Приложение С (справочное). Условия хроматографирования для метода постколоночной реакции

Приложение С
(справочное)

Условия хроматографирования для метода постколоночной реакции

С.1 Общие положения

Поскольку инструментальное оснащение лабораторий может различаться, предоставление каких-либо конкретных указаний по анализу не представляется возможным. Следующие рабочие характеристики были успешно опробованы и применялись.

Используемый метод должен быть проверен путем определения степени извлечения (см. 7.5), и наблюдаемые результаты должны находиться в диапазоне, указанном в приложении А.

С.2 Хроматографическая система и необходимое оборудование

На рисунке С.1 представлен метод ионной хроматографии с постколоночной реакцией.

1 - подвижная фаза; 2 - насос для жидкостной хроматографии (LC); 3 - петлевой дозатор; 4 - аналитическая колонка; 5 - тройник нулевого, мертвого, объема; 6 - постколоночный реактив; 7 - насос для дозирования постколоночного реактива; 8 - реакционная катушка; 9 - детектор (MWD или DAD)

Рисунок С.1 - Схематическое представление системы ионной хроматографии с постколоночной реакцией

Анализ хрома (VI) проводят с использованием аналитической колонки, заполненной анионообменной неподвижной фазой.

Постколоночный реактив, содержащий 1,5-дифенилкарбазид, добавляют между колонкой и реакционной катушкой с помощью тройника нулевого мертвого объема.

Реакционная катушка обеспечивает соответствующее смешение элюента из колонки и реактива после колонки, а хром (VI) в растворе окисляет 1,5-дифенилкарбазид до 1,5-дифенилкарбазона. Это дает красный/фиолетовый комплекс с хромом, который может быть количественно определен при 540 нм с использованием многоволнового детектора (MWD) или детектора с фотодиодной матрицей (DAD).

С.2.1 Два подходящих насоса для жидкостной хроматографии (LC)

Один используется для подачи подвижной фазы в систему, другой используется для подачи реактива после колонки перед реакционной катушкой.

С.2.2 Автоматический дозатор или ручной кран-дозатор, оснащенный петлевым дозатором для ввода пробы.

С.2.3 Термостатированный отсек колонки.

С.2.4 Аналитическая колонка, заполненная анионообменной неподвижной фазой.

С.2.5 Тройник нулевого, мертвого, объема.

С.2.6 Подходящая реакционная катушка.

С.2.7 Детектор, MWD или DAD, с возможностью детектирования при 540 нм.

Примечание - Для обеспечения инертности системы применяется колонка и все капиллярные трубки (включая петлевой дозатор) в корпусе из полиэфирэфиркетона (PEEK).

Применение защитной колонки (предколонки) настоятельно рекомендуется для продления срока службы колонки. Применяется защитная колонка в корпусе из PEEK, заполненная частицами полистирола-дивинилбензола.

С.3 Примеры аналитических условий

С.3.1 Подвижная фаза и постколоночные реактивы

Все реактивы должны быть не ниже аналитической степени чистоты.

С.3.1.1 Сульфат аммония (NH ₄) ₂SO ₄ (CAS: 7783-20-2).

С.3.1.2 Гидроксид аммония NH ₄OH (CAS: 1336-21-6), представляющий собой 28 %-ный раствор NH ₃ в воде.

С.3.1.3 1,5-дифенилкарбазид C ₁₃H ₁₄N ₄O (CAS: 140-22-7).

С.3.1.4 Метанол СН ₃ОН (CAS: 67-56-1).

С.3.1.5 Серная кислота H ₂SO ₄ (CAS: 7664-93-9) концентрацией 98 %.

С.3.2 Приготовление подвижной фазы

Растворяют (33,0 0,1) г сульфата аммония (см. С.3.1.1) и 8,0 см ³ гидроксида аммония (см. С.3.1.2) в мерной колбе вместимостью 1000 см ³ и доводят до метки дистиллированной водой (см. 5.7).

С.3.3 Приготовление постколоночного реактива

В мерной колбе вместимостью 1000 см ³ растворяют 28 см ³ серной кислоты (см. С.3.1.5) примерно в 500 см ³ дистиллированной воды (см. 5.7) и дают раствору охладиться.

За это время растворяют (0,50 0,01) г 1,5-дифенилкарбазида (см. С.3.1.3) в 100 см ³ метанола (см. С.3.1.4).

После охлаждения раствора кислоты смешивают раствор дифенилкарбазида с раствором кислоты при постоянном перемешивании магнитной мешалкой и доводят до метки водой (см. 5.7).

С.3.4 Параметры оборудования

Аналитическая колонка: анионообменная колонка с алкилчетвертичным аммонием в качестве функциональной группы. Длина - 250 мм. Внутренний диаметр - 4 мм.

Защитная колонка длиной 35 мм и внутренним диаметром 4 мм.

Объем реакционной катушки - 750 мкл.

Вводимый объем - 100 мкл.

Скорость потока подвижной фазы - 1 см ³/мин.

Скорость потока постколоночного реактива - 0,33 см ³/мин.

Время записи хроматограммы - 10 мин.

С.4 Примеры хроматограмм

На рисунке С.2 приведена хроматограмма стандартного раствора концентрацией 5 мкг/л, а на рисунке С.3 приведена хроматограмма образца натуральной кожи концентрацией 3 мг/кг.

1 - хром (VI) - 4,608; X - мин; Y - мАU

Рисунок С.2 - Хроматограмма стандартного раствора концентрацией 5 мкг/л (соответствует первому уровню калибровочной кривой)

1 - хром (VI) - 4,707; X - мин; Y - мAU

Рисунок С.3 - Хроматограмма образца натуральной кожи концентрацией 3 мг/кг