Приложение В (справочное). Приготовление контрольных культур

Приложение В
(справочное)

Приготовление контрольных культур

В.1 Стоковые культуры

Исходные культуры готовят из лиофилизированных культур, полученных из признанных коллекций культур. Культуры восстанавливаются в соответствии с процедурами, определенными коллекцией культур, и поддерживаются таким образом, чтобы свести к минимуму селекцию генетических вариантов. Для одного и того же микроорганизма из разных коллекций культур ниже приведены альтернативные номера (если они имеются). Ниже приведены культуры, необходимые для целей настоящего стандарта:

Staphylococcus aureus	WDCM a 00131; АТСС b 29213; NCTC c 12973; CIP d 103429; DSM e 2569; CCUG f 15915; CECT g 794
Staphylococcus aureus	WDCM a 00034; АТСС b 25923; NCTC c 12981; CIP d 76.25; DSM e 1104; CCUG f 17621; CECT g 435
Staphylococcus aureus	WDCM a 00211; ATCC b 43300
или
Staphylococcus aureus	WDCM a 00212; NCTC c 12493
Escherichia coli	WDCM a 00013; ATCC b 25922; NCTC c 12241; CIP d 76.24; DSM e 1103; CCUG f 17620; CECT g 434
Pseudomonas aeruginosa	WDCM a 00025; ATCC b 27853; NCTC c 12903; CIP d 76.110; DSM e 1117; CCUG f 17619; CECT g 108
Enterococcus faecalis	WDCM a 00087; ATCC b 29212; NCTC c 12697; CIP d 103214; DSM e 2570; CCUG f 9997; CECT g 795
или
Enterococcus faecalis	WDCM a 00210; ATCC b 33186
a WDCM - Всемирный центр данных микроорганизмов, www.wdcm.org. b АТСС - торговая марка продукции, поставляемой Американской коллекцией типовых культур, www.atcc.org. Эта информация представлена для удобства пользователей настоящим стандартом и не является подтверждением торгового названия со стороны ИСО. Как указано ниже, могут быть использованы эквивалентные продукты. с NCTC - торговая марка продукции, поставляемой Национальной коллекцией типовых культур, коллекцией культур Службы общественного здравоохранения Англии, www.hpacultures.org.uk. Эта информация представлена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является подтверждением торгового названия со стороны ИСО. Как указано ниже, могут быть использованы эквивалентные продукты. d CIP - Коллекция института Пастера, www.pasteur.fr. е DSMZ - Немецкая коллекция штаммов микроорганизмов и клеточных культур, www.dsmz.de. f CCUG - Коллекция культур университета Гетеборга, www.ccug.se. g СЕСТ - Испанская коллекция типовых культур, www.cect.org.

B.1.1 Приготовление начальной стоковой культуры

Каждый контрольный микроорганизм, перечисленный в разделе В.1, инокулируют на одну или несколько чашек с неселективным питательным агаром (в зависимости от количества замороженных пробирок, которое должно быть приготовлено). Посев на каждую чашку проводят стерильным тампоном или петлей штрихобразными движениями для получения изолированных колоний. Инкубируют чашки в течение 18-24 ч в соответствии с ИСО 20776-1 при температуре от 34 °С до 37 °С.

В.1.2 Приготовление замороженной стоковой культуры

После инкубации проверяют чистоту, собирают весь рост с каждого набора чашек и эмульгируют его в бульоне с гидролизатом соевого казеина [триптиказо-соевый бульон (TSB)], содержащем 15 % массы к объему глицерина для приготовления однородно плотной суспензии. Хранят флаконы при температуре минус 60 °С или ниже. При использовании этого метода культуры должны быть жизнеспособными в течение как минимум одного года. Могут быть использованы другие методы приготовления исходных культур, если они обеспечивают достаточную жизнеспособность и стабильность. Периодически обновляют исходные культуры из свежих лиофилизированных культур, полученных из признанных коллекций культур.

Примечание - Чтобы приготовить TSB с глицерином, добавляют рекомендованное производителем количество порошка TSB или гранулы для приготовления одного литра, затем добавляют 500 см ³ (мл) деионизированной воды и 150 см ³ (мл) глицерина. Доводят общий объем до 1 дм ³ (л) деионизированной водой, нагревают до полного растворения, хорошо перемешивают и стерилизуют его при температуре 121 °С в течение 15 мин. Разливают суспензию в маленькие стерильные флаконы.

В.1.3 Приготовление тестового инокулюма

Приготовление тестового инокулюма приведено в 4.3.