Приложение 2. Растворы для разбавлений и питательные среды

Приложение 2
к МУК 4.2.3963-23

Растворы для разбавлений и питательные среды ¹²

------------------------------

¹²_{Примечание: в лабораториях допускается использовать среды и реактивы (в том числе медицинские и ветеринарные препараты) коммерческие, промышленного производства, лабораторного изготовления с характеристиками не хуже указанных в настоящих МР и разрешенных к применению на территории Российской Федерации.}

------------------------------

Солевой (физиологический) раствор

1.1. В 1 л дистиллированной воды растворяют 8,5 г хлорида натрия, устанавливают рН с расчетом, чтобы после стерилизации рН = (7,00,1). Разливают во флаконы, стерилизуют при температуре 121 °C в течение 15 мин. Разливают мерно непосредственно перед посевом.

Срок хранения - до 1 месяца при комнатной температуре. В укупоренном виде.

Пептонный раствор

1.2. В 1 л дистиллированной воды растворяют при кипячении 10,0 г пептона. Устанавливают рН с расчетом, чтобы после стерилизации рН = (7,00,1). Разливают во флаконы. Стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 мин. Разливают мерно непосредственно перед посевом.

Срок хранения - до 1 месяца при комнатной температуре.

Пептонно-солевой раствор

1.3. В 1 л дистиллированной воды растворяют при кипячении 8,5 г хлорида натрия и 1 г пептона. Устанавливают рН с расчетом, чтобы после стерилизации рН = (7,00,1). Стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 мин. Разливают мерно непосредственно перед посевом.

Срок хранения - до 1 месяца при комнатной температуре.

Вода пептонная забуференная

1.4. Состав:

- пептон	10,0 г
- натрий хлористый	5,0 г
- натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный	9,0 г
- калий фосфорнокислый однозамещенный	1,5 г
- вода дистиллированная	1000 см 3

При нагревании компоненты растворяют в воде; рН после стерилизации (7,00,1) при температуре 25 °C. Разливают среду во флаконы, подходящей вместимости. Стерилизуют в течение 15 мин при температуре 121 °C в автоклаве.

Питательный бульон

1.5. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательный бульон (десятикратный) для определения колифагов готовят путем увеличения в 10 раз навески сухого препарата, указанного на этикетке.

Полужидкий питательный агар

1.6. Полужидкий питательный агар готовят с использованием одной трети навески сухого препарата, в соответствии с инструкцией производителя. Разливают в пробирки и автоклавируют при температуре 121 °C в течение 20 мин.

Питательный агар

1.7. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательный агар не допускается выдерживать в расплавленном состоянии более 8 ч. Оставшийся неиспользованным агар повторному расплавлению не подлежит.

Питательный агар для определения колифагов прямым методом при посеве 20 см ³ пробы на чашку Петри готовят, увеличивая навеску сухого препарата на 10 - 15 % от прописи. Разливают в емкости, автоклавируют при температуре 121 °C в течение 20 мин.

ГРМ-агар

1.8. Готовят и хранят по инструкции, указанной на этикетке производителя.

Глюкозо-пептонная среда

1.9. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Для приготовления концентрированной глюкозо-пептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 см ³ в пробирки и по 10 см ³ во флаконы.

Готовую среду стерилизуют при температуре 112 °C в течение 12 мин.

Лактозо-пептонная среда

1.10. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Для приготовления концентрированной лактозо-пептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 см ³ в пробирки и по 10 см ³ во флаконы.

Готовую среду стерилизуют при температуре 112 °C в течение 12 мин.

Среда Эндо

1.11. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Фуксин-сульфитная среда Эндо

1.12. Основная модификация.

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Если на поверхности среды заметны следы влаги, чашки перед посевом необходимо подсушить. Срок хранения чашек со средой не более 2 - 3 суток в темноте, если производителем не оговорены другие сроки.

1.12.1. Повышение дифференцирующих свойств среды.

Для повышения дифференцирующих свойств среды в готовую и охлажденную до температуры 45 - 50 °C среду перед разливом в чашки допускается прибавлять на 100 мл среды 0,2 мл 5 %-го спиртового раствора основного фуксина. Срок хранения раствора фуксина - не более 1 мес.

1.12.2. Модификация среды с добавлением розоловой кислоты.

В случае роста микрофлоры, не относящейся к бактериям кишечной группы, помимо фуксина, допускается добавление на 100 мл среды Эндо 0,2 мл 5 %-го спиртового раствора розоловой кислоты. Срок хранения раствора розоловой кислоты - не более 1 месяца.

Модификацию среды Эндо с добавлением розоловой кислоты используют только при работе методом мембранной фильтрации.

