Приложение 5. Способ отбора колоний вибрионов с помощью стереоскопического микроскопа в косо проходящем свете

Приложение 5
к МУК 4.2.3745-22

Способ отбора колоний вибрионов с помощью стереоскопического микроскопа в косо проходящем свете

1. При просмотре колоний различных микробов под малым увеличением микроскопа или лупы при освещении их пучком света, косо падающим на поверхность агара, колонии приобретают способность светиться и кажутся окрашенными.

К стереоскопическому микроскопу (МБС - микроскоп бинокулярный, стереоскопический) приспосабливают устройство для получения узкого пучка света и зеркало от микроскопа на подвижном шарнире для освещения чашки снизу под углом 45-50°.

Чашки с посевами просматривают после 12-18 ч инкубации. При величине угла падения луча света к поверхности агара в 40-50° колонии вибрионов по своей окраске заметно отличаются от других микроорганизмов.

Цвет колоний, выросших на ЩА, при косом освещении указан в табл. 1 прилож. 5.

Таблица 1

Цвет колоний, выросших на ЩА, при косом освещении

Микроорганизмы	Цвет колонии
Холерные вибрионы	Преобладает серо-голубой с оттенком зеленовато-серым, синевато-зеленым, реже - зеленый с верхним краем красно-бурого или коричневого оттенка
Сальмонеллы	Розовый оттенок
Шигеллы	Розовый с фиолетовым оттенком
Кишечная палочка	Ярко-красный
Протей	Красный с фиолетовым оттенком

2. Приспособления для просмотра колоний в косо проходящем свете.

Столик стереоскопического микроскопа заменяют специальным приспособлением для освещения чашки снизу под углом 45-50°. Источником света служит осветитель от микроскопа, на который надевают кожух с отверстием диаметром 5 мм против спирали лампочки для получения узкого пучка света. Узкий пучок света направляют в центр вогнутого зеркала, которое перемещается на подвижном шарнире, поворотом винта в зависимости от необходимости угла падения света. Угол вычисляют по соотношению расстояния от зеркала до чашки, которое меняется произвольно, и расстояния от чашки до поверхности стола, остающегося неизменным.

Для удобства исследования осветитель и зеркало можно вмонтировать в ящик со стеклянной крышкой, на которую помещают чашку с посевом. Это дает возможность быстро находить нужный угол падения света, передвигая зеркало поворотом винта по вмонтированной шкале.

3. Приспособление, смонтированное из основных узлов стереоскопического микроскопа и прибора для счета колоний.

Из раструба верхней крышки прибора для подсчета колоний удалить оба стекла вместе с упорным кольцом и снять верхнюю крышку. Из скобы передней панели вывинтить вертикальную ось, после чего убрать диск со светофильтрами. Освободить два винта, прикрепляющие патрон лампочки освещения к кронштейну на задней панели. В крышку снизу вставить вертикальную штангу от узла лупы с таким расчетом, чтобы в рабочем положении прибора муфта с прижимным винтом оказалась на дне под кронштейном импульсного счетчика. В муфту зажать держатель с угловыми губками (из комплекта лабораторного штатива), предварительно укороченный до 110 мм. Держателем закрепить патрон с лампочкой в вертикальном положении. Крышку фиксировать винтами на своем обычном месте.

Штатив микроскопа вместе с бинокулярной насадкой отсоединить от столика и установить непосредственно на корпус прибора для счета колоний так, чтобы 3 сферических ножки основания штатива охватили раструб крышки прибора, а окно основания было обращено к наблюдателю. Подлежащие к просмотру чашки с посевами устанавливают над открытым окном. Нужную освещенность и угол падения света находят путем изменения положения лампы, которое достигается поворотом штанги, после чего последнюю фиксируют цанговым зажимом.