Приложение С (обязательное). Биологические исследования

Приложение С
(обязательное)

Биологические исследования

С.1 Общая информация

Общие биологические исследования для медицинских изделий - см. в серии ИСО 10993. Производители должны проводить соответствующие исследования, чтобы продемонстрировать биологическую совместимость со всеми применимыми частями ИСО 10993.

С.2 Приготовление растворов для исследований

С.2.1 Исследование жидкости I (полярный экстрагент)

Заполняют дважды пустой пластиковый контейнер до номинальной вместимости водой для инъекций, встряхивают в течение примерно 1 мин, а затем опорожняют. После слива промывочной воды заполняют пустой контейнер достаточным количеством стерильного, не содержащего эндотоксинов раствора хлорида натрия ^* [(NaCl) = 9 г/дм ³ (г/л)], чтобы отношение внутренней поверхности пустого контейнера, выраженного в квадратных сантиметрах, до объема раствора хлорида натрия, выраженного в миллилитрах, составляло не менее 6:1. Затем контейнер сжимают так, чтобы оставшийся воздух вышел из него, после чего закрывают. Если контейнер упакован в дополнительный пакет, извлекают его не менее (60  12) мин в насыщенном паре под давлением при температуре (121  2) °С. Выполняют экстракцию необходимого количества контейнеров для получения как минимум 250 см ³ (мл) экстракта. Смешивают экстракты из отдельных контейнеров после их охлаждения. Обрабатывают в колбе таким же образом 250 см ³ (мл) стерильного, не содержащего эндотоксинов изотонического раствора хлорида натрия в качестве жидкости для сравнения (пустой образец).

------------------------------

^*_{См. [1].}

------------------------------

С.2.2 Исследование жидкости II (неполярный экстрагент)

Подготавливают исследуемую жидкость (экстракт) II таким же образом, как и испытываемую жидкость I в соответствии с С.2.1, но:

- высушивают пустые контейнеры после промывки водой для инъекций при температуре 50 °С в течение 1 ч или до тех пор, пока влажность больше не будет определяться визуальным осмотром;

- используют кунжутное масло для парентерального применения ^** или хлопковое масло ^*** в качестве экстракционного агента;

- используют кунжутное масло для парентерального применения ^** или хлопковое масло ^*** в качестве сравнительной жидкости в соответствии с используемыми экстракционными агентами;

------------------------------

^**_{См. [1] и [2].}

^***_{См. [2].}

------------------------------

- используют описанный неполярный экстрагент в конкретном биологическом тесте.

С.3 Исследование на непроницаемость для микроорганизмов

Заполняют пустые контейнеры до их номинальной вместимости в стерильных условиях питательной средой для культур, например, казеиново-соевую пептонную муку пептонного мясного бульона (CaSo). Погружают контейнеры или их соответствующие части в суспензию [приблизительно 10 ⁶ КОЕ/см ³ (КОЕ/мл)] заражающего микроорганизма (например, Bacillus atropheus, NCTC 10073) как минимум на 30 мин. Вынимают контейнеры из суспензии и промывают стерильной водой. Инкубируют контейнеры в течение по крайней мере семи дней при температуре, подходящей для заражающего организма (например, 37 °С для Bacillus atropheus).

Контейнер, подготовленный таким же образом, содержимое которого инокулируют 1 см ³ (мл) культуры контрольного штамма, служит в качестве изделия для положительного контроля, или подготавливают образец с положительным контролем, используя один контейнер, заполненный питательной средой. Это может быть достигнуто путем прокалывания конкретной области контейнера.

Изучают содержимое на предмет роста микробов. Положительный контроль должен быть мутным. Испытуемые изделия не должны быть мутными.

С.4 Исследование на бактериальные эндотоксины

Проводят исследования на бактериальные эндотоксины согласно соответствующей фармакопее.

С.5 Исследование на цитотоксичность

Проводят исследование на цитотоксичность в соответствии с ИСО 10993-5.

С.6 Исследование на гемолиз

С.6.1 Общая информация

См. также ИСО 10993-4.

С.6.2 Приготовление суспензии эритроцитов

Разводят одну часть объема свежезаготовленной крови человека, которая была антикоагулирована в соответствии с национальной фармакопеей, пятью объемными частями стерильного раствора хлорида натрия [(NaCl) = 9 г/дм ³ (г/л)] и центрифугируют в течение 5 мин в центрифуге от 1500 до 2000 g. Аспирируют раствор супернатанта и повторяют обработку эритроцитов в тех же условиях и с тем же объемом раствора хлорида натрия.

Полученные таким образом эритроциты разбавляют стерильным раствором хлорида натрия в соотношении 1:9 [(NaCl) = 9 г/дм ³ (г/л)]. Данную суспензию можно использовать не более 6 ч с учетом хранения при температуре (23  2)°С.

С.6.3 Процедура исследования (методика)

Выпаривают 125 см ³ (мл) исследуемой жидкости, приготовленной в соответствии с А.3, при температуре 100 °С. Растворяют остаток после выпаривания в 5 см ³ (мл) стерильного раствора хлорида натрия [(NaCl) = 9 г/дм ³ (г/л)], смешивают с 1 см ³ (мл) суспензии эритроцитов и выдерживают в течение 20 мин при температуре (37  1) °С. Затем центрифугируют смесь в течение 5 мин при 1500-2000 g.

Готовят контрольный раствор одновременно в тех же условиях, но без добавления выпаренного остатка исследуемого раствора.

Измеряют поглощение исследуемого раствора по сравнению с контрольным раствором при 540 нм в кювете с внутренним световым путем 1 см. Поглощающая способность исследуемого раствора не должна отличаться от поглощающей способности контрольного раствора более чем на 10 %.

Летучие компоненты в исследуемом растворе не могут быть обнаружены описанной методикой. Однако концентрация исследуемого раствора должна приводить к более высокой чувствительности методики.

С.7 Методы биологических исследований

Методы биологических исследований приведены в таблице С.1.

ИСО 10993-1 следует рассматривать как руководство при оценке биологической безопасности.

Таблица С.1 - Биологические методы исследований

Ссылка	Биологическое исследование	Метод исследования, рекомендуемый для использования
С.7.1	Взаимодействие с кровью	ИСО 10993-4 а
С.7.2	Цитотоксичность клеточной культуры	ИСО 10993-5 Фармакопея США, биологические тесты на реактивность в лабораторных условиях <87>
С.7.3	Гемолиз	ИСО 10993-4 Европейская фармакопея (глава 3.2.3)
С.7.4	Системная инъекция (острая токсичность)	ИСО 10993-11 Фармакопея США, тесты биологической реактивности в естественных условиях <88>
С.7.5	Аллергены	ИСО 10993-10
С.7.6	Внутрикожная инъекция (раздражение)	ИСО 10993-10 Фармакопея США, тесты биологической реактивности в естественных условиях <88>
С.7.7	Тестирование на пирогены	Европейская фармакопея (глава 2.6.8) Фармакопея США (общие тесты и анализ, <151>) Японская фармакопея (глава 4.04)
а Предлагаемый выбор теста на взаимодействие с кровью: уровень 1 - непрямое направление кровотока; уровень 2 - кровообращение.