Приложение 2. Растворы для разбавлений и питательные среды

Приложение 2
к МУК 4.2.3963-23

Растворы для разбавлений и питательные среды ¹²

------------------------------

¹²_{Примечание: в лабораториях допускается использовать среды и реактивы (в том числе медицинские и ветеринарные препараты) коммерческие, промышленного производства, лабораторного изготовления с характеристиками не хуже указанных в настоящих МР и разрешенных к применению на территории Российской Федерации.}

------------------------------

Солевой (физиологический) раствор

1.1. В 1 л дистиллированной воды растворяют 8,5 г хлорида натрия, устанавливают рН с расчетом, чтобы после стерилизации рН = (7,00,1). Разливают во флаконы, стерилизуют при температуре 121 °C в течение 15 мин. Разливают мерно непосредственно перед посевом.

Срок хранения - до 1 месяца при комнатной температуре. В укупоренном виде.

Пептонный раствор

1.2. В 1 л дистиллированной воды растворяют при кипячении 10,0 г пептона. Устанавливают рН с расчетом, чтобы после стерилизации рН = (7,00,1). Разливают во флаконы. Стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 мин. Разливают мерно непосредственно перед посевом.

Срок хранения - до 1 месяца при комнатной температуре.

Пептонно-солевой раствор

1.3. В 1 л дистиллированной воды растворяют при кипячении 8,5 г хлорида натрия и 1 г пептона. Устанавливают рН с расчетом, чтобы после стерилизации рН = (7,00,1). Стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 мин. Разливают мерно непосредственно перед посевом.

Срок хранения - до 1 месяца при комнатной температуре.

Вода пептонная забуференная

1.4. Состав:

- пептон	10,0 г
- натрий хлористый	5,0 г
- натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный	9,0 г
- калий фосфорнокислый однозамещенный	1,5 г
- вода дистиллированная	1000 см 3

При нагревании компоненты растворяют в воде; рН после стерилизации (7,00,1) при температуре 25 °C. Разливают среду во флаконы, подходящей вместимости. Стерилизуют в течение 15 мин при температуре 121 °C в автоклаве.

Питательный бульон

1.5. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательный бульон (десятикратный) для определения колифагов готовят путем увеличения в 10 раз навески сухого препарата, указанного на этикетке.

Полужидкий питательный агар

1.6. Полужидкий питательный агар готовят с использованием одной трети навески сухого препарата, в соответствии с инструкцией производителя. Разливают в пробирки и автоклавируют при температуре 121 °C в течение 20 мин.

Питательный агар

1.7. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательный агар не допускается выдерживать в расплавленном состоянии более 8 ч. Оставшийся неиспользованным агар повторному расплавлению не подлежит.

Питательный агар для определения колифагов прямым методом при посеве 20 см ³ пробы на чашку Петри готовят, увеличивая навеску сухого препарата на 10 - 15 % от прописи. Разливают в емкости, автоклавируют при температуре 121 °C в течение 20 мин.

ГРМ-агар

1.8. Готовят и хранят по инструкции, указанной на этикетке производителя.

Глюкозо-пептонная среда

1.9. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Для приготовления концентрированной глюкозо-пептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 см ³ в пробирки и по 10 см ³ во флаконы.

Готовую среду стерилизуют при температуре 112 °C в течение 12 мин.

Лактозо-пептонная среда

1.10. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Для приготовления концентрированной лактозо-пептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 см ³ в пробирки и по 10 см ³ во флаконы.

Готовую среду стерилизуют при температуре 112 °C в течение 12 мин.

Среда Эндо

1.11. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Фуксин-сульфитная среда Эндо

1.12. Основная модификация.

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Если на поверхности среды заметны следы влаги, чашки перед посевом необходимо подсушить. Срок хранения чашек со средой не более 2 - 3 суток в темноте, если производителем не оговорены другие сроки.

1.12.1. Повышение дифференцирующих свойств среды.

Для повышения дифференцирующих свойств среды в готовую и охлажденную до температуры 45 - 50 °C среду перед разливом в чашки допускается прибавлять на 100 мл среды 0,2 мл 5 %-го спиртового раствора основного фуксина. Срок хранения раствора фуксина - не более 1 мес.

1.12.2. Модификация среды с добавлением розоловой кислоты.

В случае роста микрофлоры, не относящейся к бактериям кишечной группы, помимо фуксина, допускается добавление на 100 мл среды Эндо 0,2 мл 5 %-го спиртового раствора розоловой кислоты. Срок хранения раствора розоловой кислоты - не более 1 месяца.

Модификацию среды Эндо с добавлением розоловой кислоты используют только при работе методом мембранной фильтрации.

Среда Эндо с розоловой кислотой

1.13. К среде Эндо, помимо фуксина, допускается добавление на 100 мл среды Эндо 0,2 мл 5 %-го спиртового раствора розоловой кислоты. Ингибирует рост микрофлоры, не относящейся к бактериям кишечной группы. Срок хранения раствора розоловой кислоты - не более 1 месяца.

Лактозный агар с тергитолом-7 и ТТХ

1.14. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Готовую среду охлаждают на водяной бане до 45 - 50 °C и добавляют приготовленного на стерильной дистиллированной воде 5 см ³ 0,05 % водного раствора ТТХ на 100 см ³ основной среды. Хорошо перемешивают и разливают в чашки слоем не менее 5 мм.

Раствор ТТХ и питательная среда устойчивы в течение недели при температуре 2 - 8 °C в защищенном от света месте.

Хромокульт колиформ агар

1.15. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Нагревают на кипящей водяной бане, периодически помешивая, до полного растворения в течение 35 мин. Не автоклавировать, не перегревать. Готовую среду охлаждают до 45 - 50 °C и разливают в чашки Петри.

Питательная среда устойчива в течение 2 недель при температуре 2 - 8 °C в защищенном от света месте. Для предотвращения от высыхания поместить чашки со средой в пластиковые мешки.

Лактозный бульон с борной кислотой

1.16. Растворяют в 1 л дистиллированной воды:

- пептона	10 г;
- калия фосфорнокислого двузамещенного (безводного)	12,2 г;
- калия фосфорнокислого однозамещенного (безводного)	4,1 г;
- борной кислоты 13	3,2 г;
- лактозы	5,0 г.

------------------------------

¹³_{Примечание: каждую новую партию борной кислоты следует испытывать; при выращивании  Е. coli при температуре 44 °С среда дает положительную реакцию - помутнение и газ.}

------------------------------

После растворения всех ингредиентов при нагревании, среду остужают до комнатной температуры и разливают по 5 см ³ в пробирки с поплавками или комочками ваты, стерилизуют при температуре 112 °C в течение 12 мин.

Срок хранения не более 2 недель.

