Приложение C (справочное). Пример формы документации процедуры исследования с использованием моделей реконструированного эпидермиса человека

Приложение C
(справочное)

Пример формы документации процедуры исследования с использованием моделей реконструированного эпидермиса человека

     Номер исследования:....................

     Дата:..............

     Имя файла данных в формате XLS:..........................

     Проведено:.......................... Подписи:............

     Временной протокол (см. таблицу C.1)

     Получение тканей RHE (дата, день, час):........... ID:

     Изготовитель/поставщик:...................

                Таблица C.1 - Протокол этапов по времени

Этап	Дата (день-месяц-год)	Первая серия		Вторая серия
		начало	конец	начало	конец
Предварительная инкубация (от 2 до 24 ч)
Воздействие (18  1) ч (24  2) ч
Промывание
Исследование МТТ 3 ч  5 мин
Экстракция как минимум 2 ч
Измерение

     Проверка оборудования

     Проверка  оборудования  должна  быть  включена  в  систему  качества

лаборатории, проводящей исследование. Необходимо  отразить  документально

такие параметры  исследования,  как  инкубатор,  рефрижератор  и  условия

водяной   бани.   Аспекты   качества    оборудования    и    лабораторных

принадлежностей (например, пипеток) должны быть отражены документально.

     Эффективность исследования

     Эффективность исследования приведена в таблице C.2.

                Таблица C.2 - Компоненты для исследования

Поставщик реконструированного эпидермиса, номер партии:	Дата производства:
Среда пробы, номер партии:	Срок годности:
Концентрат МТТ, номер партии:	Срок годности:
Разбавитель МТТ, номер партии:	Дата производства:
Изопропанол (экстрактант МТТ), номер партии:	Срок годности:
(D)PBS, номер партии:	Срок годности:
Другие замечания:

     Идентификационный номер ID/Дата:

     Визуальный контроль качества кожи приведен в таблице C.3.

             Таблица C.3 - Визуальный контроль качества кожи

Внешний вид	Набор 1	Набор 2
Макро.
Количество исключенных тканей: - с дефектами краев; - пузырьками воздуха; - обширной влагой на поверхности.
Используйте баллы: 1 - очень хорошо, 2 - хорошо, 3 - приемлемо, 4 - неприемлемо.

     Специфические наблюдения:

     Растворы и экстрагенты

     Наполненный химический положительный контроль.

     Солевой раствор SDS 1 % (об/об),  приготовленный  из  20 %  раствора

SDS: в день исследования следует приготовить свежие растворы  1 %   SDS в

физиологическом растворе и кунжутном масле путем смешивания  10 мкл  20 %

SDS с 1,9 мл экстрагента. Тщательно перемешивают вихревым способом  после

приготовления и перед нанесением  на  поверхность  ткани.  Срок  годности

истекает в тот же день.

     - эталон 20 % базового раствора SDS, партия N: .....;

     - физиологический раствор (0,9 % NaCl), партия N: .....;

     - дата приготовления: ..........

     Приготовление физиологического раствора (0,9 % NaCl):

     - Наименование NaCl, партия N: ..........

     - Способ стерилизации: ................

     - Дата приготовления: ..........

     - Срок действия: ...............

     Приготовление раствора (D)PBS:

     - Наименование концентрата (D)PBS, партия N: .....

     - Корректировка pH (до 7,0): ..........

     - Способ стерилизации: ........................

     - Дата приготовления: .................

     - Срок действия: ......................

     Кунжутное масло:

     - Наименование, партия N: .....................

     - Срок действия: ......................

     Замечания по отдельным тканям

     При наблюдении каких-либо отклонений во время  исследований,  замене

тканей или любой технической проблеме отмечают это в таблице C.4.

     Регистрируют номер ткани, код образца и наблюдение или примечание.

Таблица C.4 - Замечания по отдельным тканям

Код образца	Номер ткани	Примечания

     Идентификационный номер ID/Дата:

     Спектрофотометрическое измерение

     Конфигурация планшета для считывания

     Регистрируют  расположение  проб  на  96-луночном  планшете.  Строго

придерживаются  установленного  дизайна   планшета   согласно   указаниям

изготовителя. Примеры схемы планшета при использовании исследования МИ по

круговой системе для  исследования  раздражения  (см.  [6])   приведены в

таблицах C.5 и C.6.