Среда Эндо с розоловой кислотой

1.13. К среде Эндо, помимо фуксина, допускается добавление на 100 мл среды Эндо 0,2 мл 5 %-го спиртового раствора розоловой кислоты. Ингибирует рост микрофлоры, не относящейся к бактериям кишечной группы. Срок хранения раствора розоловой кислоты - не более 1 месяца.

Лактозный агар с тергитолом-7 и ТТХ

1.14. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Готовую среду охлаждают на водяной бане до 45 - 50 °C и добавляют приготовленного на стерильной дистиллированной воде 5 см ³ 0,05 % водного раствора ТТХ на 100 см ³ основной среды. Хорошо перемешивают и разливают в чашки слоем не менее 5 мм.

Раствор ТТХ и питательная среда устойчивы в течение недели при температуре 2 - 8 °C в защищенном от света месте.

Хромокульт колиформ агар

1.15. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Нагревают на кипящей водяной бане, периодически помешивая, до полного растворения в течение 35 мин. Не автоклавировать, не перегревать. Готовую среду охлаждают до 45 - 50 °C и разливают в чашки Петри.

Питательная среда устойчива в течение 2 недель при температуре 2 - 8 °C в защищенном от света месте. Для предотвращения от высыхания поместить чашки со средой в пластиковые мешки.

Лактозный бульон с борной кислотой

1.16. Растворяют в 1 л дистиллированной воды:

- пептона	10 г;
- калия фосфорнокислого двузамещенного (безводного)	12,2 г;
- калия фосфорнокислого однозамещенного (безводного)	4,1 г;
- борной кислоты 13	3,2 г;
- лактозы	5,0 г.

------------------------------

¹³_{Примечание: каждую новую партию борной кислоты следует испытывать; при выращивании  Е. coli при температуре 44 °С среда дает положительную реакцию - помутнение и газ.}

------------------------------

После растворения всех ингредиентов при нагревании, среду остужают до комнатной температуры и разливают по 5 см ³ в пробирки с поплавками или комочками ваты, стерилизуют при температуре 112 °C в течение 12 мин.

Срок хранения не более 2 недель.

Среда с триптофаном

1.17. Растворяют в 1 л дистиллированной воды:

- ферментативного пептона	10,0 г;
- хлористого натрия	5,0 г;
- триптофана растворяют	1,0 г.

Устанавливают рН - 7,2, разливают в стерильные пробирки и автоклавируют при температуре (1202) °C в течение 20 мин.

Питательная среда для селективного определения колиформных бактерий и Е. coli сухая (ЕС - бульон)

1.18. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу, глюкозу до кислоты и газа и образовывать индол

Полужидкая среда с глюкозой из сухого препарата

2.1. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Срок хранения не более 2 недель при комнатной температуре. В холодильнике не хранить.

Посев производят уколом до дна пробирки. Полужидкие среды позволяют улавливать небольшое количество газа и на ранних стадиях ферментации, что повышает чувствительность метода и скорость получения ответа через 4 - 6 ч.

Триптонный агар с желчью и Х-глюкуронидом

2.2. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательная среда устойчива в течение 4 недель при температуре 2 - 8 °C в защищенном от света месте. Для предотвращения от высыхания поместить чашки со средой в пластиковые мешки.

Триптон-желчный агар (ТЖА)

2.3. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Неселективный триптон-соевый агар (ТСА)

2.4. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Коммерческая среда ЕС-бульон (селективная) для обнаружения и определения количества бактерий E. Coli

2.5. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Среда с хлоридом трифенилтетразола (ТТХ)

2.6. Состав:

- пептон	2,0 г;
- дрожжевой экстракт (из пекарских дрожжей)	15,0 см 3 или сухого 0,3 г;
- двузамещенный фосфат калия	0,2 г;
- ТТХ	0,8 г;
- воды дистиллированной	до 100,0 см 3.

Стерилизация при 0,5 атм. в течение 15 минут.

10 % водный раствор ТТХ в дистиллированной воде.

Щелочно-полимиксиновая среда (ЩЕС)

2.7. Состав (обычная концентрация):

1) раствор 1:
- мясопептонный бульон	70,0 см 3;
- натрий хлористый	0,5 г;
- глюкоза	1,0 г;
- дрожжевой экстракт	2,0 см 3 (или 2 г).
2) раствор 2:
- вода дистиллированная	15,0 см 3;
- натрий углекислый	0,53 г.
3) раствор 3:
- вода дистиллированная	10,0 см 3;
- натрий двууглекислый	0,25 г.

Состав (удвоенная концентрация):

Растворы 1, 2 и 3 стерилизуют раздельно при температуре 112 °C в течение 12 мин. После стерилизации растворы смешивают, проверяют рН 10,0 - 10,2, прибавляют 20000 единиц полимиксина М, 0,5 см ³ 1,6 %-го спиртового раствора бромтимолового синего, разливают в пробирки по 5 см ³.