Среда с триптофаном

1.17. Растворяют в 1 л дистиллированной воды:

- ферментативного пептона	10,0 г;
- хлористого натрия	5,0 г;
- триптофана растворяют	1,0 г.

Устанавливают рН - 7,2, разливают в стерильные пробирки и автоклавируют при температуре (1202) °C в течение 20 мин.

Питательная среда для селективного определения колиформных бактерий и Е. coli сухая (ЕС - бульон)

1.18. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу, глюкозу до кислоты и газа и образовывать индол

Полужидкая среда с глюкозой из сухого препарата

2.1. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Срок хранения не более 2 недель при комнатной температуре. В холодильнике не хранить.

Посев производят уколом до дна пробирки. Полужидкие среды позволяют улавливать небольшое количество газа и на ранних стадиях ферментации, что повышает чувствительность метода и скорость получения ответа через 4 - 6 ч.

Триптонный агар с желчью и Х-глюкуронидом

2.2. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательная среда устойчива в течение 4 недель при температуре 2 - 8 °C в защищенном от света месте. Для предотвращения от высыхания поместить чашки со средой в пластиковые мешки.

Триптон-желчный агар (ТЖА)

2.3. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Неселективный триптон-соевый агар (ТСА)

2.4. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Коммерческая среда ЕС-бульон (селективная) для обнаружения и определения количества бактерий E. Coli

2.5. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Среда с хлоридом трифенилтетразола (ТТХ)

2.6. Состав:

- пептон	2,0 г;
- дрожжевой экстракт (из пекарских дрожжей)	15,0 см 3 или сухого 0,3 г;
- двузамещенный фосфат калия	0,2 г;
- ТТХ	0,8 г;
- воды дистиллированной	до 100,0 см 3.

Стерилизация при 0,5 атм. в течение 15 минут.

10 % водный раствор ТТХ в дистиллированной воде.

Щелочно-полимиксиновая среда (ЩЕС)

2.7. Состав (обычная концентрация):

1) раствор 1:
- мясопептонный бульон	70,0 см 3;
- натрий хлористый	0,5 г;
- глюкоза	1,0 г;
- дрожжевой экстракт	2,0 см 3 (или 2 г).
2) раствор 2:
- вода дистиллированная	15,0 см 3;
- натрий углекислый	0,53 г.
3) раствор 3:
- вода дистиллированная	10,0 см 3;
- натрий двууглекислый	0,25 г.

Состав (удвоенная концентрация):

Растворы 1, 2 и 3 стерилизуют раздельно при температуре 112 °C в течение 12 мин. После стерилизации растворы смешивают, проверяют рН 10,0 - 10,2, прибавляют 20000 единиц полимиксина М, 0,5 см ³ 1,6 %-го спиртового раствора бромтимолового синего, разливают в пробирки по 5 см ³.

1) раствор 1:
- мясопептонный бульон	70,0 см 3;
- натрий хлористый	1,0 г;
- глюкоза	2,0 г;
- дрожжевой экстракт	4,0 см 3 (или 4 г).
2) раствор 2:
- вода дистиллированная	15,0 см 3;
- натрий углекислый	1,1 г.
3) раствор 3:
- вода дистиллированная	10,0 см 3;
- натрий двууглекислый	0,5 г.

В среду удвоенной концентрации добавляют 40000 единиц полимиксина М и 1 см ³ бромтимолового синего. Разливают в колбы или флаконы по 10, 50 и 100 см ³ соответственно количеству исследуемой воды.

Молочно-ингибиторная среда (МИС)

2.8. Готовят 2,5 %-й мясопептонный агар. К 85 см ³ готового питательного агара, охлажденного до температуры 45 - 50 °C, добавляют 15 см ³ стерильного обезжиренного (0,5 % жирности) молока, 1,25 см ³ 0,01 %-го водного раствора кристаллического фиолетового, 1 см ³ 2 %-го водного раствора теллурита калия (рН 7,00,2).

Все хорошо смешивают и разливают тонким слоем в чашки Петри.

Азидная среда Сланеца-Бертли

2.9. Сухой питательный агар промышленного производства готовят по указанию на этикетке, 4 г калия фосфорнокислого однозамещенного расплавляют при нагревании в 1000 см ³ дистиллированной воды, устанавливают рН 7,0, разливают мерно в емкости, стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 мин.

Перед употреблением в расплавленный и слегка остуженный агар добавляют из расчета на 100 см ³ среды:

- дрожжевого экстракта	2,0 см 3;
- глюкозы	1,0 г;
- азида натрия	0,04 г.

1 %-го водного раствора 2,-3,-5-трифенил тетразолий хлорида (ТТХ) 1 см ³.

Тщательно смешивают, разливают в чашки по 20 - 25 см ³. Хранят в холодильнике не более 2 недель. Среду можно готовить перед употреблением без стерилизации в автоклаве.

Допускается использование коммерческой среды Сланеца-Бертли.

Питательная среда для выделения энтерококков сухая - энтерококкагар

2.10. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Навеску тщательно размешивают в 1 дм ³ воды дистиллированной, доводят до кипения и кипятят при постоянном помешивании в течение 1 мин, быстро охлаждают до температуры 45 - 50 °C и разливают в чашки Петри.

Минимальное время воздействия высокой температуры при приготовлении среды необходимо из-за наличия в среде ТТХ, который разлагается при нагревании.

Желчь-эскулин-азидный агар

2.11. Приготовление среды проводят из готового препарата в соответствии с инструкцией производителя. После приготовления среду охлаждают, медленно выливают в стерильные чашки Петри слоем 3 - 5 мм и оставляют для остывания на горизонтальной поверхности. Срок хранения - не более 14 сут в защищенном от света месте при температуре (53) °C.

Питательный агар со стрептомицином

2.12. Питательный агар со стрептомицином (или стрептомицина сульфатом для инъекций (англ. Streptomyсini sulfas pro injectionibus)) готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1 см ³ питательного агара, приготовленного по стандартной прописи. Раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 см ³ готовят с использованием стерильной дистиллированной воды с соблюдением правил асептики. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры 45 - 50 °C, вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0,1 см ³ на 10 см ³ питательного агара. Разливают в пробирки для приготовления, скошенного агара.

Срок хранения питательного агара со стрептомицином не более 2 недель. Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.

Желточно-солевой агар (ЖСА)

2.13. Сухой питательный агар по прописи производителя и 65 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 1000 см ³ дистиллированной воды (рН 7,2 - 7,4), разливают мерно в емкости, стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 мин. Перед употреблением в расплавленный и остуженный до 50 - 55 °C солевой агар прибавляют один стерильно приготовленный яичный желток, тщательно смешанный с 50 см ³ физиологического раствора с помощью стеклянных бус, перемешивают и разливают в чашки Петри тонким слоем по 12 - 15 см ³ для подтверждающего этапа или толстым слоем по 20 - 25 см ³ для выращивания на мембранных фильтрах.