     Включают ридер за 10 мин до измерения  или  согласно   инструкции по

эксплуатации.

                    Таблица C.5 - Модель EpiDerm RHE

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

bckg

bckg

bckg

bckg

bckg

bckg

B

NC

PC

VC1

VC2

TA1

TA2

TA3

TA4

TA5

TA6

TA7

TA8

Ткань 1

C

NC

PC

VC1

VC2

TA1

TA2

TA3

TA4

TA5

TA6

TA7

TA8

D

NC

PC

VC1

VC2

TA1

TA2

TA3

TA4

TA5

TA6

TA7

TA8

Ткань 2

E

NC

PC

VC1

VC2

TA1

TA2

TA3

TA4

TA5

TA6

TA7

TA8

F

NC

PC

VC1

VC2

TA1

TA2

TA3

TA4

TA5

TA6

TA7

TA8

Ткань 3

G

NC

PC

VC1

VC2

TA1

TA2

TA3

TA4

TA5

TA6

TA7

TA7

H

где bckg - раствор изопропанола для измерения фона;

     NC - отрицательный контроль ((D) PBS);

     PC - положительный контроль (раствор SDS (PC));

     VC - контроль экстрагента [например, физиологический раствор (VC1) и

кунжутное масло (VC2)];

     TA1 ... TA7 - испытуемые пробы 1-7.

     Для  модели  эпидермиса  OD  измеряют  in  duplo  (2  200 мкл)   в

соответствии с рекомендациями изготовителя.

                   Таблица C.6 - Модель SkinEthic RHE

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

bckg

bckg

bckg

bckg

bckg

bckg

пустой

пустой

пустой

пустой

пустой

пустой

B

NC

NC

NC

NC

NC

NC

NC

NC

NC

пустой

пустой

пустой

C

NaCl

NaCl

NaCl

NaCl

NaCl

NaCl

NaCl

NaCl

NaCl

пустой

пустой

пустой

D

SO

SO

SO

SO

SO

SO

SO

SO

SO

пустой

пустой

пустой

Е

PC

PC

PC

PC

PC

PC

PC

PC

PC

пустой

пустой

пустой

F

NaCl 1

NaCl 1

NaCl 1

NaCl 1

NaCl 1

NaCl 1

NaCl 1

NaCl 1

NaCl 1

пустой

пустой

пустой

G

SO 1

SO 1

SO 1

SO 1

SO 1

SO 1

SO 1

SO 1

SO 1

пустой

пустой

пустой

Н

NaCl 2

NaCl 2

NaCl 2

NaCl 2

NaCl 2

NaCl 2

NaCl 2

NaCl 2

NaCl 2

пустой

пустой

пустой

Ткань 1

Ткань 2

Ткань 3

где bckg - раствор изопропанола для фонового измерения;

     NC - отрицательный контроль ((D) PBS контроль экстрагента);

     SO - контроль экстрагента, кунжутное масло;

     PCNACL - положительный контроль образца в экстрактанте (NaCl);

     PCSO - положительный  контроль  образца  в  экстрактанте  (кунжутное

масло);

     NaCl 1 - трижды по 200 мкл пробы изопропанола для  каждой  инкубации

ткани исследуемого образца 1;

     SO 1 - трижды по 200 мкл пробы  изопропанола  для  каждой  инкубации

ткани исследуемого образца 1.

     Дополнительные   исследуемые   образцы   могут   быть     измерены в

дополнительных  96-луночных  планшетах.  Для  модели  SkinEthic    RHE OD

определяется in triplo (3  200 мкл), согласно изготовителю.

     Проверка длины волны

     Обозначают галочкой (V) правильную настройку фильтра в таблице C.7.

                    Таблица C.7 - Настройка фотометра

Длина волны: 570 (от 550 нм до 570 нм)

     Идентификационный номер ID/Дата:

     Архивирование

     Необработанные данные сохранены в/как:

     Развернутая таблица сохранена в/как:

     MDS сохранен в/как:

     Характеристика исследуемых образцов (см. таблицу C.8)

     Лаборатория: .......... Исследование N: .......... Проба N: ......

      Таблица C.8 - Приготовление и инкубация исследуемых образцов

Название или код исследуемого материала	Используемое количество образца	Объем добавленного экстракта	Инкубатор	Время помещения	Время изъятия	Внешний вид до и после экстракции

     Идентификационный номер ID/Дата: