Приложение Б (обязательное). Правила приготовления растворов для выделения, доращивания и подготовки вредных организмов к идентификации морфологическим методом

Приложение Б
(обязательное)

Правила приготовления растворов для выделения, доращивания и подготовки вредных организмов к идентификации морфологическим методом

Б.1 Средства измерений, оборудование, реактивы, посуда и материалы

При приготовлении растворов для выделения, доращивания и подготовки вредных организмов к идентификации морфологическим методом используют следующие средства измерений, оборудование, реактивы, посуду и материалы:

- весы высокого класса точности с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более 0,01 г;

- горелку спиртовую или столик нагревательный, или термостат твердотельный;

- шкаф вытяжной с принудительной вентиляцией;

- воду дистиллированную;

- глицерин, ч.;

- гуммиарабик сухой, ч.;

- желатин, ч.;

- калий марганцовокислый, ч.;

- калия гидроокись или натрия гидроокись, ч. д. а.;

- ксилол, ч. д. а. или Histo-Clear;

- купорос медный, х. ч.;

- натрия нитрат, ч.;

- натрия хлорид, ч.;

- спирт этиловый ректификованный;

- фенол, ч.;

- фуксин кислый, ч.;

- хлоралгидрат, ч.;

- банки стеклянные или пластиковые с плотными крышками вместимостью 0,25 и 0,50 дм ³;

- бюксы;

- воронку типа В-56;

- капельницы типа ПЭНП вместимостью 50 и 100 см ³;

- палочки стеклянные;

- стаканы химические стеклянные и пластиковые вместимостью от 50 до 1000 см ³;

- ступку фарфоровую с пестиком;

- цилиндры мерные вместимостью 50 и 100 см ³;

- чашу выпаривательную плоскодонную типа ЧВП-2-1000;

- бумагу индикаторную;

- сетку асбестовую;

- фильтры обеззоленные диаметром 90 мм;

- шпатели металлические и пластиковые.

Допускается применение других средств измерений и посуды с метрологическими характеристиками, оборудования и материалов с техническими характеристиками, а также реактивов по качеству не хуже указанных.

Б.2 Правила разведения этилового спирта

Для разведения этилового спирта используют дистиллированную воду с рН от 5,0 до 7,0. Уровень рН проверяют с помощью индикаторной бумаги. Если добавление воды не меняет окраску индикатора, то ее рН близок к заданному. Необходимые объемы дистиллированной воды и этилового спирта отмеряют до смешивания, добавление компонентов не рекомендуется.

Этиловый спирт и дистиллированную воду тщательно перемешивают. Разведенный спирт хранят в банках с завинчивающимися пробками с маркировкой с указанием его концентрации. Для проведения энтомологических исследований спирт разливают в капельницы, указывая на них концентрацию спирта.

Пропорции разведения спирта различной концентрации при температуре 20 °С (по Фертману) приведены в таблице Б.1.

Таблица Б.1

Концентрация разводимого этилового спирта (1000 см 3, %)	Необходимая концентрация этилового спирта после разведения, %
	90	85	80	75	70	65	60	55	50	45	40	35	30
95	64	133	209	295	391	501	629	779	957	1174	1443	1785	2239
90	-	65	138	218	310	414	535	677	847	1052	1306	1630	2061
85	-	-	68	144	231	329	443	578	738	932	1172	1478	1884
80	-	-	-	72	153	246	353	480	630	812	1039	1327	1709
75	-	-	-	-	76	163	264	382	523	694	906	1177	1535
70	-	-	-	-	-	81	175	285	417	577	774	1027	1360
65	-	-	-	-	-	-	88	190	311	460	644	878	1189
60	-	-	-	-	-	-	-	95	207	344	514	730	1017
55	-	-	-	-	-	-	-	-	103	229	384	583	845
50	-	-	-	-	-	-	-	-	-	114	255	436	674
45	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	127	290	505
40	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	144	335
35	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	167
Примечание - Цифра в месте пересечения вертикальной и горизонтальной строк показывает объем дистиллированной воды в см 3 при температуре 20 °С, который следует добавить к 1000 см 3 этилового спирта имеющейся концентрации, для разведения до необходимой концентрации. В качестве примера для получения 60 %-ного раствора этилового спирта из имеющегося 1000 см 3 90 %-ного раствора спирта необходимо к 1000 см 3 добавить 535 см 3 дистиллированной воды.

Б.3 Правила приготовления 1 %-ного раствора марганцовокислого калия

Марганцовокислый калий в количестве 10 г растворяют в 1 дм ³ дистиллированной воды и перемешивают.

Б.4 Правила приготовления 30 %-ного раствора хлорида натрия

Хлорид натрия в количестве 300 г растворяют в 700 см ³ дистиллированной воды и перемешивают.

Б.5 Правила приготовления 50 %-ного раствора нитрата натрия

Нитрат натрия в количестве 500 г растворяют в 500 см ³ дистиллированной воды и перемешивают.

Б.6 Правила приготовления насыщенного раствора нитрата натрия

Нитрат натрия в количестве 689,4 г растворяют в 310,6 см ³ дистиллированной воды и перемешивают.

