Приложение В (обязательное). Метод определения степени биостойкости строительных материалов к воздействию микроорганизмов

Приложение В
(обязательное)

Метод
определения степени биостойкости строительных материалов к воздействию микроорганизмов

В.1 Общие рекомендации

Настоящая методика разработана для проверки на стойкость строительных материалов к воздействию микроорганизмов-биодеструкторов, а именно некоторых видов грибов и бактерий. В основу методики положены:

- требования ГОСТ 9.048;

- литературные данные;

- результаты микробиологических исследований строительных конструкций зданий и сооружений различных назначений, памятников истории и архитектуры, которые проводились в период 1995-2020 годы.

Существующие нормативные документы по биостойкости разработаны для технических изделий и не учитывают специфику многих строительных материалов. В настоящей методике в перечень микробиодеструкторов строительных материалов включены грибы, предусмотренные ГОСТ 9.048, а также грибы и бактерии, наиболее часто встречаемые на строительных материалах в разных экологических условиях. Необходимо учитывать, что данный список (см. В.3.1) является базовым и включает микроорганизмы-деструкторы, которые наиболее часто встречаются на поврежденных материалах на территории Российской Федерации. Данный список может корректироваться для отдельных регионов, так как в разных климатических условиях может меняться состав микроорганизмов, проявляющих деструктивную активность в отношении материалов и конструкций. С учетом особенностей региона допускается введение в список В.3 дополнительных видов микробиодеструкторов, которые используются в испытаниях материалов на биостойкость.

В.2 Подготовка образцов

В.2.1 Готовые изделия

Образцы материала отбирают из разных мест готового изделия. Размеры образца не должны превышать внутренние размеры стандартной чашки Петри (диаметр 90 мм), толщина образца не должна превышать 0,7 глубины чашки (1 см).

Каждый образец очищается от загрязнений, протирается тампоном или кистью, смоченными в этиловом спирте. Расход спирта 0,05-0,1 л/м ². Если образцы не стойкие к спирту, их очищают дистиллированной водой, нагретой до (50  10) °С. Затем образцы помещают в стерильные чашки Петри.

В.2.2 Сухие строительные смеси

Сухие строительные смеси затворяют дистиллированной водой, если иное не предусмотрено в технических условиях для данной смеси. Раствор заливают в стерильные чашки Петри. Толщина раствора должна быть от 0,4 до 0,7 см.

В.2.3 Лакокрасочные материалы

Лакокрасочные материалы наносят на дно стерильной чашки Петри сплошным слоем, не превышающим по толщине допустимое значение.

В.2.4 Сыпучие материалы

Сыпучие материалы равномерно засыпают в стерильные чашки Петри. Толщина слоя от 0,1 до 0,7 см.

В.2.5 При проведении подготовительных работ используют резиновые перчатки. Следует предусмотреть меры по предупреждению попадания посторонних веществ на образцы.

В.3 Проведение испытаний

В.3.1 Испытание на биостойкость материала проводят по следующим микробиодеструкторам:

а) грибы:

1) Aspergillus niger*;

2) Aspergillus terreus*;

3) Aspergillus versicolor;

4) Alternaria alternata;

5) Aurebasidium pullulans;

6) Cladosporium cladosporioides;

7) Cladosporium sphaerospermum;

8) Mucor racemosus;

9) Penicillium ochro-chloron*;

10) Penicillium funiculosum*;

11) Paecilomyces variotii*;

12) Scopulariopsis brevicaulis*;

13) Trichoderma viride*;

б) бактерии:

1) Streptomyces sp.;

2) Nitrosomonas sp.;

3) Thiobacillus ferrooxidans;

4) Thiobacillus thioparus;

5) Pseudomonas fluorescens;

6) Gallionella ferruginea;

7) Bacillus subtilis;

8) Desulfovibrio desulfuricans.

Примечание - Знак "*" означает, что виды включены в ГОСТ 9.048.