Яично-желточно-солевой агар

2.14. 1 дм ³ мясопептонного агара перед анализом расплавляют и растворяют в нем 95 г хлористого натрия, охлаждают до температуры 45 - 50 °C и добавляют 100 см ³ яично-желточной взвеси. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

Чашки хранят в холодильнике не более 5 суток. Применяют для культивирования стафилококков.

Стафилококкагар

2.15. Сухой препарат промышленного производства (стафилококкагар) как солевую основу готовится по способу, указанному на этикетке производителя, с последующим добавлением желточной взвеси.

Среда Байрд-Паркера

2.16. Состав:

- пептон из казеина	10,0 г;
- мясной экстракт	5,0 г;
- экстракт дрожжей	1,0 г;
- пируват натрия	10,0 г;
- глицин	12,0 г;
- хлорид лития	5,0 г;
- агар-агар	15,0 г.

Приготовление: растворить ингредиенты в 0,95 дм ³ воды, автоклавировать при температуре 121 °C в течение 15 минут, охладить до 45 - 50 °C и влить 50 см ³ яично-желтковой эмульсии с теллуритом, при необходимости внести сульфаметазин в количестве 50 мг/дм ³. рН (7,00,2) при температуре 25 °C. Среду разлить в чашки. Чашки имеют молочный отлив и желтовато-коричневый цвет. Хранить при температуре 4 °C до 1 месяца.

Железо-сульфитный агар

2.17. В 1000 см ³ стерильного расплавленного питательного агара добавляют 10,0 г глюкозы, нагревают до растворения, разливают мерно во флаконы, автоклавируют при температуре 112 °C в течение 12 минут (основная среда).

20 %-й раствор сульфита натрия (Na ₂SO ₃) и 8 %-й раствор железа сернокислого закисного (FeSO ₄) или железа хлористого (FeCl ₂) готовят непосредственно перед употреблением в стерильной посуде на стерильной дистиллированной воде.

Раствор сульфита натрия нагревают до полного растворения. Перед выполнением исследования в 100 см ³ расплавленной основной среды вносят 5 см ³ 20 %-го раствора сульфита натрия, перемешивают, затем вносят 1 см ³ 8 %-го раствора сернокислого железа, перемешивают и стерильно разливают в пробирки высоким столбиком 12 - 15 см для работы методом мембранной фильтрации или во флаконы для работы методом прямого посева.

Допускается использование коммерческой среды.

Агар для клостридий (усиленный)

2.18. Состав:

- мясной экстракт	10,0 г;
- декстроза	5,0 г;
- дрожжевой экстракт	3,0 г;
- растворимый крахмал	1,0 г;
- бактериологический агар	12,5 г;
- пептон	10,0 г;
- хлорид натрия	5,0 г;
- ацетат натрия	3,0 г;
- L-цистеина гидрохлорид	0,5 г.

Конечная величина pH (6,80,2) при температуре 25 °C. Развести 50 г среды в 1 литре дистиллированной воды. Хорошо перемешать и нагреть. Часто помешивая, довести до кипения. Кипятить в течение минуты до полного растворения. Разлить в емкости и стерилизовать 15 минут при температуре 121 °C. Охладить до 45 - 50 °C и при необходимости добавить 0,02 г/л полимиксина B в виде стерильного отфильтрованного раствора. Готовая среда имеет светло-янтарный цвет, слегка опалесцирует, должна храниться при температуре 8 - 15 °C.

Модифицированная среда для выделения клостридий

2.19. Состав (на 1 л дистиллированной воды):

- нутриент агар	23 г;
- казеиновый пептон	15 г;
- сульфит натрия	1 г;
- дрожжевой экстракт	10 г;
- сульфат железа	0,5 г;
- декстроза	5 г;
- L-цистеин	0,5 г;
- бриллиантовый зеленый 0,1 %-ный водный раствор	1 см 3.

Агар триптозо-сульфит-циклосериновый

2.20. Основу питательной среды готовят следующим образом: 15,0 г триптозы, 5,0 г ферментативного пептона, 25 см ³ дрожжевого экстракта, 1,0 г безводного тиосульфита натрия, 1,0 г цитрата аммонийного железа, 20,0 г агара растворяют в 1 дм ³ кипящей дистиллированной воды. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °C (7,60,1). Основу среды стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 минут и хранят при температуре (42) °C не более 14 сут.

К 100 см ³ основы, расплавленной и охлажденной до температуры 45 - 50 °C, добавляют непосредственно перед употреблением 1 см ³ раствора массовой концентрацией циклосерина 40 г/дм ³. Допускается при отсутствии триптозы заменять ее равным количеством ферментативного пептона.

Агар сульфит-полимиксин-неомициновый

2.21. Основу питательной среды готовят следующим образом: 17,0 г ферментативного пептона, 15 см ³ дрожжевого экстракта, 5,0 г хлорида натрия, 1,0 г безводного тиосульфита натрия, 1,0 г цитрата аммонийного железа, 12,0 - 15,0 г агара добавляют к 1 дм ³ дистиллированной воды. Смесь, периодически перемешивая, подогревают до кипения и кипятят до полного растворения всех составных частей. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он соответствовал при температуре (251) °C (7,60,1). Стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 минут. Основу среды хранят при температуре (42) °C не более 14 сут.

К 1 дм ³ основы, расплавленной и охлажденной до температуры (45 - 50) °C, непосредственно перед употреблением добавляют 1 см ³ раствора массовой концентрации неомицина сульфата 50 г/дм ³ или 5 см ³ раствора массовой концентрации неомицина сульфата 10 г/дм ³ (50 мкг/см ³ основы среды) и 8 см ³ раствора массовой концентрации полимиксина 2,5 г/дм ³ или 4 см ³ раствора массовой концентрацией полимиксина 5 г/дм ³ (20 мкг/см ³ основы среды).

Среда Мюллера-Кауфмана

2.22. В 500 см ³ исследуемой воды вносят:

- 10 %-го пептона	25 см 3;
- желчных солей	0,5 г;
- кальция углекислого	5,0 г;
- натрия тиосульфата	15,0 г;
- 0,1 %-го водного раствора бриллиантового зеленого	0,5 см 3;
- раствора Люголя	10 см 3.

Для приготовления раствора Люголя в 10 см ³ воды вносят 3,0 г йода кристаллического и 2,5 г калия йодистого.

Селенитовая среда Лейфсона

2.23. Готовят из сухого препарата промышленного производства по указанию на упаковке.