1) раствор 1:
- мясопептонный бульон	70,0 см 3;
- натрий хлористый	1,0 г;
- глюкоза	2,0 г;
- дрожжевой экстракт	4,0 см 3 (или 4 г).
2) раствор 2:
- вода дистиллированная	15,0 см 3;
- натрий углекислый	1,1 г.
3) раствор 3:
- вода дистиллированная	10,0 см 3;
- натрий двууглекислый	0,5 г.

В среду удвоенной концентрации добавляют 40000 единиц полимиксина М и 1 см ³ бромтимолового синего. Разливают в колбы или флаконы по 10, 50 и 100 см ³ соответственно количеству исследуемой воды.

Молочно-ингибиторная среда (МИС)

2.8. Готовят 2,5 %-й мясопептонный агар. К 85 см ³ готового питательного агара, охлажденного до температуры 45 - 50 °C, добавляют 15 см ³ стерильного обезжиренного (0,5 % жирности) молока, 1,25 см ³ 0,01 %-го водного раствора кристаллического фиолетового, 1 см ³ 2 %-го водного раствора теллурита калия (рН 7,00,2).

Все хорошо смешивают и разливают тонким слоем в чашки Петри.

Азидная среда Сланеца-Бертли

2.9. Сухой питательный агар промышленного производства готовят по указанию на этикетке, 4 г калия фосфорнокислого однозамещенного расплавляют при нагревании в 1000 см ³ дистиллированной воды, устанавливают рН 7,0, разливают мерно в емкости, стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 мин.

Перед употреблением в расплавленный и слегка остуженный агар добавляют из расчета на 100 см ³ среды:

- дрожжевого экстракта	2,0 см 3;
- глюкозы	1,0 г;
- азида натрия	0,04 г.

1 %-го водного раствора 2,-3,-5-трифенил тетразолий хлорида (ТТХ) 1 см ³.

Тщательно смешивают, разливают в чашки по 20 - 25 см ³. Хранят в холодильнике не более 2 недель. Среду можно готовить перед употреблением без стерилизации в автоклаве.

Допускается использование коммерческой среды Сланеца-Бертли.

Питательная среда для выделения энтерококков сухая - энтерококкагар

2.10. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Навеску тщательно размешивают в 1 дм ³ воды дистиллированной, доводят до кипения и кипятят при постоянном помешивании в течение 1 мин, быстро охлаждают до температуры 45 - 50 °C и разливают в чашки Петри.

Минимальное время воздействия высокой температуры при приготовлении среды необходимо из-за наличия в среде ТТХ, который разлагается при нагревании.

Желчь-эскулин-азидный агар

2.11. Приготовление среды проводят из готового препарата в соответствии с инструкцией производителя. После приготовления среду охлаждают, медленно выливают в стерильные чашки Петри слоем 3 - 5 мм и оставляют для остывания на горизонтальной поверхности. Срок хранения - не более 14 сут в защищенном от света месте при температуре (53) °C.

Питательный агар со стрептомицином

2.12. Питательный агар со стрептомицином (или стрептомицина сульфатом для инъекций (англ. Streptomyсini sulfas pro injectionibus)) готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1 см ³ питательного агара, приготовленного по стандартной прописи. Раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 см ³ готовят с использованием стерильной дистиллированной воды с соблюдением правил асептики. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры 45 - 50 °C, вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0,1 см ³ на 10 см ³ питательного агара. Разливают в пробирки для приготовления, скошенного агара.

Срок хранения питательного агара со стрептомицином не более 2 недель. Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.

Желточно-солевой агар (ЖСА)

2.13. Сухой питательный агар по прописи производителя и 65 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 1000 см ³ дистиллированной воды (рН 7,2 - 7,4), разливают мерно в емкости, стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 мин. Перед употреблением в расплавленный и остуженный до 50 - 55 °C солевой агар прибавляют один стерильно приготовленный яичный желток, тщательно смешанный с 50 см ³ физиологического раствора с помощью стеклянных бус, перемешивают и разливают в чашки Петри тонким слоем по 12 - 15 см ³ для подтверждающего этапа или толстым слоем по 20 - 25 см ³ для выращивания на мембранных фильтрах.

Яично-желточно-солевой агар

2.14. 1 дм ³ мясопептонного агара перед анализом расплавляют и растворяют в нем 95 г хлористого натрия, охлаждают до температуры 45 - 50 °C и добавляют 100 см ³ яично-желточной взвеси. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

Чашки хранят в холодильнике не более 5 суток. Применяют для культивирования стафилококков.

