Приложение N 3. Методические рекомендации "Исследование кала на скрытую кровь"

Приложение N 3
к приказу Минздрава РТ
от 7 августа 2023 г. N 1759

Методические рекомендации
"Исследование кала на скрытую кровь"

Использование тест-системы для количественного определения скрытой крови в стуле

Пробоподготовка:

материалом анализа является проба кала пациента. Кал может быть отобран в любое время без какой-либо подготовки пациента (диета и т.д.).

Проба должна быть доставлена в лабораторию в течение 6 часов при комнатной температуре, либо в течение 12 часов в замороженном состоянии (-20°С).

В лаборатории кал переносится в специализированную пробирку. Пробирки для сбора образца содержат буфер для экстракции и сохранения гемоглобина (содержит азид натрия).

Полученный материал может храниться в пробирке при температуре 2-8°С в течение недели без воздействия прямого света.

Порядок взятия пробы

1. Перевернуть пробирку зеленой крышкой вверх.

2. Открутить зеленую крышку, аккуратно достать пробоотборник, пробирку поставить вертикально, избегая опрокидывания.

3. Кончик пробоотборника с бороздками три раза погрузить в разные места кала так, чтобы все бороздки были заполнены. Излишки кала удалить бумажной салфеткой.

4. Аккуратно вставить пробоотборник в пробирку, плотно закрутить зеленую крышку, перевернуть пробирку белой крышкой вверх.

5. Пробирки должны быть промаркированы и плотно закрыты. Маркировка на пробирках должна обязательно совпадать с маркировкой в списке.

6. Пробирки не центрифугировать и не встряхивать.

7. Проведение анализа.

Анализ полученных проб на наличие скрытой крови в стуле можно проводить на любом биохимическом анализаторе открытого типа или на специализированном автоматическом анализаторе.

Перед проведением анализа анализатор необходимо включить и пошагово выполнить все требования программы во время инициации и промывки системы.

7.1. Калибровка прибора.

Процедуру калибровки прибора требуется провести перед первым запуском анализатора и в дальнейшем через каждые две недели. Калибровка проводится согласно процедуре, описанной в программном обеспечении прибора. В качестве калибратора используется специализированный набор калибраторов.

7.2. Контроль качества.

Процедура контроля качества производится при первичном запуске анализатора и в дальнейшем перед каждой постановкой проб. Для процедуры контроля качества используется специализированный набор контролей. Перед сменой набора калибраторов необходимо поменять в программе значения контрольной сыворотки (прилагаются во вкладыше к набору), а также номер лота набора. Контроль качества необходимо проводить в пределах 2S в трех повторностях. В случае устойчивого отклонения данных контроля от заданных показателей, анализ проб не проводить до устранения возникших несоответствий.

7.3. Анализ проб.

Подготовка образцов:

надеть перчатки.

Убедиться, что пробирки для сбора образца не мешают другим пробам в карусели для образцов прибора. При необходимости, перенести образец из пробирки в контейнер карусели образцов прибора.

Данные с маркировки пробирки необходимо ввести в программу прибора, после чего установить пробирки белыми крышками вверх в штатив для образцов анализатора в порядке, который укажет программа. Крышки с пробирок перед анализом необходимо удалить. Также следует удалить возможные пузыри (при помощи ватной палочки).

Процедура теста:

Длина волны: основная = 570 нм, референс = 800 нм (вместо длины волны 800 нм может быть использована длина волны 700 нм, при этом надо учитывать снижение величины абсорбции на величину около 30%;

Протяженность: 1 см;

Температура: 37°С;

Образец/Реагент N 1/Реагент N 2: 1/10.4/10.4;

Реакция: фиксированное время.

Перед постановкой необходимо довести реагенты до рабочей температуры. Пропорциональное изменение объема реагента не влияет на результаты теста.

Пример процедуры теста для автоматического анализатора:

время 0;

калибратор/контроли/образец = 12 мкл;

реагент N 1 = 125 мкл;

после 300 секунд - добавление реагента N 2 = 125 мкл;

после 50-70 секунд - считывание 1;

после 90-110 секунд - считывание 2.

Подсчет результатов:

1. Построить калибровочную кривую на графике, используя оптическую плотность (ось у) в соответствии с концентрацией нг/мл (ось х) для каждого калибратора.

2. Указать на калибровочной кривой ОП значения образца и контроля.

3. Экстраполировать нг/мл значение образца и контроля с калибровочной кривой.

Фактор конверсии - Hb[ng/mL]/1000=Hb[g/mL].

Значения Cut-Off

Для каждой лаборатории рекомендуется определять значение cut-off в зависимости от численности населения и целей диагностики (скрининга, подтверждения и т.д.). Исследования, выполненные в референс центрах, показали, что отклонение 50 нг/мл гемоглобина дали 7,8% положительного индекса, тогда как отклонение 100 нг/мл гемоглобина дал 4,5% положительного индекса. В целях диагностики, FOB результаты должны быть интерпретированы в соответствии с историей болезни пациента и другими клинических параметрами.

Вмешательство: тест не подвержен влиянию билирубина до 200 мг/мл, аскорбиновой кислоты до 90 мг/мл, жиров до 900 мг/мл, БСА до 100 мг/мл и BaS04 до 50 мг/мл. Другие животные гемоглобины (бычий, свиной, кроличий и козий) не влияют на результаты теста в концентрации до 2500 нг/мл.

Измеряемый диапазон: 14-1050 нг/мл. Образцы с концентрацией выше 1050 нг/мл должны быть разведены 1:10с последующим умножением результата на 10.

Точность теста была определена в 20 постановках каждого контроля (2 уровня L1/L2). Результаты приведены в следующей таблице:

	Номинальное	Внутри серии		Между сериями		Итог
	Нг/мл	SD	CV%	SD	CV%	SD	CV%
L1	100,73	1,00	0,99	3,99	3,96	4,11	4,08
L2	384,85	3,22	0,84	12,66	3,29	13,06	3,39

Нижняя граница: 14 нг/мл.

Предел чувствительности представляет собой минимальную концентрацию гемоглобина, который может быть обнаружен и отличается от нулевого стандарта. Такой предел рассчитывается как среднее значение 2 SD разведения серии 25 нг/мл концентрации контроля.

Проагглютинационная зона не наблюдается до 50,000 нг/мл (50 мг/мл). Рекомендуется проверять данное значение при каждой постановке.