Б.7 Правила приготовления насыщенного раствора хлорида натрия

Хлорид натрия в количестве 40 г растворяют в 100 см ³ дистиллированной воды, перемешивают и нагревают до кипения. Используют в охлажденном виде прозрачный раствор над осадком.

Б.8 Приготовление 10 %-ного раствора калия гидроокиси или натрия гидроокиси

Гидроокись калия или гидроокись натрия в количестве 10 г растворяют в 90 см ³ охлажденной дистиллированной воды и перемешивают.

Б.9 Приготовление жидкостей Хойера и Фора - Берлезе

Б.9.1 Состав жидкости Хойера  ^*

------------------------------

^*_{Допускается использование модифицированных вариантов жидкости Хойера и Фора - Берлезе при условии надлежащей валидации методики их применения.}

------------------------------

При приготовлении жидкости Хойера используют:

- глицерин - 20 см ³;

- гуммиарабик сухой - 50 г;

- воду дистиллированную - 50 см ³;

- хлоралгидрат - 200 г.

Б.9.2 Состав жидкости Фора - Берлезе  ^*

------------------------------

^*_{Допускается использование модифицированных вариантов жидкости Хойера и Фора - Берлезе при условии надлежащей валидации методики их применения.}

------------------------------

- глицерин - 20 см ³;

- гуммиарабик сухой - 30 г;

- воду дистиллированную - 50 см ³;

- хлоралгидрат - 200 г.

Б.9.3 Правила приготовления жидкостей Хойера и Фора - Берлезе

В плотно закрывающийся стеклянный сосуд вместимостью 500 см ³ наливают дистиллированную воду, добавляют гуммиарабик и помещают ее в термостат (или ставят на нагревательный столик) при температуре от 40 °С до 56 °С до полного растворения гуммиарабика (не менее 1 сут).

Затем добавляют хлоралгидрат и глицерин и выдерживают при температуре от 40 °С до 56 °С до полного растворения хлоралгидрата (1-2 сут).

Готовую смесь хранят в темном месте и в темной посуде. Для применения небольшую порцию отливают в небольшой, плотно закрывающийся сосуд с завинчивающейся крышкой.

Примечание - Работы проводят в вытяжном шкафу.

Б.10 Приготовление смеси глицерина и желатина

Желатин в количестве 40 г помещают в 210 см ³ дистиллированной воды на 2 ч. Затем добавляют 250 г глицерина и 5 см ³ расплавленного фенола. Смесь нагревают при постоянном перемешивании в течение 10-15 мин, пока она не станет однородной.

Смесь глицерина и желатина хранят в холодильнике при температуре от 0 °С до 5 °С и перед применением подогревают.

Б.11 Приготовление 50 %-ного раствора молочной кислоты

В мерную колбу вместимостью 200 см ³ наливают 60 см ³ дистиллированной воды и 100 см ³ молочной кислоты концентрацией 80 % и перемешивают.

Б.12 Приготовление смеси фенола и ксилола или фенола и Histo-Clear

Фенол в количестве 22 г растворяют в 100 см ³ ксилола и перемешивают. Ксилол может быть заменен на Histo-Clear.

Примечание - Работы проводят в вытяжном шкафу.

Б.13 Правила приготовления абсолютного этилового спирта

Б.13.1 Правила прокаливания медного купороса

Медный купорос (крупные кристаллы перед прокаливанием размельчают в фарфоровой ступке) прокаливают в фарфоровой чашке на асбестовой сетке над спиртовой горелкой, перемешивая стеклянной палочкой, пока синие кристаллы не приобретут белый цвет. При перекаливании кристаллы приобретают серый цвет и для обезвоживания спирта не подходят.

Прокаливание медного купороса допускается проводить также на нагревательном столике или в термостате при температуре от 60 °С до 70 °С. Для этого мелкоизмельченный медный купорос рассыпают тонким слоем на листе картона в течение трех недель (при ежедневном перемешивании), а при температуре 100 °С прокаливание проводят в фарфоровой чашке и завершают за 2 сут.

Прокаленный медный купорос хранят в стеклянном сосуде с притертой пробкой.

Прокаливание проводят с соблюдением правил техники безопасности: мелкоизмельченный медный купорос небольшими порциями прокаливают на малом огне через асбестовую сетку в фарфоровой чашке при постоянном помешивании фарфоровой или стеклянной лопаткой.

Примечание - Не допускается пользоваться металлическим шпателем или проводить прокаливание в металлической посуде.

Б.13.2 Приготовление абсолютного этилового спирта

Обезвоженный медный купорос насыпают на дно стеклянного сосуда слоем 0,5 см и наливают этиловый спирт так, чтобы слой спирта превышал толщину слоя медного купороса не больше чем в четыре-пять раз. Содержимое сосуда ежедневно взбалтывают в течение четырех-пяти дней, добиваясь посинения всей массы оседающего медного купороса. Обезвоживание лучше проводить последовательно в двух или трех сосудах с завинчивающимися или притертыми пробками. При этом в последнем сосуде медный купорос остается белым и почти безводным. Абсолютный спирт над ним может храниться в течение длительного периода времени.

Примечание - Медный купорос, бывший в употреблении, для повторного прокаливания непригоден.

Б.14 Приготовление кислого фуксина

Кислый фуксин в количестве 0,5 г растворяют в 100 см ³ дистиллированной воды и перемешивают.