Приложение E (обязательное). Исследование раздражения на коже человека

Приложение E
(обязательное)

Исследование раздражения на коже человека

E.1 Общие положения

В дополнение к ISO 14155 применяют следующие требования в той мере, где их применение более необходимо.

E.2 Принцип

Одну дозу исследуемого материала наносят под окклюзией на кожу добровольцев. Раздражение сводится к минимуму путем нанесения исследуемого материала на короткие периоды. Более длительные периоды воздействия могут быть применимы при определенных условиях (см. [11], [26]).

Главным условием оценки является определение пропорции добровольцев, у которых развивается кожное раздражение, относительно реакции на контрольный материал.

E.3 Описание метода

E.3.1 Отбор добровольцев

Настоящий стандарт предназначен для использования со здоровыми добровольцами. Добровольцам должно быть минимум 18 лет, они не должны быть беременными или кормящими. Добровольцы с чувствительностью к исследуемому образцу или с признаками дерматита должны быть исключены из исследования. Отбор добровольцев проводят под наблюдением дерматолога или другого квалифицированного специалиста.

E.3.2 Приготовление доз

Жидкие исследуемые образцы используют неразбавленными. При исследовании твердых образцов их необходимо смочить небольшим количеством воды (как правило, 200 мкл) или, где необходимо, другим подходящим экстрагентом для обеспечения хорошего контакта с кожей. Необходимо учитывать структуру твердого материала и способ приготовления пробы должен быть обоснован. При использовании увлажненных образцов необходимо убедиться, что каждый доброволец получает одинаковое количество исследуемого образца. Используют одинаковое количество воды для увлажнения образца для каждого участника исследования и регистрируют это количество.

При использовании экстракта следует учитывать его влияние на кожное раздражение исследуемым образцом. Если в качестве смачивающего агента для твердых образцов используется не вода, а другая жидкость, то рассматривают возможность нанесения подушечки с контролем экстрагента на каждого добровольца.

E.3.3 Процедура

E.3.3.1 Количество добровольцев

По меньшей мере 30 добровольцев должны завершить исследование, включая не менее чем одну треть каждого пола.

E.3.3.2 Нанесение исследуемых образцов

Наносят испытуемую пробу на неповрежденную кожу в подходящем месте, например, на внешнюю верхнюю часть руки посредством окклюзионной камеры, содержащей марлевую подушечку (pad). Место нанесения должно быть одинаковым для всех добровольцев и должно быть отражено документально. Как правило, размер подушечки должен быть не меньше 1,8 см, предпочтительно 2,5 см в диаметре. Подушечка должна удерживаться в контакте с кожей посредством подходящей нераздражающей повязки, включая нераздражающий фиксирующий пластырь, в течение всего периода воздействия.

Подушечка должна доставлять соответствующую дозу на единицу площади: примерно 50 мг на 100 мг испытуемой пробы на квадратный сантиметр считается оптимальным. При нанесении жидких исследуемых материалов, как правило, к марлевой накладке добавляется от 200 мкл до 400 мкл до ее увлажнения. При исследовании твердых материалов, как правило, смачивается 200 мг исследуемого материала и добавляется к марлевой накладке. В качестве альтернативного метода нанесения твердых образцов марлевая подушечка увлажняется, и испытуемый образец покрывает весь исследуемый участок.

E.3.3.3 Длительность воздействия

Во избежание неприемлемо сильных реакций следует применять осторожный подход к исследованию. Последовательная процедура аппликаций позволит избежать сильной реакции раздражения. Подушечки наносятся последовательно, с периодом 15 мин и 30 мин, и до 1 ч, 2 ч, 3 ч и 4 ч. 15-минутный, либо 30-минутный периоды воздействия могут быть пропущены при достаточных признаках, что чрезмерных реакций не случится после 1-часового воздействия. Переход к более длительным воздействиям, включая 24-часовое воздействие закрытой накладки на новый участок кожи, будет зависеть от отсутствия кожного раздражения (оценивается по меньшей мере до 48 ч) в результате более кратковременных воздействий, чтобы убедиться, что любая отложенная реакция на раздражитель адекватно оценена.

Нанесение материала для более длительного воздействия всегда производится на ранее необработанный участок.

В конце периода воздействия необходимо удалить остаточный испытуемый образец, по возможности, используя воду или соответствующую жидкость, не оказывая влияния на существующую реакцию или целостность эпидермиса.

E.3.3.4 Ограниченное воздействие

В дополнение к последовательному увеличению длительности нанесения как описано E.3.3.3, если есть подозрение, что материал может вызвать резкое раздражение, следует сократить время воздействия в пробной (пилотной) группе добровольцев. Затем на основе полученных данных можно определить ход исследования. Последующие аппликации проводят только после оценки через (48  2) ч и (72  2) ч.

E.3.3.5 Клинический осмотр и оценка кожных реакций

Места аппликаций осматривают на предмет признаков раздражения и ответы оценивают сразу после удаления подушечки и через (1  0,1) до (2  0,2) ч, (24  2) ч, (48  2) ч и (72  2) ч. Если необходимо определить обратимость реакции, период наблюдения может быть продлен сверх 72 ч. Кроме того, должно быть подробно описано состояние кожи до и после исследования, например, пигментация и степени влажности. Кожное раздражение должно быть оценено и отражено документально в соответствии с системой баллов, приведенной в таблице E.1.