Стафилококкагар

2.15. Сухой препарат промышленного производства (стафилококкагар) как солевую основу готовится по способу, указанному на этикетке производителя, с последующим добавлением желточной взвеси.

Среда Байрд-Паркера

2.16. Состав:

- пептон из казеина	10,0 г;
- мясной экстракт	5,0 г;
- экстракт дрожжей	1,0 г;
- пируват натрия	10,0 г;
- глицин	12,0 г;
- хлорид лития	5,0 г;
- агар-агар	15,0 г.

Приготовление: растворить ингредиенты в 0,95 дм ³ воды, автоклавировать при температуре 121 °C в течение 15 минут, охладить до 45 - 50 °C и влить 50 см ³ яично-желтковой эмульсии с теллуритом, при необходимости внести сульфаметазин в количестве 50 мг/дм ³. рН (7,00,2) при температуре 25 °C. Среду разлить в чашки. Чашки имеют молочный отлив и желтовато-коричневый цвет. Хранить при температуре 4 °C до 1 месяца.

Железо-сульфитный агар

2.17. В 1000 см ³ стерильного расплавленного питательного агара добавляют 10,0 г глюкозы, нагревают до растворения, разливают мерно во флаконы, автоклавируют при температуре 112 °C в течение 12 минут (основная среда).

20 %-й раствор сульфита натрия (Na ₂SO ₃) и 8 %-й раствор железа сернокислого закисного (FeSO ₄) или железа хлористого (FeCl ₂) готовят непосредственно перед употреблением в стерильной посуде на стерильной дистиллированной воде.

Раствор сульфита натрия нагревают до полного растворения. Перед выполнением исследования в 100 см ³ расплавленной основной среды вносят 5 см ³ 20 %-го раствора сульфита натрия, перемешивают, затем вносят 1 см ³ 8 %-го раствора сернокислого железа, перемешивают и стерильно разливают в пробирки высоким столбиком 12 - 15 см для работы методом мембранной фильтрации или во флаконы для работы методом прямого посева.

Допускается использование коммерческой среды.

Агар для клостридий (усиленный)

2.18. Состав:

- мясной экстракт	10,0 г;
- декстроза	5,0 г;
- дрожжевой экстракт	3,0 г;
- растворимый крахмал	1,0 г;
- бактериологический агар	12,5 г;
- пептон	10,0 г;
- хлорид натрия	5,0 г;
- ацетат натрия	3,0 г;
- L-цистеина гидрохлорид	0,5 г.

Конечная величина pH (6,80,2) при температуре 25 °C. Развести 50 г среды в 1 литре дистиллированной воды. Хорошо перемешать и нагреть. Часто помешивая, довести до кипения. Кипятить в течение минуты до полного растворения. Разлить в емкости и стерилизовать 15 минут при температуре 121 °C. Охладить до 45 - 50 °C и при необходимости добавить 0,02 г/л полимиксина B в виде стерильного отфильтрованного раствора. Готовая среда имеет светло-янтарный цвет, слегка опалесцирует, должна храниться при температуре 8 - 15 °C.

Модифицированная среда для выделения клостридий

2.19. Состав (на 1 л дистиллированной воды):

- нутриент агар	23 г;
- казеиновый пептон	15 г;
- сульфит натрия	1 г;
- дрожжевой экстракт	10 г;
- сульфат железа	0,5 г;
- декстроза	5 г;
- L-цистеин	0,5 г;
- бриллиантовый зеленый 0,1 %-ный водный раствор	1 см 3.

Агар триптозо-сульфит-циклосериновый

2.20. Основу питательной среды готовят следующим образом: 15,0 г триптозы, 5,0 г ферментативного пептона, 25 см ³ дрожжевого экстракта, 1,0 г безводного тиосульфита натрия, 1,0 г цитрата аммонийного железа, 20,0 г агара растворяют в 1 дм ³ кипящей дистиллированной воды. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °C (7,60,1). Основу среды стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 минут и хранят при температуре (42) °C не более 14 сут.

К 100 см ³ основы, расплавленной и охлажденной до температуры 45 - 50 °C, добавляют непосредственно перед употреблением 1 см ³ раствора массовой концентрацией циклосерина 40 г/дм ³. Допускается при отсутствии триптозы заменять ее равным количеством ферментативного пептона.

Агар сульфит-полимиксин-неомициновый

2.21. Основу питательной среды готовят следующим образом: 17,0 г ферментативного пептона, 15 см ³ дрожжевого экстракта, 5,0 г хлорида натрия, 1,0 г безводного тиосульфита натрия, 1,0 г цитрата аммонийного железа, 12,0 - 15,0 г агара добавляют к 1 дм ³ дистиллированной воды. Смесь, периодически перемешивая, подогревают до кипения и кипятят до полного растворения всех составных частей. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он соответствовал при температуре (251) °C (7,60,1). Стерилизуют при температуре 121 °C в течение 20 минут. Основу среды хранят при температуре (42) °C не более 14 сут.

