Приложение А (обязательное). Метод имплантации в подкожную ткань

Приложение А
(обязательное)

Метод
имплантации в подкожную ткань

А.1 Область применения

Данный метод исследования используют для оценки биологической реакции подкожной ткани на имплантируемый биоматериал.

Метод используют для сравнения биологического действия одного и того же биоматериала с разной текстурой и состоянием поверхности, а также полученных с применением различных видов обработки или способов модифицирования.

А.2 Сущность метода

Биологическую реакцию на имплантируемые исследуемые образцы сравнивают с биологической реакцией на имплантируемые контрольные образцы. Контрольными образцами являются материалы, применяемые в МИ, клиническая применимость и характеристики биосовместимости которых установлены.

А.3 Требования к образцам

Общие требования к подготовке исследуемых и контрольных образцов установлены в 4.2. Размеры имплантируемых образцов зависят от размеров лабораторного животного. Требования к размерам образцов:

a) размеры образца в форме диска - диаметр от 10 до 12 мм, толщина от 0,3 до 1 мм.

Примечание - Для оценки биологического действия полимерного материала в форме пластины рекомендуется имплантацию выполнять в подкожный участок, расположенный ниже мышцы panniculus carnosus. Во внутримышечном участке данный материал может образовывать складки, что влияет на оценку биологического действия материала per se.

b) размеры образца в форме стержня или цилиндра - диаметр от 1,5 до 2 мм, длина от 5 до 10 мм, образцы должны иметь закругленные концы;

c) размеры трубок с образцами биоматериалов, представленных в нетвердой форме, включая порошки, - диаметр 1,5 мм, длина 5 мм (см. 4.2). По возможности, образцы рекомендуется имплантировать непосредственно в ткани. Место имплантации резорбируемых материалов рекомендуется отмечать соответствующей меткой;

d) при проведении исследований методами имплантации в сочетании с исследованиями общей токсичности допускается использовать образцы других размеров, анатомически совместимых с клинически значимыми образцами.

А.4 Лабораторные животные и место имплантации

Образцы вводят в подкожную ткань спины взрослых мышей, крыс, морских свинок или кроликов. Выбирают животных одного вида в соответствии с ISO 10993-2.

Для исследования каждого биоматериала используют не менее трех животных. Число участков имплантации должно быть достаточным для введения 10 исследуемых и 10 контрольных образцов каждого биоматериала в каждом исследовании. При заборе нескольких образцов ткани из одного места имплантации расстояние между гистологическими срезами должно быть не менее 1 см.

Образцы ткани для оценки биологического действия биоматериала отбирают не менее чем от трех животных. Нерезорбируемый контрольный образец следует оценивать в каждой временной точке. Допускается использовать одну временную контрольную точку при наличии документально оформленного приемлемого обоснования, содержащего:

- сведения о контрольном образце;

- сведения о продолжительности наблюдений после имплантации;

- информацию о модели на экспериментальных животных;

- протокол исследования;

- дополнительные данные о контрольном образце.

А.5 Процедура имплантации

А.5.1 Общие положения

Применяют один из методов имплантации, приведенных в А.5.2 и А.5.3.

А.5.2 Имплантация в область средней линии спины

Надрезают кожу и тупым рассечением делают один или более подкожных карманов. Основание кармана должно располагаться на расстоянии более 10 мм от линии разреза. Помещают в каждый карман по одному имплантируемому образцу так, чтобы они не соприкасались друг с другом. Допускается имплантировать образцы в бока животного.

Примечание - Допускается помещать имплантат в нужный участок с помощью трокара или, по показаниям, сделать несколько маленьких надрезов.

А.5.3 Имплантация в область шеи

У мышей делают надрез длиной 10 мм над крестцом и тупым рассечением подготавливают подкожный туннель, направленный к шее. Затем имплантируемый образец проталкивают через туннель и размещают его в шее [23], [24].

Крысам имплантируют по одному контрольному и исследуемому образцу, каждой отдельно в обе стороны шеи так, чтобы образцы не соприкасались друг с другом. Допускается имплантировать образцы в бока и/или задние ноги крыс.

На определенном расстоянии от имплантированного образца закрывают туннель стежками подходящего шовного материала для предотвращения его сдвига.

А.6 Продолжительность наблюдений после имплантации

Продолжительность исследования и наблюдений после имплантации, обеспечивающую стабильную фазу биологической реакции ткани, устанавливают в соответствии с 5.3.

А.7 Оценка биологической реакции

Биологическую реакцию оценивают в соответствии с требованиями, установленными в разделе 5.

А.8 Отчет об исследовании

В отчет об исследовании включают полученные результаты и информацию в соответствии с разделом 6, включая обоснования выбранного метода исследования.