Приложение N 5. Требования к лабораторной диагностике холеры (в соответствии с СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", МУК 4.2.3745-22 "Методы лабораторной диагностики холеры", МУ 3.1.1.2232-07 "Профилактика холеры. Организационные мероприятия. Оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий на случай возникновения очага холеры")

Приложение N 5
к приказу
от 01.06.2023 N 18/пр/857

Требования
к лабораторной диагностике холеры (в соответствии с СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", МУК 4.2.3745-22 "Методы лабораторной диагностики холеры", МУ 3.1.1.2232-07 "Профилактика холеры. Организационные мероприятия. Оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий на случай возникновения очага холеры")

1. В системе противохолерных мероприятий результаты бактериологического анализа определяют характер и объем профилактических и противоэпидемических мероприятий.

2. Исследования проводят с целью:

- выявления больных холерой и вибриононосителей;

- установления окончательного диагноза при вскрытии трупов лиц, умерших от заболевания с подозрением на холеру;

- обоснования выбора средств этиотропной терапии холеры;

- бактериологического контроля эффективности этиотропного лечения больных холерой и вибриононосителей;

- бактериологического контроля объектов окружающей среды, в том числе поверхностных водоемов;

- бактериологического контроля эффективности обеззараживания в очаге инфекции.

3. Отбор и доставка материала на исследование.

3.1. Материалом для бактериологического анализа могут служить:

- испражнения, рвотные массы, желчь, секционный материал (отрезки тонкого кишечника и желчный пузырь);

- предметы, загрязненные испражнениями (постельное и нательное белье и др.);

- питьевая вода и вода поверхностных водоемов, ил, гидробионты, сточные воды, содержимое выгребных туалетов;

- смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты и др.

3.2. Материал от больного (подозрительного на заболевание) немедленно после выявления и до начала лечения антибиотиками забирает персонал медицинских организаций (далее - МО), предварительно прошедший инструктаж по биологической безопасности (кратность проведения инструктажа - 1 раз в год) при заборе биоматериала для исследования на холеру. Такие же требования должен соблюдать персонал МО при осуществлении забора материала при проведении обследования людей на вибриононосительство. При регистрации эпидемического очага холеры создаются группы из персонала МО по отбору проб. Контингенты, подлежащие обследованию, определяют с учетом эпидемиологической обстановки.

3.3. Кратность взятия проб от больного холерой или с подозрением на холеру, вибриононосительством, контактировавшими с больным или вибриононосителем и других декретированных контингентов определяется в соответствии с главой XXV СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", от контингентов, подлежащих обследованию на холеру (скрининг) - в соответствии с приложением N 2 к настоящему приказу.

3.4. Ответственность за правильность отбора, хранения, транспортирования и своевременность доставки проб в микробиологическую лабораторию несет руководитель МО, где был выявлен больной и забран материал для исследования.

3.5. При отборе и транспортировании проб необходимо учитывать высокую чувствительность холерных вибрионов к дезинфицирующим средствам и кислотам, возможность антагонистического воздействия сопутствующей микрофлоры и предполагаемую концентрацию возбудителя в исследуемом материале. В материале от больных холерой с III - IV степенью обезвоживания концентрация возбудителя достигает 10(6) - 10(9) м.к./мл, а в испражнениях больных легкой формой и пролеченных антибиотиками реконвалесцентов и носителей количество холерных вибрионов обычно не превышает 10(2) - 10 м.к./г.

3.6. Для отбора проб используют стерильную посуду, не содержащую следов дезинфицирующих растворов. Стерилизацию посуды и других средств забора материала проводят автоклавированием или сухим жаром.

3.7. При наличии у больного диареи, материал забирают до начала этиотропной терапии: у больных тяжелой формой - в количестве 10 - 20 мл, а у больных легкой формой и при исследовании на вибрионосительство - 1 - 2 г испражнений.

3.8. Материал (нативный) для исследования должен быть доставлен не позже, чем через 2 ч. после его взятия. В случае удлинения сроков доставки используют транспортные среды. Наиболее эффективной транспортной средой является 1-процентная пептонная вода (pH 8,4 +-0,2). Материал для исследования вносят в транспортную среду из расчета 1 - 2 мл (или 1 - 2 г) на 5 - 6 мл среды.

3.9. При увеличении времени доставки материал от больных тяжелой формой направляют в лабораторию и нативным, и в транспортной среде, а от больных легкой формой и на вибриононосительство - в транспортной среде.

3.10. На флаконах (пробирках) с 1-процентной пептонной водой для отбора проб должна быть этикетка или надпись с указанием названия среды и даты ее приготовления.

3.11. Питательные среды во флаконах или пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками, рекомендуется хранить при температуре не выше 10,0 +-0,2 град. Цельсия. Возможно хранение и использование для отбора и транспортирования питательных сред в завальцованных флаконах.

