ³ (для С. albicans КОЕ/см ³ - КОЕ/см ³), используя разбавитель в соответствии с данными стандартизации, полученными в лаборатории. Например, используют спектрофотометр [длина волны (620  20) нм] и разовую кювету с длиной оптического пути 10 мм. Измеряют оптическую плотность аликвоты суспензии и при необходимости разбавляют ее, чтобы довести оптическую плотность до определенного значения. Соответствующие значения оптической плотности были получены в диапазоне между 0,150 и 0,460 в зависимости от вида штаммов.