В.3.2 Испытания проводят на образцах, не подвергавшихся климатическим испытаниям.

В.3.3 Каждый образец материала тестируют с каждым указанным в В.3.1 биодеструктором не менее чем в трехкратной повторности.

В.3.4 Тестирование проводят путем инокуляции (искусственным заражением) испытуемых образцов микроорганизмом-деструктуром (тест-объектом) или инкубацией (выдерживанием) образцов в культуре тест-объекта. Одновременно осуществляется посев тех же видов микроорганизмов на контрольные питательные среды (тест-контроль).

В.3.5 Испытания с тест-объектами грибов

В.3.5.1 При проведении испытаний используют аппаратуру, материалы и реактивы согласно ГОСТ 9.048.

В.3.5.2 Питательные среды для грибов готовят согласно Г.1 и приложению 3 ГОСТ 9.048.

В.3.5.3 Суспензии спор грибов в дистиллированной воде готовят непосредственно перед испытанием. Концентрации суспензий определяют с использованием камеры Горяева. Для проведения испытаний применяют суспензии, концентрации которых находятся в пределах 10 ⁵-10 ⁶ спор грибов на 1 мл суспензии.

В.3.5.4 В соответствии с ГОСТ 9.048 поверхность образцов заражают водной суспензией спор грибов равномерным опрыскиванием или нанесением капель, не допуская их слияния. Зараженные образцы подсушивают в боксе при температуре (25  1) °С и относительной влажности воздуха от 70 % до 90 % до высыхания капель, но не более 60 мин.

В.3.5.5 Чашки Петри с образцами, зараженными спорами грибов, помещают в камеру или эксикатор, на дно которого налита дистиллированная вода (для создания высокой влажности воздушной среды, необходимой для развития грибов). Расстояние между стенками камеры или эксикатора до чашек Петри должно быть не менее 50 мм. Камеру или эксикатор закрывают. Контрольные чашки Петри с питательной средой (среда Чапека) помещают в аналогичные условия.

В.3.5.6 Испытания с грибами-деструкторами проводят при температуре (29  2) °С и относительной влажности воздуха более 90 %. Продолжительность испытаний составляет 28 сут. За начало испытаний принимают время получения заданного режима. В камере не допускается конденсация влаги, принудительная вентиляция и воздействие прямого естественного или искусственного освещения. В процессе испытания каждые 7 сут крышки эксикаторов приоткрывают на 3 мин для доступа воздуха.

В.3.5.7 Контрольные чашки Петри осматривают через 5 сут. Если на питательной среде не наблюдается развитие микроорганизмов, то они считаются нежизнеспособными. Испытания проводят заново. При этом используют ту же, но жизнеспособную культуру тест-объекта.

В.3.5.8 По завершении испытания образцы извлекают из камеры или эксикатора и осматривают невооруженным глазом (освещенность 200-300 лк), фотографируют, затем анализируют под бинокулярной лупой и микроскопом и оценивают биостойкость каждого образца по интенсивности развития микроорганизмов-деструкторов. Оценку степени биостойкости каждого образца проводят по таблице В.1.

В.3.6 Испытания с бактериальными тест-объектами

В.3.6.1 В зависимости от физиологических особенностей используемых бактериальных тест-объектов испытание проводят или инокуляцией (заражением), как и грибными тест-объектами, или, в случае анаэробов, погружением материала в культуру тест-объекта.

В.3.6.2 Для инокуляции образца опрыскиванием бактериальные штаммы выращивают на соответствующих жидких или твердых питательных средах при оптимальной температуре до получения максимального содержания (начало стационарной фазы роста). Перед опрыскиванием готовят исходные суспензии на стерильной воде с концентрацией кл - кл в 1 мл суспензии. После опрыскивания культивирование проводят по Г.2.