К 1 дм ³ основы, расплавленной и охлажденной до температуры (45 - 50) °C, непосредственно перед употреблением добавляют 1 см ³ раствора массовой концентрации неомицина сульфата 50 г/дм ³ или 5 см ³ раствора массовой концентрации неомицина сульфата 10 г/дм ³ (50 мкг/см ³ основы среды) и 8 см ³ раствора массовой концентрации полимиксина 2,5 г/дм ³ или 4 см ³ раствора массовой концентрацией полимиксина 5 г/дм ³ (20 мкг/см ³ основы среды).

Среда Мюллера-Кауфмана

2.22. В 500 см ³ исследуемой воды вносят:

- 10 %-го пептона	25 см 3;
- желчных солей	0,5 г;
- кальция углекислого	5,0 г;
- натрия тиосульфата	15,0 г;
- 0,1 %-го водного раствора бриллиантового зеленого	0,5 см 3;
- раствора Люголя	10 см 3.

Для приготовления раствора Люголя в 10 см ³ воды вносят 3,0 г йода кристаллического и 2,5 г калия йодистого.

Селенитовая среда Лейфсона

2.23. Готовят из сухого препарата промышленного производства по указанию на упаковке.

Для приготовления селенитового бульона двойной концентрации увеличивают навеску сухого препарата в два раза на тот же объем дистиллированной воды.

Магниевая среда

2.24. Используют три способа приготовления магниевой среды: среда обычной или двойной концентрации, экспедиционная модификация и среда готовая к применению в соответствии с Инструкцией производителя.

Магниевую среду обычной и двойной концентрации готовят лабораторным способом.

При приготовлении среды обычной и двойной концентрации готовят раздельно растворы А, Б, В по нижеследующей прописи (табл. 2.1):

Таблица 2.1

Растворы	Ингредиенты	Обычная концентрация на 1000 см 3	Удвоенная концентрация на 100 см 3
А	Пептон ферментативный	4,2 г	0,84 г
	Натрий хлористый	7,0 г	1,4 г
	Калий фосфорнокислый однозамещенный	1,5 г	0,3 г
	Дрожжевой экстракт жидкий или сухой	22,0 см 3 5,0 г	4,4 см 3 1,0 г
	Вода дистиллированная	890,0 см 3	89,0 см 3
Б	Магний хлористый кристаллический	36,0 г	7,2 г
	Вода дистиллированная	90,0 см 3	9,0 см 3
В	Бриллиантовый зеленый 0,1 %-й водный раствор	5,0 см 3	1,0 см 3

Твердые фракции среды растворов А и Б вносят в дистиллированную воду, растворяют, кипятят в течение 10 мин. Затем растворы А, Б и В сливают в одну колбу.

Наилучшие результаты дает посев воды в магниевую среду по экспедиционной методике в оригинальной прописи и модификации.

Навески и растворы ингредиентов среды предварительно готовят в расфасованном виде, которые затем вносят в исследуемую воду в соответствии с нижеследующей прописью (табл. 2.2):

Таблица 2.2

Ингредиенты на 500 см 3 пробы воды	На 500 см 3 пробы воды	На 100 см 3 пробы воды
1	2	3
Магний хлористый кристаллический	19,5 г	3,9 г
Натрий хлористый	4,0 г	0,8 г
Калий фосфорнокислый однозамещенный безводный	0,8 г	0,16 г
10 %-й раствор пептона	25,0 см 3	5,0 см 3
Дрожжевой экстракт, приготовленный из пекарских дрожжей (жидкий) или сухой препарат	11,0 см 3 2,5 см 3	2,5 см 3 1,0 г
Бриллиантовый зеленый - 0,1 %-й водный раствор	2,5 см 3	0,5 см 3

Каждую навеску ингредиента вносят последовательно после полного растворения предыдущего в небольшой объем исследуемой воды около 200 - 300 см ³ по одному до полного растворения. После внесения всех ингредиентов в емкость вносят оставшийся объем исследуемой воды и тщательно перемешивают.

С целью ускорения и упрощения посева воды все ингредиенты магниевой среды (кроме дрожжевого экстракта) можно заранее внести в стерильную емкость объемом 500 см ³ и хранить при температуре 2 - 5 °C (в течение 5 - 6 ч происходит самостерилизация смеси). Если плотно закрыть емкость, смесь можно хранить при комнатной температуре в течение 5 - 7 суток. Дополнительная стерилизация не требуется. В день посева на сальмонеллы в каждую емкость с ингредиентами вносят соответствующий объем исследуемой воды, тщательно перемешивают, до полного растворения всех ингредиентов и добавляют дрожжевой экстракт.