Для приготовления селенитового бульона двойной концентрации увеличивают навеску сухого препарата в два раза на тот же объем дистиллированной воды.

Магниевая среда

2.24. Используют три способа приготовления магниевой среды: среда обычной или двойной концентрации, экспедиционная модификация и среда готовая к применению в соответствии с Инструкцией производителя.

Магниевую среду обычной и двойной концентрации готовят лабораторным способом.

При приготовлении среды обычной и двойной концентрации готовят раздельно растворы А, Б, В по нижеследующей прописи (табл. 2.1):

Таблица 2.1

Растворы	Ингредиенты	Обычная концентрация на 1000 см 3	Удвоенная концентрация на 100 см 3
А	Пептон ферментативный	4,2 г	0,84 г
	Натрий хлористый	7,0 г	1,4 г
	Калий фосфорнокислый однозамещенный	1,5 г	0,3 г
	Дрожжевой экстракт жидкий или сухой	22,0 см 3 5,0 г	4,4 см 3 1,0 г
	Вода дистиллированная	890,0 см 3	89,0 см 3
Б	Магний хлористый кристаллический	36,0 г	7,2 г
	Вода дистиллированная	90,0 см 3	9,0 см 3
В	Бриллиантовый зеленый 0,1 %-й водный раствор	5,0 см 3	1,0 см 3

Твердые фракции среды растворов А и Б вносят в дистиллированную воду, растворяют, кипятят в течение 10 мин. Затем растворы А, Б и В сливают в одну колбу.

Наилучшие результаты дает посев воды в магниевую среду по экспедиционной методике в оригинальной прописи и модификации.

Навески и растворы ингредиентов среды предварительно готовят в расфасованном виде, которые затем вносят в исследуемую воду в соответствии с нижеследующей прописью (табл. 2.2):

Таблица 2.2

Ингредиенты на 500 см 3 пробы воды	На 500 см 3 пробы воды	На 100 см 3 пробы воды
1	2	3
Магний хлористый кристаллический	19,5 г	3,9 г
Натрий хлористый	4,0 г	0,8 г
Калий фосфорнокислый однозамещенный безводный	0,8 г	0,16 г
10 %-й раствор пептона	25,0 см 3	5,0 см 3
Дрожжевой экстракт, приготовленный из пекарских дрожжей (жидкий) или сухой препарат	11,0 см 3 2,5 см 3	2,5 см 3 1,0 г
Бриллиантовый зеленый - 0,1 %-й водный раствор	2,5 см 3	0,5 см 3

Каждую навеску ингредиента вносят последовательно после полного растворения предыдущего в небольшой объем исследуемой воды около 200 - 300 см ³ по одному до полного растворения. После внесения всех ингредиентов в емкость вносят оставшийся объем исследуемой воды и тщательно перемешивают.

С целью ускорения и упрощения посева воды все ингредиенты магниевой среды (кроме дрожжевого экстракта) можно заранее внести в стерильную емкость объемом 500 см ³ и хранить при температуре 2 - 5 °C (в течение 5 - 6 ч происходит самостерилизация смеси). Если плотно закрыть емкость, смесь можно хранить при комнатной температуре в течение 5 - 7 суток. Дополнительная стерилизация не требуется. В день посева на сальмонеллы в каждую емкость с ингредиентами вносят соответствующий объем исследуемой воды, тщательно перемешивают, до полного растворения всех ингредиентов и добавляют дрожжевой экстракт.

Среду готовую к применению используют в соответствии с инструкцией производителя.

Магниевая среда накопления для выделения сальмонелл полевая модификация

2.25. Состав:

- магний хлористый кристаллический	19,5 г;
- натрий хлористый	4,0 г;
- калий фосфорнокислый однозамещенный безводный	0,8 г;
- 10 %-й раствор пептона	25,0 см 3.
Дрожжевой экстракт:
- жидкий из пекарских дрожжей 11,0 см 3 или сухой препарат	2,5 г;
- бриллиантовый зеленый 0,1 %-й водный раствор	2,5 см 3.

Каждый ингредиент (в виде навески или раствора) из указанных выше вносят последовательно в стеклянную емкость, содержащую 500 см ³ анализируемой воды по одному после полного растворения предыдущего.

Допускается использование стерильных емкостей, в которые в условиях стационарной лаборатории внесены сухие ингредиенты и растворы.

Среды в емкости допускается хранить в течение 7 сут.

Питательная среда для сальмонелл РНС

2.26. Состав:

- экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) (ФСП 42-0010-5883-04) или другой, соответствующий требованиям ФСП 42-0010-5883-04	5,0 г;
- калий фосфорнокислый однозамещенный	8,8 г;
- натрия гидроксид	(1,40,1) г;
- водорастворимый бриллиантовый зеленый	0,005 г;
- водорастворимый кристаллический фиолетовый	0,001 г;
- вода очищенная	до 1000 см 3.

Компоненты среды растворяют в воде нагреванием. Среду разливают во флаконы, стерилизуют при температуре 112 °C в течение 15 мин. Питательная среда представляет собой стерильную, прозрачную жидкость зеленого цвета, рН среды от 6,4 до 6,8, аминный азот от 0,05 до 0,1 %, обеспечивает рост тест-штаммов сальмонелл при посеве единичных клеток.

Дифференциально-селективная питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл сухая (ГЕКТОЕНАГАР)

2.27. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Ксилоза лизин дезоксихолатный агар (XLD агар)

2.28. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Дезоксихолат-цитратный агар

2.29. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Тетратионатная среда накопления по Preuss

2.30. К 1000 см ³ мясопептонного бульона добавляют 5 см ³ 0,1 %-го водного раствора кристаллического фиолетового, стерилизуют при температуре 112 °C в течение 12 мин. После охлаждения добавляют 20,0 г тетратионата калия, устанавливают рН 6,5. Среду разливают в стерильные емкости размера, необходимого для последующего посева.

Срок хранения - до одной недели при температуре 4 °C.

Висмут-сульфит агар

2.31. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

До посева чашки со средой выдерживают в холодильнике не менее 24 ч.

Агар с эозиновым метиленовым синим (ЭМС/ среда Левина-ГРМ)

2.32. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Бактоагар Плоскирева

2.33. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Хромогенная дифференциально-диагностическая среда Рамбах-агар для обнаружения сальмонелл

2.34. Среду готовят из сухого препарата в соответствии с инструкцией производителя. Приготовленную и охлажденную до температуры 45 - 50 °C среду после тщательного перемешивания разливают в стерильные чашки Петри. Разлитая среда не должна содержать следов влаги на поверхности. Срок хранения чашек Петри со средой в стерильных светоизолированных упаковках (например, пеналах или обернутыми плотной стерильной бумагой) при температуре 4 - 10 °C - не более 7 суток.

