Приложение A (обязательное). Подготовка образцов для исследования на раздражение

Приложение A
(обязательное)

Подготовка образцов для исследования на раздражение

A.1 Общие положения

При проведении исследований на раздражение и интерпретации полученных данных необходимо учитывать характер, степень, частоту, длительность и другие условия воздействия МИ на человека. Одним из важнейших параметров в этих исследованиях является подготовка исследуемых образцов. Настоящее приложение приводит общую информацию по приготовлению исследуемых проб для исследования раздражения как in vitro, так и in vivo. Применимость и использование различных типов исследуемых проб описываются в соответствующих разделах настоящего стандарта.

A.2 Образцы для воздействия прямым контактом

A.2.1 Твердые исследуемые образцы

Твердые образцы в соответствующем физическом состоянии (т.е. пласты, пленки) необходимо исследовать без изменений. Для исследования in vivo подготавливают исследуемые образцы размером 2,5  2,5 см, с толщиной, приближенной к обычному использованию, но не превышающей 0,5 см. Таким же образом подготавливают подходящие образцы отрицательного контроля. Отрицательный контроль должен в физическом плане совпадать с исследуемым материалом и не быть раздражителем. Впитывающая марля может быть использована в качестве замещения, если невозможно определить более подходящий контроль.

Для обеспечения хорошего контакта с тканями твердое вещество может быть измельчено в порошок, соблюдая осторожность для предотвращения контаминации, или достаточно увлажнено водой или подходящим нераздражающим раствором. В случае керамики, где требуется измельчение, необходимо помнить, что физико-химические свойства керамики могут быть изменены, что может оказать заметное влияние на биологическую активность.

Порошки (например, супер-абсорбенты) необходимо исследовать прямым осаждением или превращением в массу в подходящем растворителе. Контроль, использующий тот же растворитель, должен быть оценен параллельно с увлажненным, разведенным или суспендированным исследуемым материалом.

Примечание - Площадь поверхности либо размер частиц, либо и то, и другое являются важными факторами для биологических ответов, таких как фагоцитоз, который играет важную роль в воспалительных и иммунных реакциях.

A.2.2 Жидкие исследуемые образцы

Жидкости необходимо исследовать непосредственно неразбавленными или, если это целесообразно, разбавленными подходящим раствором. Контроль, использующий тот же растворитель, следует оценивать параллельно с разбавленной исследуемой жидкостью.

A.3 Экстракты из исследуемых образцов

Твердый материал может быть исследован путем приготовления экстракта. При исследовании экстрактов таковые должны быть приготовлены в соответствии с ISO 10993-12 с применением полярных, неполярных и/или дополнительных растворителей при необходимости. Необходимо предоставить обоснование выбора метода экстракции.

Бланковый образец с использованием экстрагирующего растворителя должен быть оценен параллельно с экстрактом исследуемого материала.

A.4 Растворы

Если исследуемый образец должен быть экстрагирован, разбавлен, суспендирован или увлажнен, то необходимо использовать подходящий нераздражающий раствор. В ISO 10993-12 приведен список надлежащих растворов.

A.5 Стерильные исследуемые образцы

Если готовое изделие поставляется в стерильном состоянии, то исследуемые образцы должны быть простерилизованы тем же способом до исследования. Изделия, стерилизуемые этиленоксидом, представляют техническую проблему, так как этиленоксид и продукты его реакции могут произвести биологический ответ в исследованиях, приведенных в настоящем стандарте.

Чтобы можно было провести различие между эффектами, вызванными исследуемым образцом, или остаточными количествами окиси этилена, когда наблюдается раздражающая реакция, следует учитывать оценку реакции на образец до и после стерилизации окисью этилена.