Приложение F (справочное). Справочный материал об исследованиях на раздражение

Приложение F
(справочное)

Справочный материал об исследованиях на раздражение

Применение лабораторных животных для исследований кожных раздражений снижается из-за развития моделей in vitro и более частого использования добровольцев. Применяют биоинженерные или неинвазивные объективные методы измерения для количественного определения раздражающего ответа, таким образом, снижая зависимость от более субъективных визуальных шкал считывания. Недавно модель RHE оценивалась на предмет применения в определении раздражающих химических веществ в экстрактах МИ [6]. По сравнению с OECD 439 были применены некоторые адаптации, делающие модель RHE применимой для обнаружения (низких) уровней раздражителей в экстрактах МИ. Кроме того, был накоплен многолетний опыт проведения теста Драйза на кожное раздражение на кроликах-альбиносах. Этот метод описан в OECD 404. Исследуемый образец наносят под марлевыми подушечками на интактные места на выстриженной спине. Аппликации проводят на трех кроликах. Подушечки закрепляют липкой лентой и все туловище животного оборачивают полуокклюзионной или окклюзионной повязкой на (4  0,5) ч. После 4 ч подушечки удаляют, исследуемые места очищают и спустя 1 ч оценивают реакцию на предмет эритемы и отека (эдемы). Реакции также оценивают через (24  2) ч, (48  2) ч и (72  2) ч.

Исследование кожного раздражения на мелких лабораторных животных проводят для помощи при идентификации материалов, которые могут быть потенциальными раздражителями кожи или слизистой ткани человека или и тем, и другим. Основным раздражителем является материал, вызывающий воспалительные изменения кожи в результате прямого повреждающего эффекта, характеризующегося либо наличием воспаления, либо, в случае сильного раздражителя, везикуляцией или некрозом, или и тем, и другим.

Кролик является предпочтительным подопытным животным, о чем свидетельствует большое количество информации по кожному раздражению у этих животных в Реестре токсичных эффектов химических веществ (RTECS). Из свыше 2000 записей RTECS 85 % сообщают результаты исследований на кролике, 7,5 % - на человеке, 4 % - на мышах и 3 % - на морской свинке. В результате кролики применялись для получения абсолютного большинства существующих данных в доступной литературе. Если предназначенное применение изделия на это не указывает, то повреждение (например ссадина, царапина) области нанесения необязательно, так как многолетний опыт показывает сходные ответы для поврежденной и неповрежденной области.

Исследования кожного раздражения могут давать различающиеся результаты из-за вариации в количестве факторов, связанных с исследованием, таких как животное-хозяин, исследуемая доза, размер подушечки, степень окклюзии, длительность воздействия, экстрагент, время и качество оценки. Следовательно, в исследования раздражения кожи человека важно включать хорошо известные положительные и отрицательные контрольные материалы, чтобы в сравнении получить достоверные результаты. Положительный контроль раздражителя SDS чистотой  99 % является предпочтительным выбором, так как это наиболее широко используемый контроль раздражителя в клинических исследованиях. См. ссылки [2], [14] и [27]. Он также легко и широко доступен и не имеет других отрицательных эффектов. Пеларгоновая кислота, характер действия которой отличается от SDS, также может использоваться в качестве положительного контроля. См. [24] и [25].

Воздействие SDS калибрует группу добровольцев и служит точкой отсчета. SDS классифицируется как кожный раздражитель согласно критерию ЕС (Директива 88/379/Совета ЕЭК от 7 июня 1988). Тем не менее неясно, является ли SDS пороговым уровнем ответа, при котором химические вещества должны рассматриваться как кожные раздражители, или приближается к таковому. Таким образом, вместо использования неразбавленного материала, более применимо взять в качестве точки отсчета минимальный уровень SDS, рассматриваемый как минимум одной региональной группой (ЕС) как значительный острый кожный раздражитель, который является 20 %-ным (массовая концентрация) водным препаратом. См. ссылку [27].

Исследование глазного раздражения на кролике было разработано для прогнозирования его у человека (см. [28]). Дрейз (Draize) опубликовал систему баллов для помощи в оценке глазного раздражения (см. [8]). Были опубликованы иллюстрированные руководства в качестве помощи при оценке поражений глаза.

Несколько альтернативных исследований in vitro оценивались для исследования глазного раздражения. Тем не менее, ни одно исследование in vitro не сможет заменить исследование глазного раздражения in vivo, которое охватывает все конечные точки in vivo. Тем не менее, стратегические комбинации нескольких альтернативных методов исследования внутри многоуровневой стратегии исследования могут быть способными заменить глазное исследование Дрейза (Draize). Возможная концептуальная схема для такой многоуровневой стратегии была разработана для химических веществ в рабочей группе EURL ECVAM (см. [23]). Схема основывается на альтернативных методах глазного раздражения, которые различаются в своей способности определять либо сильные раздражающие вещества (ЕС R41; "Категория 1" или "Категория 2" GHS) либо вещества, считающиеся нераздражающими (ЕС "неклассифицированные"; GHS "Без категории"). Согласно этой схеме весь диапазон раздражения может быть решен путем распределения исследований в многоуровневой стратегии, которая может применяться с любого конца: для определения первых серьезных раздражителей и решения отсутствия раздражимости (подход сверху вниз) или для процедуры в обратном порядке, начиная с определения не раздражителей (подход снизу вверх). Легкое раздражение может быть разрешено на последнем уровне при обоих подходах.

Уже существует несколько OECD руководств по исследованиям, основывающимся на методах in vitro, связанных с конечной точкой "глазное раздражение": OECD 437, OECD 438, OECD 460, OECD 491 и OECD 492. Эти руководства для определения раздражающей активности химических веществ основываются на валидированных (ICCVAM, EURL ECVAM, JaCVAM или других) исследованиях in vitro. Эти руководства описывают метод исследования помутнения и проницаемости бычьей роговицы (см. OECD 437), метод изолированного глазного исследования на цыплятах (см. OECD 438), метод исследования проникновения флуоресцеина с использованием клеток, растущих на полупроницаемой вкладке (см. OECD 460) и метод исследования краткосрочного воздействия in vitro (см. OECD 491), состоящий из основанной на цитотоксичности пробы in vitro, которая проводится на конфлюэнтном монослое клеток роговицы кролика датского госинститута сывороток (SIRC), и исследования с применением реконструированного человеческого роговицеподобного эпителия, так называемое исследование реконструированного человеческого роговицеподобного эпителия (RhCE) (см. OECD 492). Ни одно из данных исследований OECD не было валидировано для МИ.