Приложение 5. Определение иммуногенной активности вакцинного штамма сибиреязвенного микроба

Приложение 5

Определение
иммуногенной активности вакцинного штамма сибиреязвенного микроба

1. Определение индекса иммунитета (ИИ) для морских свинок.

Количественная оценка иммуногенности испытуемого штамма в опытах на морских свинках проводится в сравнении с эталонным вакцинным штаммом СТИ-1 по индексу иммунитета.

Индекс иммунитета представляет собой частное от деления величины LDso заражающей культуры для вакцинированных свинок на величину LDso такой же культуры для контрольных свинок.

Для определения индекса иммунитета по 60 морских свинок вакцинируют однократно подкожно испытуемой и эталонной культурами, в дозе 5·10 ⁷ спор, однократно подкожно, в объеме 1 мл. Через 21 день вакцинированных морских свинок заражают подкожно введением тест-заражающей культуры сибиреязвенного микроба 71/12 в дозах 10 ⁹, 10 ⁸, 10 ⁷, 10 ⁶ спор и вирулентным штаммом сибиреязвенного микроба в дозах 10, 10 ², 10 ³, 10 ⁴ по 5 - 6 вакцинированных морских свинок на каждую заражающую дозу каждого штамма. Одновременно равноценные группы свинок, не подвергшихся вакцинации, заражают теми же заражающими штаммами. Штамм 71/12 в дозах: 10 ⁵, 10 ⁴, 10 ³ и 10 ² спор, так же по 5 - 6 животных на дозу. Наблюдения за зараженными животными ведут 10 дней. Затем определяют величины LDso заражающей культуры для группы вакцинированных и для группы контрольных морских свинок раздельно.

2. В опытах на кроликах иммуногенность испытуемого сибиреязвенного штамма оценивают путем заражения вакцинированных животных только высоковирулентным штаммом возбудителя сибирской язвы.

По 10 кроликов массой 2 - 2,5 кг, породы "шиншилла", иммунизируют подкожно по 5·10 ⁷ спор в объеме 1 мл испытуемого и эталонного вакцинного штаммов. Спустя 3 недели кроликов заражают. Заражающая доза для вакцинированных кроликов и для 3 контрольных, невакцинированных, должна составлять 50 LDso тест-заражающей вирулентной споровой культуры. Вирулентную культуру титруют непосредственно перед заражением на той же партии животных. За зараженными кроликами наблюдают 10 дней.

3. Количественную оценку иммуногенности испытуемого штамма в опытах на кроликах проводят путем определения величины среднеэффективной дозы - ЕД50. 4 группы кроликов, по 4 животных в каждой группе, вакцинируют подкожно споровой культурой испытуемого и контрольного штаммов дозами: 2,5·10 ⁸, 2,5·10 ⁷, 2,5·10 ⁶, 2,5·10 ⁵ спор. Через 3 недели после вакцинации всех кроликов, включая 3 контрольных кроликов, заражают высоковирулентной споровой культурой возбудителя сибирской язвы подкожно, в дозе 10 смертельных доз (Del). Результаты опыта учитывают через 10 дней после заражения. По выживаемости вакцинированных кроликов вычисляют величины ЕД50 испытуемого штамма и контрольного вакцинного штаммов СТИ-1.

Опыт учитывают при условии гибели всех контрольных кроликов сроки до 4 суток после заражения.

4. Для оценки иммуногенности испытуемого штамма в опытах на овцах берут животных в возрасте 1 - 1,5 года из стада, не подвергавшегося вакцинации против сибирской язвы. Не менее чем 10 овцам вводят под кожу испытуемый штамм в дозе 1-1,5·10 ⁷ спор в объеме 1 мл. Для этого опыта могут быть использованы овцы из опыта по оценке безвредности вакцинного штамма. Такую же группу овец иммунизируют эталонным вакцинным штаммом СТИ в тех же дозах.

Через 20 - 30 дней вакцинированных овец и трех контрольных непривитых заражают внутрикожно 10 Del высоковирулентной сибиреязвенной споровой культуры в объеме 0,2 мл. Смертельную дозу споровой сибиреязвенной культуры определяют непосредственно перед опытом титрованием споровой взвеси на 6 - 9 овцах из того же невакцинированного стада, что и подопытные животные. Наблюдение за зараженными животными ведут 10 дней. После заражения все контрольные, невакцинированные овцы должны погибнуть от сибирской язвы. Специфический характер гибели невакцинированных и вакцинированных овец должен быть подтвержден положительной бактериоскопией мазков и положительным результатом посева крови, взятой из надреза уха трупа.