4. Отбор проб от больных холерой, вибриононосителей, контактных с ними лиц и секционного материала.

4.1. Испражнения и рвотные массы в количестве 10 - 20 мл собирают в стерильную посуду (контейнеры для сбора проб клинического материала с герметично завинчивающимися крышками) стерильными ложками из индивидуального судна, на дно которого помещают меньший по размеру сосуд (лоток), удобный для обеззараживания кипячением.

4.2. Для взятия материала у больных с обильным водянистым стулом можно использовать резиновый катетер, один конец которого вводят в прямую кишку, а другой опускают в контейнер или флакон. Жидкие испражнения стекают в сосуд свободно или при легком массаже брюшной стенки.

4.3. Для взятия материала у контактных и лиц, подлежащих обследованию по эпидемиологическим показаниям, используют стерильный ректальный тампон, который вводят в прямую кишку на глубину 5 - 6 см, собирают им содержимое со стенок кишечника и опускают во флакон или пробирку с 1-процентной пептонной водой.

4.4. Стерильную ректальную петлю перед забором материала смачивают стерильным 0,9-процентным раствором натрия хлорида и вводят в прямую кишку на 5 - 6 см. Взятый материал переносят во флакон или пробирку с 1-процентной пептонной водой.

4.5. Желчь берут при дуоденальном зондировании в лечебном учреждении. Собирают две порции в отдельные пробирки или контейнеры: из желчного пузыря и желчных протоков (B и C). Материал доставляют нативным, без использования транспортных сред.

4.6. Для исследования секционного материала от умерших с подозрением на холеру (или от кишечных инфекций неустановленной этиологии) берут отрезки (длиной около 10 см) верхней, средней и нижней частей тонкой кишки, разрез производят между двойными лигатурами, предварительно наложенными на оба конца изымаемого участка кишечника. Желчный пузырь после перевязки протока извлекают целиком. Содержимое кишечника и желчь от трупа можно взять стерильным шприцем с толстой иглой в объеме до 10 мл. Взятые образцы органов трупа укладывают раздельно в стерильные банки (контейнеры).

4.7. Упаковку, маркировку образцов и оформление документации для транспортировки производят в соответствии с приложением N 8 к СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней" (принцип тройной упаковки).

Емкости с образцами биологического материала этикетируют, обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором, избегая его затекания внутрь, герметизируют парафинированной пленкой (парафилмом), помещают во вторичный контейнер, в котором находится адсорбирующий влагу материал (марля, вата) в количестве, достаточном для впитывания всей жидкости в случае повреждения первичного контейнера, и помещают в кейс для транспортирования проб. Для фиксации контейнеров в кейсе используют при необходимости воздушно-пузырьковую пленку или вставку-штатив. В одном кейсе допускается транспортировка образцов материала от разных пациентов предварительно дважды упакованных. Пробы перевозят на служебном транспорте с сопровождающим. Направления составляются в двух экземплярах, один экземпляр вкладывают в контейнер (кейс) с пробами, а второй доставляется отдельно от проб.

5. Обязательные требования к укладке для забора материала от больного с подозрением на холеру для медицинских организаций ^<*> установлены в приложении N 2 к МУ 3.1.1.2232-07 "Профилактика холеры. Организационные мероприятия. Оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий на случай возникновения очага холеры":

1.	Банки стерильные широкогорлые с крышками или притертыми пробками, емкостью не менее 100 мл	2 шт.
2.	Емкость эмалированная 10 л	1 шт.
3.	Клеенка медицинская подкладная	1 м
4.	Полиэтиленовые пакеты	5 шт.
5.	Марлевые салфетки	5 шт.
6.	Направление на анализ (бланки)	3 шт.
7.	Лейкопластырь	1 уп.
8.	Карандаш простой	1 шт.
9.	Карандаш по стеклу	1 шт.
10.	Бикс (металлический контейнер)	1 шт.
11.	Инструкция по забору материала	1 шт.
12.	Хлорамин в пакете по 300 г, рассчитанный на получение 10 л 3-процентного раствора, и сухая хлорная известь в пакете из расчета 200 г на 1 кг выделений	1 уп.
13.	Перчатки резиновые	2 пары
14.	Контейнеры для испражнений 30 мл с ложкой, полипропиленовые	2 шт.
15.	Пробирки для мазков с деревянными или алюминиевыми зондами, стерильные с добавлением транспортных сред или без них	2 шт.
16.	Штатив на шесть гнезд	1 шт.
17.	Пептонная вода 1-процентная во флаконах по 50 мл, закрытых резиновыми пробками или завальцованных металлическими колпачками	4 шт.

_____________________________

^<*> с учетом приложения N 1 к МУК 4.2.3745-22 "Методы лабораторной диагностики холеры" комплектация укладки может быть изменена и дополнена.