Селективный бульон для бактерий рода Shigella

2.35. Состав:

- гидролизат казеина ферментативный	20,0 г;
- натрий хлористый	5,0 г;
- калий фосфорнокислый двузамещенный	2,0 г;
- калий фосфорнокислый однозамещенный	2,0 г;
- глюкоза	1,0 г;
- твин 80	1,5 г;
- вода	1000 см 3.

Компоненты растворяют в воде нагреванием, устанавливают рН, чтобы после стерилизации он составлял (7,00,2) при температуре 25 °C. Среду разливают во флаконы, стерилизуют при температуре 112 °C в течение 15 мин, охлаждают до температуры 45 - 50 °C и асептически добавляют на 1 дм ³ среды 5 см ³ раствора селенитовой добавки (новобиоцин 55 мг в 5 см ³ стерильной воды) для подавления роста грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий.

Сальмонелла/шигелла агар с дезоксихолатом натрия и хлоридом кальция (SSDC)

2.36. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Хранят в темном месте 1 неделю при температуре (82) °C в пластиковом пакете. Не следует охлаждать до температуры (32) °C, так как в среде образуется осадок и ухудшаются ее характеристики.

Питательные среды обогащения для выделения Pseudomonas aeruginosa

Минеральная среда Бонде нормальной концентрации

3.1. Состав:

- трехзамещенный фосфат натрия	0,28 г;
- фосфат натрий-аммония	0,15 г;
- однозамещенный фосфат калия	0,1 г;
- сульфат магния	0,02 г;
- дистиллированной воды	до 100,0 см 3.

Стерилизация при 1 атм в течение 20 минут.

Непосредственно перед посевом прибавить 2,0 см ³ 0,01 % водного раствора кристаллического фиолетового.

Концентрат среды Бонде.

Все компоненты, кроме воды, добавляют в 10-кратном размере. Концентрат прибавляется к объекту в соотношении 1:10.

Селективно-дифференциальная среда второго этапа - среда "Блеск"

3.2. Состав:

- мясопептонный стерильный агар 2 %	100 см 3;
- молоко нормализованное стерильное	10,0 см 3;
- 10 % водного раствора ТТХ	8,0 см 3;
- L-аргинин гидрохлорид	0,3 г.

В расплавленный МПА прибавить аргинин, раствор ТТХ (самостерилизуется после хранения при комнатной температуре в течение 2 - 3 дней) и стерильное снятое молоко. Все размешать и разлить в 6 - 7 чашек Петри.

При отсутствии мясопептонного агара возможно применение упрощенного варианта среды "блеск":

- вода дистиллированная

100,0 см 3.

Сухой питательный агар по прописи на этикетке.

Стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 минут. Внести: стерильного снятого молока 10,0 см ³ и 10 % водного раствора ТТХ 8,0 см ³. Смешать и разлить в 6 - 7 чашек Петри.

Среда Кинг-А

3.3. Состав:

- пептон	2,0 г;
- агар	1,5 г;
- глицерин	1,0 г;
- сульфат калия	1,0 г;
- хлорид магния	0,14 г;
- вода дистиллированная	до 100 см 3.

РН среды 7,2. Стерилизация при 0,5 атм. в течение 15 минут. Разлить в 6 - 7 чашек Петри.

Среда для определения теста Хью и Лейфсона (окисление, ферментация глюкозы). Модификация в одной пробирке

3.4. Состав:

- пептон ферментативный	2,0 г;
- хлорид натрия	5,0 г;
- глюкоза	5,0 г;
- K 2НРО 4	0,3 г;
- агар-агар	4 - 6 г;
- 1,6 % раствор фенолового красного	2,5 см 3;
- вода дистиллированная	1000 см 3.

После растворения всех ингредиентов на водяной бане, доводят рН до (7,1 - 7,2), стерилизуют при температуре 112 °C в течение 20 минут в автоклаве, разливают в пробирки высотой столбика 6 см (независимо от диаметра пробирки), остужают столбиком.

Питательная среда для селективного выделения псевдомонад сухая (Цетримидная)

3.5. Состав:

- аептон из желатина	20,0 г;
- хлористый магний	1,4 г;
- сульфат калия	10,0 г;
- цетримид	0,3 г;
- агар-агар	13,0 г;
- глицерин	10 см 3.

Растворяют 44,5 г/дм ³ воды, добавляют 10 см ³ глицерина на 1 дм ³ бульона. Дают среде набухнуть в течение 20 - 30 минут. Затем автоклавируют в течение 15 минут при температуре 121 °C, разливают в чашки. рН (7,00,2) при температуре 25 °C. Среда в чашках мутная, светло-коричневая.

Легионелбакагар

3.6. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Компоненты основы среды БУДРАГ (на 1 литр)

3.7. Состав:

- дрожжевой экстракт	10,0 г;
- агар	13,0 г;
- активированный уголь	2,0 г;
- б-кетоглютаровой кислоты калийная соль	1,0 г;
- ACES-буфер, рН 6,9	10,0 г;
- 1 М раствор KOH	40 см 3;
- глицин	3,0 г.
Компоненты ростовой добавки (на 1 литр):
- L-цистеин	0,4 г;
- пирофосфат железа растворимый	0,25 г.
Компоненты селективной добавки (на 1 литр):
- полимиксин В	80 000 ед;
- ванкомицин	5 см 3;
- циклогексимид	80 см 3.

Приготовление кислотного KCI-HCI буфера: к 39 см ³ 0,4 М раствора HCI добавляют 250 см ³ 0,4 М раствора KCI. С помощью 1 М раствора KOH доводят значение рН буфера до 2,2. Хранят в темном флаконе при температуре плюс 4 °C не более 1 месяца.

Приготовление среды: к навеске ACES-буфера добавить 500 см ³ дистиллированной воды и выдержать на водяной бане при температуре 50 °C, помешивая до полного растворения. К 440 см ³ дистиллированной воды добавить 40 см ³ 1 М раствора KOH.

Оба раствора осторожно смешать и полученным раствором залить смесь навесок агара, дрожжевого экстракта, активированного угля, калийной соли б-кетаглютаровой кислоты и глицина. Смесь выдержать на водяной бане при температуре 50 °C, осторожно помешивая до полного растворения всех компонентов. Среду автоклавируют при температуре 121 °C в течение 15 минут.

После стерилизации среду охлаждают до 50 °C и добавляют с соблюдением правил асептики компоненты ростовой и селективной добавки.

Каждую навеску L-цистеина и пирофосфата железа растворимого вносят в 10 см ³ дистиллированной воды, стерилизуют фильтрацией через мембранный фильтр и добавляют в среду.

Концентрированные растворы препаратов (селективные добавки также добавляют в среду до требуемой конечной концентрации).

