Приложение H (справочное). Исследование жизнеспособности сперматозоидов

Приложение H
(справочное)

Исследование жизнеспособности сперматозоидов

Смешивают 30 мкл образца спермы с 30 мкл комбинированного красителя эозиннигрозин и оставляют на 30 с.

Переносят 20 мкл смеси на маркированное чистое предметное стекло микроскопа и наносят тонким слоем (необходимо убедиться в том, что контрастное окрашивание нигрозином не избыточно).

Высушивают на воздухе, а затем накрывают большим покровным стеклом (например, размером 22  50 мм).

Изучают не менее 200 сперматозоидов и характеризуют каждый из них как живой или мертвый:

- микроскоп с увеличением 100 ^х под иммерсионным маслом;

- сперматозоиды с неокрашенными головками считают живыми клетками;

- красные или слегка розовые головки сперматозоидов считают мертвыми клетками;

- сперматозоиды со слабой красной или розовой окраской только в месте шейки ("дырявые шейки") считают живыми клетками (см. рисунок H.1);

- нет необходимости проводить исследование дополнительной аликвоты для определения жизнеспособности сперматозоидов.

Если используют отдельные красители эозин и нигрозин, то следует соблюдать объемы и пропорции их смешивания, как описано выше.

Настоятельно рекомендуется проводить пробоподготовку витальных мазков для защиты от случайных изменений, например от конденсации влаги на их поверхности, что позволит эозину мигрировать из витального мазка в высушенные (т.е. уже мертвые) клетки.

1 - вид сверху; эта область может быть окрашена в светло-фиолетовый цвет; 2 - вид сверху; область розового окрашивания эозином шейки "дырявая шейка"; 3 - вид сбоку; область темно-фиолетового цвета окрашивания нигрозином под головкой сперматозоида

Примечание - Накопление нигрозина под передней частью головки сперматозоида можно спутать с окрашиванием эозином, а следовательно, появление "дырявой шейки" не указывает на гибель клеток.

Рисунок H.1 - Схемы, иллюстрирующие две распространенные проблемы, возникающие при интерпретации результатов исследования жизнеспособности сперматозоидов при окрашивании эозином-нигрозином (адаптировано из [14])