Приложение G (справочное). Сравнение соответствия между двумя повторными вычислениями концентрации сперматозоидов

Приложение G
(справочное)

Сравнение соответствия между двумя повторными вычислениями концентрации сперматозоидов

Каждое повторное вычисление концентрации сперматозоидов должно быть, по возможности, проведено не менее чем на 200 сперматозоидах в гемоцитометре с камерой Нэйбауэра (см. рисунок G.1).

Для повторных вычислений концентрации применяют одинаковый объем суспензии сперматозоидов.

1 Сходимость результатов исследований - вероятность того, что разница результатов, зависящая от случайных факторов, составляет < 5 %, которую вычисляют с учетом вероятностей биномиальных распределений с использованием асимметричных доверительных интервалов [14].

2 Для каждого повтора отмечают общее количество подсчитанных сперматозоидов.

3 Вычисляют как суммарное количество сперматозоидов для двух повторов, так и разницу в количестве сперматозоидов между повторами.

4 Сравнивают разницу значений суммарного количества сперматозоидов в повторах с предельными значениями (см. таблицу G.1):

a) находят строку, в которой указан диапазон значений суммарного количества сперматозоидов в повторах;

b) если разница меньше или равна предельному значению, то результаты являются приемлемыми для повторных исследований.

Таблица G.1 - Предельные значения для определения разницы между повторами исследования количества сперматозоидов

Диапазон значений суммарного количества сперматозоидов в повторах	Предельное значение	Диапазон значений суммарного количества сперматозоидов в повторах	Предельное значение
От 969 до 1000	61	От 376 до 395	38
От 938 до 968	60	От 357 до 375	37
От 907 до 937	59	От 338 до 356	36
От 876 до 906	58	От 319 до 337	35
От 846 до 875	57	От 301 до 318	34
От 817 до 845	56	От 284 до 300	33
От 788 до 816	55	От 267 до 283	32
От 760 до 787	54	От 251 до 266	31
От 732 до 759	53	От 235 до 250	30
От 704 до 731	52	От 219 до 234	29
От 678 до 703	51	От 206 до 218	28
От 651 до 677	50	От 190 до 205	27
От 625 до 650	49	От 176 до 189	26
От 600 до 624	48	От 163 до 175	25
От 576 до 599	47	От 150 до 162	24
От 551 до 575	46	От 138 до 149	23
От 528 до 550	45	От 126 до 137	22
От 504 до 527	44	От 115 до 125	21
От 482 до 503	43	От 105 до 114	20
От 460 до 481	42	От 94 до 104	19
От 438 до 459	41
От 417 до 437	40
От 396 до 416	39

5 Интерпретация результатов:

a) если результаты повторных исследований приемлемы, то средние значения для каждой концентрации сперматозоидов представляют как результаты образца (см. таблицу G.2);

b) если результаты двух повторных исследований недостаточно близки, то проводят два новых повторных исследования;

c) если повторное исследование не показывает достаточной сходимости для трех повторных исследований, то среднее значение вычисляют с использованием всех шести повторных исследований, и в протокол включают комментарий о том, что результат основан на среднем значении исследований, не имеющих достаточной сходимости;

d) если в каждой повторности подсчитано менее 200 сперматозоидов, то в протоколе должно быть отмечено, что результат концентрации сперматозоидов основан на малом количестве наблюдаемых сперматозоидов.

Таблица G.2 - Поправочные коэффициенты, используемые для вычисления концентрации сперматозоидов в эякуляте при проведении исследования в двух повторностях с учетом объема эякулята и его разведения

Разбавление	Количество больших квадратов сетки счетной камеры, использованных для подсчета			Количество полей видимости, подсчитанных в каждой камере
	5	10	25	2	3	4	5	6	7	8	9
	Значения поправочного коэффициента
1:5	8	16	40	80	120	160	200	240	280	320	360
1:10	4	8	20	40	60	80	100	120	140	160	180
1:20	2	4	10	20	30	40	50	60*	70*	80*	90*
1:50	0,8	1,6	4	8	12*	16*	20*	24*	28*	32*	36*
Примечание - Гемоцитометр с камерой Нэйбауэра имеет две счетные камеры. Каждая счетная камера состоит из девяти квадратов (3  3) одинакового размера (см. рисунок G.1). Центральная область состоит из 25 больших квадратов, каждый из которых окружен утолщенной линией, а восемь периферийных квадратов состоят из 20-16 квадратов и прямоугольников соответственно. * - указывает на то, что разведение не достаточное.

Рекомендуемая счетная камера представляет собой гемоцитометр с камерой Нэйбауэра с высокой степенью точности. Могут быть использованы другие валидированные и проверенные счетные камеры, но для них следует разработать таблицы разбавления эякулята и установления расчетных коэффициентов, которые будут обеспечивать достижение эквивалентной точности и прецизионности во время их применения.

Рисунок G.1 - Внешний вид всей счетной камеры Нэйбауэра 9 больших квадратов одинакового размера: C - центральная область, 25 больших квадратов; P - 8 периферийных квадратов, 20-16 квадратов и прямоугольников соответственно (адаптировано из [14])