РН готовой среды (6,950,02). Среду разливают в стерильные чашки Петри по 25 см ³ и подсушивают в термостате при температуре 37 °C в течение ч. Готовая среда имеет характерный черно-серый цвет.

В качестве контрольной среды, не поддерживающей рост легионелл, используют среду Будраг без добавления селективной и ростовой добавки. Для пересева колоний легионелл и дальнейшего культивирования, используют среду Будраг с ростовой, но без селективной добавки.

Селективный агар Престона

3.8. Состав основы среды:

- пептон	10,0 г;
- мясной экстракт	10,0 г;
- натрия хлорид	5,0 г;
- агар-агар	12,0 г.

Вода дистиллированная 1000,0 см ³ рН (при температуре 25 °C (7,50,2)).

Растворить основные компоненты в дистиллированной воде. При необходимости довести до кипения для полного растворения частиц. Установить рН (7,50,2) с помощью 0,1 н HCl или 0,1 н NaOH. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин. Остудить до 45 - 50 °C.

Приготовление полной среды: перед использованием в 1000 см ³ расплавленного и остуженного до 45 - 50 °C агара асептически добавить 70 см ³ стерильной дефибринированной крови барана; растворенное в 50 %-м растворе ацетона содержимое двух флакончиков с добавкой антибиотиков для кампилобактерий IV (по Престону) или I (по Блейзер-Вонг), или растворенное в 50 % растворе этанола содержимое двух флакончиков с селективной ростовой добавкой для кампилобактерий, или 4 см ³ аэротолерантной добавки, тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри слоем 4 - 5 мм.

Селективные бульоны Престона, Дойла, Мюллера-Хинтона

3.9. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательная среда для культивирования кампилобактерий, сухая - кампилобакагар

3.10. 40 г сухой среды размешать в 1 л дистиллированной воды, довести до кипения и кипятить 2 - 3 минуты до полного растворения.

Среду разлить по 400 см ³ в колбы и стерилизовать автоклавированием 20 минут при температуре 121 °C. В остуженную до температуры 50 - 55 °C питательную основу среды вносят FBP-добавки для повышения аэротолерантности и 20 см ³ бараньей или донорской крови и разливают в чашки Петри по 15 - 20 см ³. Для придания среде селективных свойств используют селективные смеси.

FBP-добавки (указанное количество добавок рассчитано на 1 дм ³ питательной среды):

- железа сульфат II	0,25 г;
- натрий пиросернистокислый (метабисульфит)	0,25 г;
- натрий пировинограднокислый (пируват)	0,25 г.

Навески солей внести в сухую стерильную пробирку, добавить 5 см ³ стерильной дистиллированной воды, периодически встряхивать в течение 15 - 20 минут. Приготовленный раствор имеет оливковый цвет, не подлежит хранению и должен быть использован в день приготовления.

Бульон, содержащий пептон, сорбит, желчные соли (PSB)

3.11. Состав:

- ферментативный гидролизат казеина	5,0 г;
- сорбит	10,0 г;
- натрий хлорид	5,0 г;
- натрий фосфорнокислый двузамещенный	8,23 г;
- натрий фосфорнокислый однозамещенный	1,2 г;
- желчные соли	1,5 г;
- вода дистиллированная	1000 см 3.

Растворяют компоненты в воде, разливают необходимый объем в колбы, стерилизуют 15 мин при температуре 121 °C. После стерилизации рН = (7,60,2) при температуре 25 °C.

Агар МакКонки-ГРМ

3.12. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательный бульон для выделения листерий сухой (ПБЛ-1)

3.13. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Селективный бульон для обогащения листерий сухой (Бульон UVM)

3.14. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Селективный бульон Фрейзера для обогащения листерий сухой

3.15. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательный агар для селективного выделения и идентификации листерий сухой (ПАЛКАМ-агар)

3.16. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Листерия агар (базовый) acc. OTTAVIANI and AGOSTI

3.17. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Жидкая среда Сабуро

3.18. Состав:

- пептона	10,0 г;
- глюкозы	40,0 г;
- вода дистиллированная	1000 см 3.

Для приготовления концентрированной среды Сабуро все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, смесь подогревают, периодически помешивая, до расплавления составных частей, охлаждают до 45 - 55 °C, устанавливают рН 5,60,2, разливают по 10 см ³ в емкости. Стерилизуют в автоклаве при температуре 112 °C в течение 15 минут.

Плотная среда Сабуро (агаризованная, основа среды)

3.19. Состав:

- пептона	10,0 г;
- глюкозы	40,0 г;
- агар-агар	18,0 г;
- вода дистиллированная	1000 см 3.

рН 6,51

Среда Сабуро агаризованная с антибиотиками группы пенициллина и стрептомицина

3.20. К 1 дм ³ основы среды Сабуро добавляют 1 или 0,5 см ³ раствора антибиотика группы пенициллина, соответственно 50000 или 100000 Ед, затем к среде добавляют 0,4 см ³ раствора антибиотика группы стрептомицина массовой концентрацией 100 г/дм ³.

Питательная среда N 2 (агар Сабуро)

3.21. Готовят и хранят из сухого препарата промышленного производства по прописи на этикетке. Применяют для выделения грибов.

Селективный питательный агар для выделения и учета дрожжевых и плесневых грибов с хлорамфениколом

3.22. Готовят и хранят из сухого препарата промышленного производства по прописи на этикетке.

Хромогенная среда для выделения и дифференциации Candida

3.23. Готовят и хранят из сухого препарата промышленного производства по прописи на этикетке. Применяют для выделения и идентификации грибов C. albicans, C. tropicalis, C. krusei.

Рисовый агар

3.24. Состав:

- рис	20,0 г;
- агар-агар	20,0 г;
- вода дистиллированная	1000 см 3.

Рис в зернах измельчают в ступке и заливают 500 см ³ дистиллированной воды, стерилизуют текучим паром 45 минут, отстаивают, фильтруют через 4 слоя марли. Осадок не отжимают. Агар-агар растворяют в 500 см ³ дистиллированной воды, фильтруют. Фильтрат агара смешивают с фильтратом риса и доводят дистиллированной водой до 1 литра. Стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 минут, разливают в чашки Петри.

Кукурузный агар

3.25. Состав:

- настой кукурузной муки	50,00 г/дм 3;
- агар-агар	15,00 г/дм 3.

Конечное значение рН (при температуре 25 °C) 6,00,2.

Гомогенный сыпучий светло-желтый грубый порошок. Готовая среда имеет светло-янтарную окраску, опалесцирует, по плотности соответствует 1,5 % агаровому гелю. Порошок хранить при температуре ниже плюс 25 °C. Готовую среду хранить при температуре плюс 2 - 8 °C.