В.3.6.3 Для испытаний методом погружения образцы помещают в сосуды с молодыми, свежезасеянными культурами бактериальных тест-объектов и инкубируют при оптимальных условиях 28 сут.

В.3.6.4 По завершении испытания образцы извлекают из камеры, эксикатора или бактериальной культуры, осматривают невооруженным глазом (освещенность 200-300 лк), фотографируют, затем анализируют под бинокулярной лупой и микроскопом, после чего оценивают биостойкость каждого образца по интенсивности развития микроорганизмов-деструкторов. Оценку степени биостойкости каждого образца проводят по таблице В.1.

Таблица В.1 - Оценка степени биостойкости образцов испытуемых материалов для каждого тест-объекта

Характеристика балла	Балл
Под микроскопом прорастания спор, конидий грибов и бактерий не обнаружено	0
Под микроскопом видны проросшие споры и незначительно развитый мицелий. Под микроскопом видны единичные колонии бактерий	1
Под микроскопом виден развитый мицелий, возможно спороношение. Под микроскопом видны немногочисленные колонии бактерий	2
Невооруженным глазом мицелий и (или) спороношение едва видны, но отчетливо видны под микроскопом. Под микроскопом видны многочисленные колонии бактерий	3
Невооруженным глазом отчетливо видно развитие грибов, покрывающих менее 25 % испытуемой поверхности. То же, для бактерий	4
Невооруженным глазом отчетливо видно развитие грибов, покрывающих более 25 % испытуемой поверхности. То же, для бактерий	5

В.4 Обработка результатов

В.4.1 По каждому тест-объекту определяют средний балл: суммируют баллы в каждой повторности, разделяют на количество повторностей и округляют до целого значения.

В.4.2 Заключение о биостойкости строительного материала делают по максимальному значению балла.

В.4.3 Если известны другие микроорганизмы, проявляющие специфичную агрессивность по отношению к исследуемому материалу в обычных условиях, их необходимо включить в перечень тест-объектов.

В.4.4 Если испытуемый строительный материал предназначен для использования в специфичных условиях, следует предварительно выяснить, какие агрессивные биодеструкторы наиболее часто встречаются в этих условиях, и использовать их в качестве дополнительных.

В.4.5 Результаты испытания заносят в протокол. Протокол оформляют следующим образом.

                                Протокол

                  испытания материала на биостойкость

     Наименование материала _____________________________________________

     Предприятие-изготовитель ___________________________________________

     Номер технических условий (ТУ) на материал _________________________

     Количество образцов материала ______________________________________

     Полное наименование  предприятия/организации,  проводившей испытание

_________________________________________________________________________

     Дата проведения испытания:

     Начало испытания ___________________________________________________

     Окончание испытания ________________________________________________

Ответственное лицо ___________________________   ________________________

                        инициалы, фамилия             личная подпись

М.П.

Наименование тест-культуры	Количество повторностей	Балл
ГРИБЫ
Aspergillus niger
Aspergillus terreus
Aspergillus versicolor
Alternaria alternata
Aurebasidium pullulans
Cladosporium cladosporioides
Cladosporium sphaerospermum
Mucor racemosus
Penicillium ochro-chloron
Penicillium funiculosum
Paecilomyces variotii
Scopulariopsis brevicaulis
Trichoderma viride
БАКТЕРИИ
Streptomyces sp.
Nitrosomonas sp.
Thiobacillus ferrooxidans Thiobacillus thioparus
Pseudomonas fluorescens
Gallionella ferruginea
Bacillus subtilis
Desulfovibrio desulfuricans

                  Заключение о биостойкости материала ___________________

В.5 Требования безопасности при проведении испытания должны соответствовать ГОСТ 9.048-89 (раздел 5)

В.6 Стерилизация и хранение посуды должны соответствовать ГОСТ 9.048-89 (приложение 2).

В.7 Стерилизация питательных сред должна соответствовать ГОСТ 9.048-89 (раздел 8, приложение 3).