Среду готовую к применению используют в соответствии с инструкцией производителя.

Магниевая среда накопления для выделения сальмонелл полевая модификация

2.25. Состав:

- магний хлористый кристаллический	19,5 г;
- натрий хлористый	4,0 г;
- калий фосфорнокислый однозамещенный безводный	0,8 г;
- 10 %-й раствор пептона	25,0 см 3.
Дрожжевой экстракт:
- жидкий из пекарских дрожжей 11,0 см 3 или сухой препарат	2,5 г;
- бриллиантовый зеленый 0,1 %-й водный раствор	2,5 см 3.

Каждый ингредиент (в виде навески или раствора) из указанных выше вносят последовательно в стеклянную емкость, содержащую 500 см ³ анализируемой воды по одному после полного растворения предыдущего.

Допускается использование стерильных емкостей, в которые в условиях стационарной лаборатории внесены сухие ингредиенты и растворы.

Среды в емкости допускается хранить в течение 7 сут.

Питательная среда для сальмонелл РНС

2.26. Состав:

- экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) (ФСП 42-0010-5883-04) или другой, соответствующий требованиям ФСП 42-0010-5883-04	5,0 г;
- калий фосфорнокислый однозамещенный	8,8 г;
- натрия гидроксид	(1,40,1) г;
- водорастворимый бриллиантовый зеленый	0,005 г;
- водорастворимый кристаллический фиолетовый	0,001 г;
- вода очищенная	до 1000 см 3.

Компоненты среды растворяют в воде нагреванием. Среду разливают во флаконы, стерилизуют при температуре 112 °C в течение 15 мин. Питательная среда представляет собой стерильную, прозрачную жидкость зеленого цвета, рН среды от 6,4 до 6,8, аминный азот от 0,05 до 0,1 %, обеспечивает рост тест-штаммов сальмонелл при посеве единичных клеток.

Дифференциально-селективная питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл сухая (ГЕКТОЕНАГАР)

2.27. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Ксилоза лизин дезоксихолатный агар (XLD агар)

2.28. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Дезоксихолат-цитратный агар

2.29. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Тетратионатная среда накопления по Preuss

2.30. К 1000 см ³ мясопептонного бульона добавляют 5 см ³ 0,1 %-го водного раствора кристаллического фиолетового, стерилизуют при температуре 112 °C в течение 12 мин. После охлаждения добавляют 20,0 г тетратионата калия, устанавливают рН 6,5. Среду разливают в стерильные емкости размера, необходимого для последующего посева.

Срок хранения - до одной недели при температуре 4 °C.

Висмут-сульфит агар

2.31. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

До посева чашки со средой выдерживают в холодильнике не менее 24 ч.

Агар с эозиновым метиленовым синим (ЭМС/ среда Левина-ГРМ)

2.32. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Бактоагар Плоскирева

2.33. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Хромогенная дифференциально-диагностическая среда Рамбах-агар для обнаружения сальмонелл

2.34. Среду готовят из сухого препарата в соответствии с инструкцией производителя. Приготовленную и охлажденную до температуры 45 - 50 °C среду после тщательного перемешивания разливают в стерильные чашки Петри. Разлитая среда не должна содержать следов влаги на поверхности. Срок хранения чашек Петри со средой в стерильных светоизолированных упаковках (например, пеналах или обернутыми плотной стерильной бумагой) при температуре 4 - 10 °C - не более 7 суток.

Селективный бульон для бактерий рода Shigella

2.35. Состав:

- гидролизат казеина ферментативный	20,0 г;
- натрий хлористый	5,0 г;
- калий фосфорнокислый двузамещенный	2,0 г;
- калий фосфорнокислый однозамещенный	2,0 г;
- глюкоза	1,0 г;
- твин 80	1,5 г;
- вода	1000 см 3.

Компоненты растворяют в воде нагреванием, устанавливают рН, чтобы после стерилизации он составлял (7,00,2) при температуре 25 °C. Среду разливают во флаконы, стерилизуют при температуре 112 °C в течение 15 мин, охлаждают до температуры 45 - 50 °C и асептически добавляют на 1 дм ³ среды 5 см ³ раствора селенитовой добавки (новобиоцин 55 мг в 5 см ³ стерильной воды) для подавления роста грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий.

Сальмонелла/шигелла агар с дезоксихолатом натрия и хлоридом кальция (SSDC)

2.36. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Хранят в темном месте 1 неделю при температуре (82) °C в пластиковом пакете. Не следует охлаждать до температуры (32) °C, так как в среде образуется осадок и ухудшаются ее характеристики.