Или готовят и хранят из сухого препарата промышленного производства по прописи на этикетке.

Реактивы для оксидазного теста

3.26. Вариант 1. Раствор 1 %-водный тетраметил-п-фенилендиамина гидрохлорида. Готовят перед употреблением.

Вариант 2. Реактив 1 - 1 %-й спиртовой -нафтола. Реактив 2 - 1 %-й водный диметил-п-фенилендиамина дигидрохлорида. Реактивы являются канцерогенными. Работу по приготовлению реактивов следует выполнять в вытяжном шкафу, используя защитные перчатки и избегая контакта реактива с кожей.

Растворы сохраняют в темных флаконах с притертыми пробками: первый - до одного месяца, второй - до одной недели.

Перед употреблением к 2,5 частям первого раствора добавляют 7,5 частей второго раствора.

Каждую новую партию, а также периодически раз в месяц реактивы или тест-системы на оксидазу следует испытывать с тест-культурами микроорганизмов, дающих положительную (P. aeruginosa, P. fluorescens) и отрицательную (Е. coli) оксидазную реакцию.

Реактив Ковача

3.27. Растворяют 5 г пара-диметиламинобензальдегида в 75 см ³ амилового спирта на водяной бане при температуре 60 °C. Затем медленно добавляют 25 см ³ концентрированной соляной кислоты. Приблизительно через 6 ч, после изменения цвета, реактив готов для употребления. Цвет готового реактива должен быть от светло-желтого до светло-коричневого. При использовании некачественного амилового спирта реактив может приобрести темный цвет.

Реактив следует хранить при температуре 4 °C в темном месте во флаконе из коричневого стекла. Срок хранения - две недели.

Среда Кларка

3.28. Состав:

- пептон	5,0 г;
- глюкоза	5,0 г;
- фосфорнокислый двузамещенный калий (K 2НРО 4)	5,0 г;
- вода	1000 см 3.

При нагревании растворяют компоненты в воде, затем охлаждают до температуры 45 - 47 °C и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °C (7,20,1). Среду разливают по 5 - 7 см ³ в пробирки и стерилизуют при температуре 121 °C в течение 15 мин или дробным методом - текучим паром по 30 мин три дня подряд.

Желчная соль по Олькеницкому

3.29. К 1000 см ³ желчи крупного рогатого скота прибавляют 40 г натрия гидрата окиси, гидролизуют в автоклаве при температуре 120 °C в течение 3 ч или 2 раза по 2 ч в эмалированной или стеклянной посуде, исключая алюминиевую.

После охлаждения в гидролизат прибавляют 100 см ³ 20 %-го водного раствора бария хлористого и прогревают в автоклаве при 100 °C 1 ч. Через 18 - 24 ч отстаивания надосадочную жидкость сливают и фильтруют.

К профильтрованному гидролизату прибавляют при постоянном помешивании 20 %-й раствор соляной кислоты до кислой реакции (рН 6,4 - 6,6) и оставляют на 18 - 24 ч.

Надосадочную жидкость сливают, осадок промывают водой, прибавляют при нагревании 40 %-й раствор натрия гидрата окиси до слабо щелочной реакции (рН 7,2 - 7,4) и выливают на противень для подсушивания в сушильном шкафу при температуре 115 °C до порошкообразного состояния. Из 1000 см ³ желчи можно получить 36 г смеси желчных солей. Следует остерегаться перещелачивания при последней операции.

Хранят соли в темной банке с притертой пробкой.

Жидкий дрожжевой экстракт

3.30. 1000 г (1 кг) прессованных (пекарских) дрожжей равномерно распределяют в 2000 см ³ дистиллированной воды, прогревают в автоклаве при температуре 100 °C в течение 30 мин, охлаждают и отстаивают в холодильнике при температуре 2 - 5 °C. Через 4 - 5 суток надосадочную жидкость осторожно сливают в стерильные емкости по 50 - 100 см ³, на каждые 100 см ³ экстракта прибавляют 1,25 см ³ 0,01 %-го водного раствора кристаллического фиолетового и повторно прогревают в автоклаве при температуре 100 °C в течение 30 мин. Готовый дрожжевой экстракт хранят в холодильнике при температуре 2 - 5 °C.

Можно применять сухой дрожжевой экстракт промышленного производства, уменьшив концентрацию в 10 раз от указанного в прописях сред.

Трехсахарный агар с мочевиной по Олькеницкому

3.31. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Железо-глюкозо-лактозный агар с мочевиной

Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Среда для определения L лизин (L орнитин) декарбоксилазы

3.32. Состав:

- L лизин (L орнитин) моногидрохлорид	5,0 г;
- дрожжевой экстракт	3,0 г;
- глюкоза	1,0 г;
- бромтимоловый пурпурный	0,015 г;
- вода	1000 см 3.

Растворяют компоненты. рН раствора после стерилизации (6,80,2) при температуре 25 °C, разливают в пробирки по 5 см ³. Стерилизуют 15 минут при температуре 121 °C.

Цитратная среда Симмонса

3.33. Состав:

- натрий аммоний фосфорнокислый двузамещенный	1,5 г;
- калий фосфорнокислый однозамещенный	1,0 г;
- магний сернокислый	0,2 г;
- цитрат натрия	3,0 г;
- агар	18 - 20 г;
- вода	1000 см 3.

Растворяют компоненты. рН после стерилизации (7,20,1) при температуре 25 °C. Среду стерилизуют в течение 15 минут при температуре 121 °C, после стерилизации добавляют 10 см ³ 0,5 % раствора бромтимолового синего и разливают по 6 - 7 см ³ в стерильные пробирки или по 15 см ³ в чашки Петри. Среду в пробирках скашивают.

Среда для определения ферментации мальтозы

3.34. Состав:

- пептон	0,2 г;
- агар	1,5 г;
- хлорид натрия	0,5 г;
- мальтоза	2,0 г;
- 1,6 % спиртовой или щелочной раствор бромтимолового синего	1,0 см 3;
- вода дистиллированная	до 100 см 3.

РН среды 7,2. Стерилизация при 0,5 атм в течение 15 минут. Разлить в 6 чашек Петри.

Среда Гисса с углеводами (например, лактозой, мальтозой, маннитом, сорбитом, маннитол, сахароза, рамноза, раффиноза, сорбитол, мелибиоза, салицин, ксилоза)

3.35. Среду готовят из сухого препарата по способу, указанному производителем, разливают в стерильные пробирки на высоту 3 - 5 см и стерилизуют при температуре 110 °C в течение 20 минут. Срок хранения не более двух недель.

