Приложение D (справочное). Подготовка образца для определения бактериальных эндотоксинов и механических включений

Приложение D
(справочное)

Подготовка образца для определения бактериальных эндотоксинов и механических включений

D.1 Бактериальные эндотоксины

D.1.1 Общие положения

Подготовка образцов для определения эндотоксинов представлена в [37], [21], [23], [38] и [39], [25].

D.1.2 Материалы и оборудование

D.1.2.1 Стерилизованные шприцы

Шприцы, стерилизованные оксидом этилена или влажным паром в автоклаве, используют от 3 до 10 шприцев.

D.1.2.2 Уплотнители поршня

Уплотнители поршня апирогенные (без бактериальных эндотоксинов) или с максимально допустимым уровнем бактериальных эндотоксинов, подтвержденным сертификатом поставщика.

D.1.2.3 Вода для инъекций апирогенная или реагент для теста с лизатом амебоцитов мечехвоста (Лал-вода), используемые в качестве экстрагента, с температурой (37  1) °С или не ниже температуры окружающей среды.

D.1.2.4 Встряхиватель (шейкер).

D.1.2.5 Контейнер апирогенный.

D.1.3 Проведение испытания

D.1.3.1 Апирогенный контейнер следует защищать от контаминации, источником которой является рабочая среда, до завершения испытаний, поэтому испытания проводят в чистом помещении по ГОСТ Р ИСО 14644-1-2017 (раздел 5).

D.1.3.2 Заполняют шприцы экстрагентом до номинального объема шприца.

D.1.3.3 Закрывают шприцы поршнем с уплотнителем.

D.1.3.4 Выдерживают наполненные и закрытые шприцы не менее 1 ч при температуре окружающей среды.

D.1.3.5 Затем энергично встряхивают шприцы в течение 10 мин на горизонтальном встряхивателе (или аналогичном устройстве).

D.1.3.6 Переносят полученный экстракт в апирогенный контейнер, вдавливая поршень и опорожняя шприц через передний конец (наконечник "Луер" с несъемной иглой).

D.1.3.7 Определяют значение единиц эндотоксинов ЕЭ/мл (EU/мл) в экстракте с использованием метода, аналогичного приведенному в [23] или [25], включая образцы "положительного" и "отрицательного" контроля.

Предельное значение содержания бактериальных эндотоксинов в экстракте вычисляют по формуле (см. [21], [25])

,

(D.1)

где K - предельное значение единиц эндотоксинов в одном шприце;

N - число испытанных шприцев;

V - общий объем экстракта.

Примечание - Следует убедиться, что чувствительность используемого реагента является достаточно высокой для надлежащего обнаружения предельно допустимого значения содержания эндотоксинов в объединенном экстракте.

Пример - Для заданного номинального объема 1 мл и предельного значения эндотоксина менее 0,25 ЕЭ/мл при чувствительности реагента 0,02 ЕЭ/мл пороговое значение уровня "тревоги" (для 10 испытуемых шприцев) будет составлять 0,20 ЕЭ/мл, являющееся значением менее 0,25 ЕЭ/мл.

D.2 Механические включения

D.2.1 Основные положения

Подготовка образца для определения механических включений основана на фармакопеях (см. [28] и [26] или [27]).

D.2.2 Материалы и оборудование

D.2.2.1 Стерилизованные шприцы (то есть стерилизованные оксидом этилена или паром), количество в соответствии с требованиями.

D.2.2.2 Уплотнения поршня и шток поршня, количество в соответствии с требованиями.

D.2.2.3 Вода для инъекций или очищенная вода любой фармакопейной категории.

D.2.2.4 Контейнер (лабораторная посуда).

D.2.3 Проведение испытания

D.2.3.1 Контейнер следует защищать от контаминации, источником которой является рабочая среда, до завершения испытаний, поэтому испытания проводят в чистом помещении по ГОСТ Р ИСО 14644-1-2017 (раздел 5).

D.2.3.2 Воду, не содержащую механических включений (частиц), получают путем фильтрования воды для инъекций или воды очищенной любой фармакопейной категории через фильтр с размером пор от 0,2 мкм до 0,8 мкм.

D.2.3.3 Ополаскивают все используемое в испытании оборудование (например, лабораторные колбы, стаканы, дозирующие системы) водой, не содержащей частиц.

D.2.3.4 Помещают не менее 30 мл воды, не содержащей механических включений, в чистый контейнер и оставляют не менее чем на 2 мин для удаления пузырьков воздуха.

D.2.3.5 Определяют содержание частиц в приготовленной воде, однако результаты первого измерения не учитывают, поскольку его используют для очистки измерительной системы.

D.2.3.6 Допустимые значения для воды, не содержащей частиц, при исследовании счетно-фотометрическим методом (на основе принципа светоблокировки) составляют:

- 10 частиц размером не менее 10 мкм и

- 2 частицы размером не менее 25 мкм.

Если содержание частиц находится в указанных пределах, то продолжают подготовку образца.

Если содержание частиц превышает установленные значения, повторяют фильтрацию и измерение до тех пор, пока вода, не содержащая частиц, не станет соответствовать установленным требования (см. D.2.3.2-D.2.3.5).

D.2.3.7 Заполняют шприцы номинальным объемом воды, не содержащей частиц, и закрывают чистыми уплотнителями поршня.

D.2.3.8 Переворачивают шприцы 20 раз.

Примечание - Может потребоваться более энергичное перемешивание раствора для надлежащего суспендирования частиц.

D.2.3.9 Снимают колпачок наконечника/защитный колпачок иглы и переносят содержимое шприцев в чистый контейнер (получают испытуемый образец), вдавив до упора шток поршня.

D.2.3.10 Позволяют раствору отстояться не менее 2 мин для удаления пузырьков воздуха из образца.

D.2.3.11 Определяют содержание механических включений в испытуемом образце (в пересчете на один шприц), но результаты первого измерения не учитывают, так как оно используется только для очистки измерительной системы.

Предельные значения содержания невидимых механических включений в испытуемом образце в пересчете на один шприц при определении счетно-фотометрическим методом составляют:

- 600 частиц размером 10 мкм и более и

- 60 частиц размером 25 мкм и более.

Примечание - Для выполнения четырех последовательных испытаний с исследуемой пробой объемом 5 мл требуется объединенный исследуемый образец объемом не менее 25 мл. Результаты первого испытания всегда отбрасывают. Среднее значение вычисляют по результатам трех последующих испытаний. В зависимости от номинального объема шприца на проведение испытаний требуется следующее количество шприцев:

- 25 шприцев объемом 1 мл;

- 13 шприцев объемом 2 мл;

- 12 шприцев объемом 2,25 мл;

- 9 шприцев объемом 3 мл;

- 5 шприцев объемом 5 мл.

Для предотвращения попадания пузырьков воздуха в измерительное устройство рекомендуется в объединенный испытуемый образец прибавить дополнительно 5 мл воды, не содержащей механических включений (суммарный объем образца составит 30 мл).

В зависимости от размера серии шприцев может потребоваться несколько объединенных образцов.

Число частиц в каждой емкости с образцом вычисляют по формуле

,

(D.2)

где Р - среднее количество частиц, полученных в одном испытании;

V _t - общий (суммарный) объем образца, мл;

V _a - номинальный объем испытуемого образца, мл;

n - число шприцев, номинального объема V _a, использованных для получения объединенного испытуемого образца при проведении испытания.