Таблица E.1 - Исследование раздражения на коже человека, шкала баллов

Описание ответной реакции	Количественная оценка
Ответная реакция отсутствует	0
Слабо положительная реакция (как правило, характеризуется легкой эритемой и/или сухостью большей части места аппликации)	1
Умеренно положительная реакция (как правило, явная эритема или сухость, возможно, распространяющаяся за пределы места аппликации)	2
Сильно выраженная положительная реакция (сильная и часто распространяющаяся эритема с отеком (эдемой) и/или формированием струпа)	3

Для добровольцев, у которых после воздействия меньше 4 ч оценка 1 или выше с баллом 1 или выше после считается, что у них будет более сильная реакция, если они будут подвергаться воздействию материала в течение 4 часов. Как только получена оценка 1 или выше, нет необходимости подвергать реагирующего добровольца дальнейшему воздействию материала. Могут потребоваться дальнейшие наблюдения для надлежащего ухода за добровольцами. В дополнение к наблюдению раздражения любые другие эффекты должны быть зарегистрированы и полностью описаны. Например, добровольцы должны быть обучены делать комментарии, связанные с аппликациями (например, осязательные эффекты), и экспериментаторы должны быть обучены отмечать немедленные реакции (например, крапивница) при удалении аппликаций. Такие наблюдения не обязательно указывают на эффект раздражителя, но должны включаться в отчет об исследовании, если замечены. Если они значительны, то должны рассматриваться в управлении исследованием для гарантии надлежащего ухода за добровольцами.

Важнейшими полученными данными являются данные о количестве добровольцев, у которых было или, как ожидается, будет раздражение кожи после воздействия до 4 часов. Необходимое время для выработки какого-либо ответа у человека не включается в оцениваемые результаты, а относится только к обеспечению надлежащего ухода за добровольцами.

E.3.3.6 Обоснование и выбор сопутствующего вещества положительного контроля

Так как человек показывает разнообразие в ответах на раздражители, следует включить положительный контроль для определения приемлемости набора исследований к обнаружению раздражающих эффектов исследуемого соединения. Предпочтительно использовать 20 % SDS в качестве положительного контроля, так как его раздражающие эффекты хорошо охарактеризованы (см. приложение F). Возможно использование других контролей при обосновании.

Обычный положительный контроль может быть выбран в качестве контрольного показателя. Кожное раздражение не является абсолютным феноменом. Любой материал может вызвать кожное раздражение, это зависит от дозы, характера и длительности воздействия. Таким образом, исследования кожного раздражения у человека почти всегда сравнительны и должны быть связаны с известным химическим раздражителем.

E.4 Данные и отчетность

E.4.1 Данные

Данные, включая результаты положительных и отрицательных контрольных материалов, должны быть суммированы в форме таблицы с указанием балла раздражения для каждого человека после (24  2), (48  2) и (72  2) ч после удаления подушечки и других каких-либо наблюдаемых эффектов.

E.4.2 Оценка/интерпретация данных

Целью данного исследования является определение, представляет ли материал значительную потенциальную опасность кожного раздражения после острого воздействия. Таким образом, если материал вызывает кожное раздражение у добровольцев с частотой, аналогичной положительному контролю, он должен рассматриваться как сильный кожный раздражитель. С другой стороны, если он вызывает частоту кожного раздражения у добровольцев, которая существенно меньше положительного контроля, то он не должен рассматриваться как сильный кожный раздражитель. Является важным, что данные, полученные в контексте ухода за добровольцами, не должны быть спутаны с данными конечной точки, т.е. с данными пропорции субъектов, проявляющих раздражающую реакцию. Также важно не путать индивидуальные различия к кожному раздражению со способностью испытуемого образца вызывать кожное раздражение.

E.4.3 Отчет об исследовании

Для отчета об исследовании необходимо следовать требованиям ISO 14155. Для конкретной отчетности по исследованию раздражения кожи необходимо включить следующую информацию:

a) этические рассмотрения и подтверждения согласия добровольцев;

b) исследуемый материал:

1) физическая природа и, по применимости, физические свойства,

2) идентифицирующие данные;

c) экстрагент:

1) идентификацию и обоснование выбора экстрагента, применяемого для увлажнения твердого исследуемого материала,

d) добровольцы:

1) число добровольцев, участвующих в исследовании,

2) распределение возраста/пола добровольцев;

e) результаты:

1) скорость ответа через 0 ч, (1  0,1) ч до (2  0,2) ч, (24  2) ч, (48  2) ч и (72  2) ч и в другие периоды наблюдения;

2) сведение данных раздражающей реакции для каждого лица на каждый период наблюдения (с суммированной частотой скорости раздражающей реакции при, например, (24  2) ч, (48  2) ч и (72  2) ч после удаления подушечки),

3) описание всех наблюдаемых раздражающих реакций,

4) описание любых других эффектов в дополнение к наблюдаемому раздражению,

5) статистическую обработку результатов (сравнение с положительным контролем, например, используя точный тест Фишера),

6) описание или ссылка на исследование на животных in vitro или in vivo, если таковое проведено до исследования на человеке, включая детали процедуры и данные, полученные из исследуемых и ссылочных материалов;

f) обсуждение результатов;

g) примененный международный стандарт (включая год его публикации);

h) любые отклонения от процедуры;

i) любые наблюдаемые особенности;

j) дату исследования.