Приложение С (справочное). Дополнительные рекомендации по приготовлению экстрактов из исследуемых образцов

Приложение С
(справочное)

Дополнительные рекомендации по приготовлению экстрактов из исследуемых образцов

ВНИМАНИЕ - Требования, установленные в настоящем стандарте, к материалам МИ, содержащим белки, следует применять с осторожностью с целью обеспечения проведения экстракции без изменения биологических свойств экстрагируемых материалов.

С.1 Экстракцию проводят с целью получения исследуемого образца (экстракта) для оценки биологического действия МИ/материала.

Для приготовления исследуемого экстракта следует использовать экстрагент, параметры и условия экстракции, соответствующие параметрам и условиям клинического применения МИ, а также предполагаемым результатам и методу исследования (например, цели исследования, обоснованности, чувствительности). Таким образом, параметры и условия экстракции, полученный экстракт будут обеспечивать при проведении исследований соответствующим методом реальные условия клинического применения МИ, достижение цели и предсказуемость результатов исследований.

При проведении экстракции МИ/материала, предназначенного для обеспечения циркуляции жидкостей в условиях клинического применения, например в системах экстракорпорального кровообращения, следует учитывать требования стандартов (при их наличии), распространяющихся на данный МИ/материал, для выбора соответствующих методов экстракции.

Для идентификации опасностей и оценки их риска биологические исследования проводят в преувеличенных и/или реальных условиях клинического применения МИ.

С.2 В настоящем стандарте приведены рекомендации по приготовлению исследуемого экстракта на основе предположения о том, что количество экстрагируемого вещества (веществ) зависит от продолжительности экстракции, температуры, соотношения площади поверхности исследуемого материала и объема экстрагента и его свойств.

С.3 Продолжительность экстракции должна быть достаточной для извлечения максимального количества экстрагируемого вещества. Рекомендуется использовать стандартные параметры и условия экстракции, включая установленные значения времени и температуры экстракции, вместо других необоснованных или нестандартных условий.

С.4 Температура экстракции может быть различной в зависимости от исследуемых материалов. Экстракция не должна вызывать существенной деградации исследуемого материала, за исключением случаев, когда материал предназначен для растворения или резорбции при клиническом применении (см. 10.3.2). Температура экстракции зависит от физико-химических характеристик материала (материалов) МИ. Температура экстракции, выбранная, например, для полимеров, должна быть ниже температуры стеклования. Если температура стеклования ниже температуры клинического применения МИ, то температура экстракции должна быть ниже температуры плавления. Рекомендуемые условия проведения экстракции приведены в 10.3.1.

Ниже приведены примеры значений температур проведения экстракции различных материалов МИ, поясняющие требования 10.3.1:

- материалы, температура плавления или размягчения которых менее (121 2) °С, следует подвергать экстракции при стандартной температуре ниже температуры плавления (например, полиэтилен низкой плотности);

- материалы, подвергаемые гидролизу, следует экстрагировать при температуре, обеспечивающей минимальный гидролиз [например, полиамиды экстрагируют при температуре (50 2) °С];

- материалы, которые стерилизуют паром и содержат жидкость в процессе хранения, следует экстрагировать при температуре (121 2) °С (например, предварительно наполненные диализаторы).

Исследуемые материалы следует экстрагировать при температурах, которые обеспечивают извлечения максимального количества экстрагируемого вещества без деградации материала [например, материалы для фиксирования имплантатов рекомендуется экстрагировать при температуре (37 1) °С, керамические имплантаты - при температуре (121 2) °С].

Для экстракции абсорбируемых материалов см. ISO/TS 37137-1.

Если известно, что абсорбируемые продукты деградации влияют на рН тест-системы, то рекомендуется корректировать значение рН исследуемого экстракта при проведении экстракции для оценки влияния стабильности рН на результаты исследования. При проведении оценки риска биосовместимости в отчете об исследовании приводят обоснование корректировки значений рН, начальное и конечное значения рН исследуемого экстракта, описание процесса корректировки рН и прогнозирование возможных последствий изменений значений рН для клинического применения МИ.

Примечание - Разбавление исследуемого экстракта, как правило, не влияет на значение рН, так как буферная способность (физиологических) растворов, используемых для экстракции, незначительная. Разбавление исследуемого экстракта может эффективно снизить его осмоляльность. При этом осуществляют корректировку значения рН, что, как правило, приводит к повышению осмоляльности. Поэтому рекомендуется проводить корректировку значения рН до разбавления исследуемого экстракта.

Не рекомендуется проводить экстракцию абсорбируемых полимерных материалов при температурах in vivo, соответствующих или превышающих температуры стеклования, так как при таких температурах может произойти изменение свойств полимерных материалов (например, деградация), которое не происходит в условиях клинического применения МИ.

Следует учитывать, что проведение экстракции абсорбируемых металлических материалов при повышенных температурах может привести к появлению новых и потенциально нерепрезентативных механизмов коррозии. Таким образом, для проведения экстракции большинства абсорбируемых полимерных и металлических материалов стандартные температуры экстракции, указанные в 10.3.1, могут быть неприменимы. При исследовании абсорбируемых МИ необходимо учесть возможность извлечения частично деградированных материалов и связанных с ними промежуточных продуктов деградации.

С.5 Отношение площади поверхности исследуемого образца к объему экстрагента должно быть достаточным для того, чтобы:

- извлечь максимальные количества экстрагируемого(ых) вещества (веществ) и в достаточном объеме, необходимом для биологического исследования (т.е. объем дозы должен быть в заданных физиологических пределах);

- продемонстрировать потенциальную опасность клинического применения МИ;

- обеспечить полное погружение исследуемого образца в экстрагент.

Рекомендуется использовать стандартные значения площади поверхности исследуемого образца и объема экстрагента (см. 10.3.3) вместо значений параметров, специфичных для конкретного МИ. Следует учитывать, что для повышения чувствительности некоторых методов исследования требуется применение концентрированных исследуемых экстрактов.

Примечание - Концентрирование исследуемых экстрактов может привести к потере летучих веществ, таких как окись этилена.

С.6 Применяемые экстрагенты должны соответствовать следующим требованиям:

- быть пригодными для использования в конкретной биологической тест-системе;

- имитировать экстракцию, которая происходит во время клинического применения МИ;

- обеспечить извлечение максимальных количеств экстрагируемых веществ.

В качестве экстрагентов рекомендуется использовать стандартные полярные и неполярные растворители. В 10.3.5 приведены экстрагенты, которые рекомендуется использовать вместо растворителей, специфичных для конкретного МИ.

Наряду со стандартизованными параметрами экстракции, приведенными в С.5 и С.6, допускается использовать данные, полученные при проведении биологических исследований МИ для других целей, например для оценки риска, формирования и наполнения баз данных стандартизованных параметров.

С.7 При проведении экстракции растворимых и абсорбируемых материалов следует применять:

- параметры экстракции, установленные в таблице 1;

- значения температуры и времени экстракции, указанные в 10.3.1;

- требования 10.3.9 к выполнению фильтрации или центрифугирования.

С.8 Стандартизованные требования к приготовлению исследуемых экстрактов из материалов МИ, полимеризующихся in situ, отсутствуют. При приготовлении соответствующего исследуемого экстракта следует учитывать отдельные компоненты материала МИ, время полимеризации, клиническое применение МИ и характеристики применяемых экстрагентов. При планировании исследования следует разработать требования к приготовлению исследуемого экстракта с учетом кинетики полимеризации материала. При выборе экстрагента следует учитывать наличие в исследуемом образце компонентов, неполимеризующихся in situ.