Приложение В (обязательное). Определение концентрации дрожжевых клеток в нефильтрованном пиве

Приложение В
(обязательное)

Определение концентрации
дрожжевых клеток в нефильтрованном пиве

Сущность метода заключается в определении концентрации дрожжевых клеток в нефильтрованном пиве под микроскопом в счетной камере Горяева.

В.1 Аппаратура, материалы, реактивы

Микроскоп биологический МБИ, МБР. Допускается применение иных микроскопов с метрологическими характеристиками не ниже приведенных выше.

Осветитель к микроскопу ОИ-19.

Стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672.

Камера для счета форменных элементов крови и клеточных элементов спинномозговой жидкости (камера Горяева) или другая по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.

Колба П-1-250-29/32 ТС или других размеров по ГОСТ 25336.

Колба П-2-250-34 ТХС или других размеров по ГОСТ 25336.

Пробирка П1-16-150 ХС или других размеров по ГОСТ 25336.

Пробирка П2-10-90 ХС или других размеров по ГОСТ 25336.

Пипетки градуированные по ГОСТ 29227.

Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья по ГОСТ 5962.

Вода питьевая по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.

В.2 Подготовка к испытанию

Перед проведением подсчета клеток счетную камеру Горяева и покровное стекло моют и обезжиривают. Для обезжиривания стекло обрабатывают хромовой смесью, а затем ополаскивают водой. Чистые покровные стекла хранят в банке со спиртом. С помощью микроскопа ориентировочно определяют количество дрожжевых клеток в анализируемой пробе нефильтрованного пива. Если в большом квадрате сетки камеры Горяева количество дрожжевых клеток превышает 20, то пробу разводят в соответствии с ГОСТ 26669 питьевой водой при температуре 20 °C.

В.3 Проведение испытания

Отобранную пробу перед микроскопированием встряхивают. Подсчет дрожжевых клеток проводят под микроскопом в камере Горяева. Каплю нефильтрованного пива наносят на поверхность счетной камеры и покрывают шлифованным покровным стеклом. Подсчет клеток начинают через 3 - 5 мин после заполнения камеры, для того чтобы клетки осели и были видны под микроскопом в одной плоскости. Подсчитывают клетки в 10 больших квадратах сетки камеры, перемещая их по диагонали сетки. Учитывают все клетки, лежащие в квадрате сетки, а также пересекающие верхнюю и правую стороны квадрата.

В.4 Обработка результатов

Концентрацию дрожжевых клеток в нефильтрованном пиве M, млн/см ³, вычисляют по формуле

,

(В.1)

где a - среднее количество (число) дрожжевых клеток в одном квадрате;

1000 - коэффициент пересчета объема (1000 мм ³ = 1 см ³);

S - площадь квадрата сетки (площадь большого квадрата сетки 1/25 мм ², площадь малого квадрата сетки 1/400 мм ²), мм ²;

h - глубина камеры (1/10 мм);

П - кратность разведения нефильтрованного пива.

Вычисление проводят до второго десятичного знака. За результат испытаний принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных измерений и выражают целым числом с двумя десятичными знаками с последующим округлением до одного десятичного знака. Расхождение между результатами двух измерений, выполненных в разных лабораториях для одной и той же партии, не должно превышать 7 %. Результат выражают в миллионах клеток в сантиметре кубическом.

Примечание - Допускается определение концентрации дрожжевых клеток в нефильтрованном пиве при помощи счетчика дрожжевых клеток по другим методикам, утвержденным в установленном порядке.