Приложение Н (справочное). Экспериментальная модель на крысе для исследования субхронической токсичности - два пути парентерального введения

Приложение Н
(справочное)

Экспериментальная модель на крысе для исследования субхронической токсичности - два пути парентерального введения

Н.1 Общие положения

Многие МИ, подлежащие исследованию подострой/субхронической токсичности, являются имплантируемыми изделиями и, таким образом, наиболее клинически значимым путем воздействия в экспериментальной модели на животных является имплантация. Если МИ не предназначено для имплантации, то воздействие МИ осуществляют путем введения доз экстрактов. Допускается выполнять сопутствующее парентеральное введение полярных и неполярных экстрактов.

В клинической практике при имплантировании МИ или его присоединении извне одновременно может происходить воздействие полярных и неполярных выщелачиваемых веществ. При оценке токсичности МИ применяют инъекции полярного и неполярного экстрактов исследуемого образца одному и тому же животному. Такое воздействие более точно имитирует клинический опыт общего воздействия выщелачиваемых веществ. Данный метод не рекомендуется применять при необходимости отдельного исследования каждого из путей парентерального введения. В таком случае руководствуются требованиями раздела 6.

Рекомендуемые объемы дозирования для двух путей модели парентерального введения приведены в таблице Н.1.

Таблица Н.1 - Рекомендуемые объемы дозирования для двух путей модели парентерального введения

Число животных/пол/группа а	Путь	Доза
		Объем (мг/кг) b	Частота, продолжительность исследования d	Скорость мл/мин
6	Внутривенный	10	Ежедневно в течение 14 сут	2
	Внутрибрюшинный	5 c	1, 4, 7, 10, 13	Медленное болюсное
а Животным контрольной группы вводят экстрагирующую/модельную среду (6/пол) в той же дозе аналогичным способом. b Рекомендуемые объемы. с Предпочтительно кунжутное (сезамовое) масло. d Введение доз может начинаться в день 0.

Н.2 Процедура

Лабораторным животным вводят дозу полярного (водного) экстракта исследуемого образца, контрольным животным - дозу полярного экстрагирующего/модельного раствора внутривенно 7 сут/неделю в течение всего времени проведения исследования (т.е. 14 доз). Для неполярных исследуемых образцов тем же экспериментальным животным вводят дозу неполярного экстракта исследуемого образца, контрольным животным - дозу неполярного экстрагирующего/модельного раствора внутрибрюшинно каждые третьи сутки в течение всего времени проведения исследования (т.е. 5 доз).

Н.3 Обоснование объема дозы и частоты введения дозы

Н.3.1 Внутривенный путь введения

В таблице В.1 приведены максимальные объемы доз для введения исследуемого образца, если требуется одно или ограниченное число внутривенных введений. При повторяющихся ежедневно или повторных введениях любым путем объем исследуемого образца уменьшают. LASA (Научная ассоциация по лабораторным животным) рекомендует максимальный объем внутривенного дозирования в 5 мл/кг для болюсной инъекции крысе, вводимой за относительно короткий период времени (менее 1 мин), и для одного ежесуточного дозирования на постоянной основе (скорость введения инъекции - не более 2 мл/мин) см. [17]. При повторяющемся внутривенном введении экстрактов МИ доза объемом 10 мл/кг не причиняет нежелательного стресса животным, см. [13].

Н.3.2 Внутрибрюшинный путь введения

В таблице В.1 приведены максимальные объемы дозирования для введения исследуемого образца, если требуется одно или ограниченное число внутрибрюшинных введений. Животные хорошо переносят введение с перерывами экстракта кунжутного масла объемом 5 мл/кг. Выявлено, что перитонеальный остаточный объем (PRV) неводных введенных доз от 5 до 10 мл/кг может сохраняться в организме животного до трех дней. Для повторяющегося внутрибрюшинного введения неполярных экстрактов МИ при сопутствующем введении внутривенной инъекции в 10 мл/кг объем дозы в 5 мл/кг не причиняет нежелательного стресса животному и представляет собой приемлемый объем пролонгированного воздействия для неполярных экстрактов.

Выявлены несколько осложнений введения образцов внутрибрюшинным путем: кровотечение в месте инъекции, паралитическая кишечная непроходимость из-за введенного образца, рассечение органов брюшной полости, перитонит, случайная инъекция в желудочно-кишечный тракт или мочевой пузырь. Частота ошибочных внутрибрюшинных инъекций опытными исследователями находится в диапазоне от 11 % до 20 %, см. [18]. В связи с этим, а также с учетом PRV и потенциального увеличения объема внутрибрюшинной дозы при частом дозировании, график введения дозы составляет три раза в неделю, при этом животному не причиняется нежелательный стресс, а объем растянутого воздействия для неводных экстрактов является оптимальным.

Общие аспекты планирования исследования приведены в разделе 6.