Питательные среды обогащения для выделения Pseudomonas aeruginosa

Минеральная среда Бонде нормальной концентрации

3.1. Состав:

- трехзамещенный фосфат натрия	0,28 г;
- фосфат натрий-аммония	0,15 г;
- однозамещенный фосфат калия	0,1 г;
- сульфат магния	0,02 г;
- дистиллированной воды	до 100,0 см 3.

Стерилизация при 1 атм в течение 20 минут.

Непосредственно перед посевом прибавить 2,0 см ³ 0,01 % водного раствора кристаллического фиолетового.

Концентрат среды Бонде.

Все компоненты, кроме воды, добавляют в 10-кратном размере. Концентрат прибавляется к объекту в соотношении 1:10.

Селективно-дифференциальная среда второго этапа - среда "Блеск"

3.2. Состав:

- мясопептонный стерильный агар 2 %	100 см 3;
- молоко нормализованное стерильное	10,0 см 3;
- 10 % водного раствора ТТХ	8,0 см 3;
- L-аргинин гидрохлорид	0,3 г.

В расплавленный МПА прибавить аргинин, раствор ТТХ (самостерилизуется после хранения при комнатной температуре в течение 2 - 3 дней) и стерильное снятое молоко. Все размешать и разлить в 6 - 7 чашек Петри.

При отсутствии мясопептонного агара возможно применение упрощенного варианта среды "блеск":

- вода дистиллированная

100,0 см 3.

Сухой питательный агар по прописи на этикетке.

Стерилизовать при 0,5 атм. в течение 15 минут. Внести: стерильного снятого молока 10,0 см ³ и 10 % водного раствора ТТХ 8,0 см ³. Смешать и разлить в 6 - 7 чашек Петри.

Среда Кинг-А

3.3. Состав:

- пептон	2,0 г;
- агар	1,5 г;
- глицерин	1,0 г;
- сульфат калия	1,0 г;
- хлорид магния	0,14 г;
- вода дистиллированная	до 100 см 3.

РН среды 7,2. Стерилизация при 0,5 атм. в течение 15 минут. Разлить в 6 - 7 чашек Петри.

Среда для определения теста Хью и Лейфсона (окисление, ферментация глюкозы). Модификация в одной пробирке

3.4. Состав:

- пептон ферментативный	2,0 г;
- хлорид натрия	5,0 г;
- глюкоза	5,0 г;
- K 2НРО 4	0,3 г;
- агар-агар	4 - 6 г;
- 1,6 % раствор фенолового красного	2,5 см 3;
- вода дистиллированная	1000 см 3.

После растворения всех ингредиентов на водяной бане, доводят рН до (7,1 - 7,2), стерилизуют при температуре 112 °C в течение 20 минут в автоклаве, разливают в пробирки высотой столбика 6 см (независимо от диаметра пробирки), остужают столбиком.

Питательная среда для селективного выделения псевдомонад сухая (Цетримидная)

3.5. Состав:

- аептон из желатина	20,0 г;
- хлористый магний	1,4 г;
- сульфат калия	10,0 г;
- цетримид	0,3 г;
- агар-агар	13,0 г;
- глицерин	10 см 3.

Растворяют 44,5 г/дм ³ воды, добавляют 10 см ³ глицерина на 1 дм ³ бульона. Дают среде набухнуть в течение 20 - 30 минут. Затем автоклавируют в течение 15 минут при температуре 121 °C, разливают в чашки. рН (7,00,2) при температуре 25 °C. Среда в чашках мутная, светло-коричневая.

Легионелбакагар

3.6. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Компоненты основы среды БУДРАГ (на 1 литр)

3.7. Состав:

- дрожжевой экстракт	10,0 г;
- агар	13,0 г;
- активированный уголь	2,0 г;
- б-кетоглютаровой кислоты калийная соль	1,0 г;
- ACES-буфер, рН 6,9	10,0 г;
- 1 М раствор KOH	40 см 3;
- глицин	3,0 г.
Компоненты ростовой добавки (на 1 литр):
- L-цистеин	0,4 г;
- пирофосфат железа растворимый	0,25 г.
Компоненты селективной добавки (на 1 литр):
- полимиксин В	80 000 ед;
- ванкомицин	5 см 3;
- циклогексимид	80 см 3.

Приготовление кислотного KCI-HCI буфера: к 39 см ³ 0,4 М раствора HCI добавляют 250 см ³ 0,4 М раствора KCI. С помощью 1 М раствора KOH доводят значение рН буфера до 2,2. Хранят в темном флаконе при температуре плюс 4 °C не более 1 месяца.