Среда Клиглера

3.36. Состав:

- пептон	20,0 г;
- натрия хлорид	5,0 г;
- натрия сульфат	0,4 г;
- мясная вода	1000 см 3;
- натрия тиосульфат	0,08 г;
- агар питательный сухой	20,0 г;
- лактоза	10,0 г;
- сахароза	10,0 г;
- глюкоза	1,0 г;
- железо (II) сульфат	0,5 г;
- феноловый красный (0,2 %-й раствор в 50 %-м этаноле)	12 см 3.

В мясную воду добавляют пептон, соли натрия и агар. Смесь кипятят до растворения агара, устанавливают рН 7,2 - 7,4. Вновь кипятят, фильтруют через вату, добавляют растворенное в небольшом количестве воды сернокислое железо, лактозу, сахарозу, глюкозу, индикатор. Среду разливают по 6 - 7 см ³ в пробирки, автоклавируют 15 - 20 минут при 0,5 атм и температуре 112 °C. Среду скашивают, оставляя столбик не менее 2,5 - 3,0 см. Готовая среда оранжево-красного цвета. При образовании сероводорода столбик среды чернеет.

Реактивы для окраски препаратов по Граму

3.37. Карболовый раствор генциана фиолетового готовят следующим образом:

генциана фиолетового	1 г;
ректификованного этилового спирта	10 см 3;
фенола	5 г;

растирают в ступке, добавляя 100 см ³ дистиллированной воды.

Раствор Люголя готовят следующим образом:

йода	1 г;
йодистого калия	2 г.

Растворяют в 300 см ³ дистиллированной воды.

Хранить во флаконе из темного стекла.

Фуксин Циля готовят следующим образом:

основного фуксина	1 г;
спирта этилового ректификованного	10 см 3;
фенола	5 г.

Растирают в ступке, добавляя 100 см ³ дистиллированной воды.

Спиртовой раствор -нафтола

3.38. 5 г -нафтола, имеющего точку плавления 92,5 °C, вносят в мерную колбу вместимостью 100 см ³ и доливают этиловым спиртом с объемной долей 96 % до метки. Раствор применяют свежеприготовленным для определения ацетоина (ацетилметилкарбинола).

Раствор с объемной долей перекиси водорода 3 %

3.39. 10 см ³ пироксида водорода с содержанием основного вещества 30 % переносят в мерную колбу вместимостью 100 см ³, доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор применяется для определения каталазной активности.

Раствор гидроксида калия

3.40. В мерной колбе растворяют 40,0 г гидроксида калия (KOH) в 100 см ³ воды.

Тест Грегерсена

3.41. В капле 3 % водного раствора KOH на предметном стекле эмульгируют бактериальную массу, взятую с плотной среды. После нескольких секунд перемешивания петлей взвесь ослизняется и за петлей тянутся слизистые нити, что указывает на принадлежность испытуемой культуры или колонии к грамотрицательному виду бактерий. У грамположительных бактерий, за редкими исключениями, реакция отрицательна.

Глициновый буфер с рН 1

3.42. Навеску 0,385 г аминоуксусной кислоты растворяют в 100 см ³ дистиллированной воды и получают глицин. К 50 см ³ глицина добавляют 50 см ³ 0,1 N раствора гидроксида натрия и получают глициновый буфер с рН 11,5.

Для приготовления глицинового буфера (рН 1,5 - 1,6) к 38 см ³ глицина добавляют 62 см ³ 0,1 N раствора соляной кислоты.

Насыщенный раствор сульфата аммония

3.43. В 1 дм ³ теплой стерильной дистиллированной воды 30 - 35 °C растворяют 800 г сульфата аммония ((NH ₄) ₂SO ₄). Полученный раствор фильтруют, доводят до рН 7,2 и охлаждают в холодильнике.

0,5 М фосфатный буфер с рН 8,2

3.44. Готовят навески солей: Na ₂НРО ₄*2Н ₂О - 89,0 г (раствор А) и KH ₂PO ₄ - 68,06 г (раствор В). Каждую навеску вносят в отдельную мерную колбу, добавляют дистиллированную воду до объема 1 дм ³ и растворяют соли. Для получения буфера с рН 8,2 смешивают 96,9 см ³ раствора А и 3,1 см ³ раствора В и одним из этих растворов доводят рН буфера до 8,2.

Тест-культуры микроорганизмов

4.1. Для проведения контроля качества бактериальных питательных сред необходимо иметь коллекцию типовых культур, которые могут быть получены из специализированных коллекций (например, бактериофаг (колифаг) MS-2, Escherichia coli штамм K12 F + Str ^R, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Campylobacter lari, Enterococcus faecalis, М17-02 аналогичный штамму М17), типичные по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам, паспортизированные и депонированные в установленном порядке.

Изоляты микроорганизмов, выделенные из клинического материала и используемые для контроля, должны по свойствам соответствовать микроорганизмам признанных национальных и международных коллекций.

Полученные лабораторией музейные тест-штаммы и свежевыделенные культуры хранят при температуре 2 - 8 °C, в лиофилизированном состоянии, на среде хранения или в условиях низких температур с криопротекторами.

Для контроля качества питательных, дифференциальных сред и тестовых наборов используют тест-штаммы микроорганизмов для положительного и отрицательного контроля с типичными биохимическими свойствами, например:

- Escherichia coli 1257, Escherichia coli АТСС 25922 или Escherichia coli АТСС 10536, Klebsiella pneumoniae АТСС 31488 или Klebsiella pneumoniae АТСС 700603 (положительный контроль) и Pseudomonas aeruginosa АТСС 10145 или Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853;

- Enterococcus faecalis 29212 АТСС или Enterococcus faecium 35667 (положительный контроль), Serratia marcescens 43862 (отрицательный контроль) при использовании экспресс тест-набора для определения энтерококков;

- Pseudomonas aeruginosa АТСС 10145 или Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 или Pseudomonas aeruginosa АТСС 15442 (положительный контроль), Escherichia coli 1257, Escherichia coli АТСС 25922 или Escherichia coli АТСС 10536 (отрицательный контроль) при использовании экспресс тест-набора для определения Pseudomonas aeruginosa;

- Candida albicans 24433 АТСС (положительный контроль) и Bacillus cereus ATCC 10876 (отрицательный контроль) при использовании подложек;

- Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 (положительный контроль) Bacillus subtilis ATCC 6633 (отрицательный контроль) при использовании подложек;

- Staphylococcus aureus 906 или Staphylococcus aureus ATCC 6538 (положительный контроль) Escherichia coli 1257, Escherichia coli АТСС 25922 или Escherichia coli АТСС 10536 (отрицательный контроль) при использовании подложек;

- Salmonella enteritidis 5765 или Salmonella enterica ATCC 13311 (положительный контроль) и Pseudomonas aeruginosa АТСС 10145 или Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 или Pseudomonas aeruginosa 15442 (отрицательный контроль) при использовании подложек.