Приготовление среды: к навеске ACES-буфера добавить 500 см ³ дистиллированной воды и выдержать на водяной бане при температуре 50 °C, помешивая до полного растворения. К 440 см ³ дистиллированной воды добавить 40 см ³ 1 М раствора KOH.

Оба раствора осторожно смешать и полученным раствором залить смесь навесок агара, дрожжевого экстракта, активированного угля, калийной соли б-кетаглютаровой кислоты и глицина. Смесь выдержать на водяной бане при температуре 50 °C, осторожно помешивая до полного растворения всех компонентов. Среду автоклавируют при температуре 121 °C в течение 15 минут.

После стерилизации среду охлаждают до 50 °C и добавляют с соблюдением правил асептики компоненты ростовой и селективной добавки.

Каждую навеску L-цистеина и пирофосфата железа растворимого вносят в 10 см ³ дистиллированной воды, стерилизуют фильтрацией через мембранный фильтр и добавляют в среду.

Концентрированные растворы препаратов (селективные добавки также добавляют в среду до требуемой конечной концентрации).

РН готовой среды (6,950,02). Среду разливают в стерильные чашки Петри по 25 см ³ и подсушивают в термостате при температуре 37 °C в течение ч. Готовая среда имеет характерный черно-серый цвет.

В качестве контрольной среды, не поддерживающей рост легионелл, используют среду Будраг без добавления селективной и ростовой добавки. Для пересева колоний легионелл и дальнейшего культивирования, используют среду Будраг с ростовой, но без селективной добавки.

Селективный агар Престона

3.8. Состав основы среды:

- пептон	10,0 г;
- мясной экстракт	10,0 г;
- натрия хлорид	5,0 г;
- агар-агар	12,0 г.

Вода дистиллированная 1000,0 см ³ рН (при температуре 25 °C (7,50,2)).

Растворить основные компоненты в дистиллированной воде. При необходимости довести до кипения для полного растворения частиц. Установить рН (7,50,2) с помощью 0,1 н HCl или 0,1 н NaOH. Стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин. Остудить до 45 - 50 °C.

Приготовление полной среды: перед использованием в 1000 см ³ расплавленного и остуженного до 45 - 50 °C агара асептически добавить 70 см ³ стерильной дефибринированной крови барана; растворенное в 50 %-м растворе ацетона содержимое двух флакончиков с добавкой антибиотиков для кампилобактерий IV (по Престону) или I (по Блейзер-Вонг), или растворенное в 50 % растворе этанола содержимое двух флакончиков с селективной ростовой добавкой для кампилобактерий, или 4 см ³ аэротолерантной добавки, тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри слоем 4 - 5 мм.

Селективные бульоны Престона, Дойла, Мюллера-Хинтона

3.9. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательная среда для культивирования кампилобактерий, сухая - кампилобакагар

3.10. 40 г сухой среды размешать в 1 л дистиллированной воды, довести до кипения и кипятить 2 - 3 минуты до полного растворения.

Среду разлить по 400 см ³ в колбы и стерилизовать автоклавированием 20 минут при температуре 121 °C. В остуженную до температуры 50 - 55 °C питательную основу среды вносят FBP-добавки для повышения аэротолерантности и 20 см ³ бараньей или донорской крови и разливают в чашки Петри по 15 - 20 см ³. Для придания среде селективных свойств используют селективные смеси.

FBP-добавки (указанное количество добавок рассчитано на 1 дм ³ питательной среды):

- железа сульфат II	0,25 г;
- натрий пиросернистокислый (метабисульфит)	0,25 г;
- натрий пировинограднокислый (пируват)	0,25 г.

Навески солей внести в сухую стерильную пробирку, добавить 5 см ³ стерильной дистиллированной воды, периодически встряхивать в течение 15 - 20 минут. Приготовленный раствор имеет оливковый цвет, не подлежит хранению и должен быть использован в день приготовления.

Бульон, содержащий пептон, сорбит, желчные соли (PSB)

3.11. Состав:

- ферментативный гидролизат казеина	5,0 г;
- сорбит	10,0 г;
- натрий хлорид	5,0 г;
- натрий фосфорнокислый двузамещенный	8,23 г;
- натрий фосфорнокислый однозамещенный	1,2 г;
- желчные соли	1,5 г;
- вода дистиллированная	1000 см 3.

Растворяют компоненты в воде, разливают необходимый объем в колбы, стерилизуют 15 мин при температуре 121 °C. После стерилизации рН = (7,60,2) при температуре 25 °C.

Агар МакКонки-ГРМ

3.12. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкции производителя.

Питательный бульон для выделения листерий сухой (ПБЛ-1)

3.13. Готовят из сухой питательной среды промышленного производства согласно инструкц