Приложение В (справочное). Методы сбора биологического материала животных разных видов и размеров

Приложение В
(справочное)

Методы сбора биологического материала животных разных видов и размеров

Таблица В.1 - Методы обездвиживания для различных видов животных

Животное	Пример	Методы обездвиживания
Мелкие животные	Мыши	Ручные или при помощи соответствующих удерживающих устройств (например, фиксатор в виде туннеля)
Средние или крупные домашние животные	Сельскохозяйственные животные, собаки, кошки, домашняя птица, рыба	Физические (например, удержание в безопасном положении и сохранение неподвижности донора)
Дикие животные	Тигр, бегемот, лось, дикий кабан, питон, форель	Физические или химические (например, анестезия), по мере необходимости

Таблица В.2 - Примеры сбора твердых тканей

Вид животного	Метод сбора
Беспозвоночные	Методы сбора могут отличаться в зависимости от таксона и этапа жизни животного. Для сбора образцов твердых тканей беспозвоночных микроскопического размера требуется микроскоп. При необходимости паразита(ов) следует изолировать от хозяина до процедуры сбора. Микроскопических или клональных беспозвоночных собирают в один контейнер и рассматривают как единый образец для обеспечения достаточного количества биологического материала. Сбор биологического материала у беспозвоночных может потребовать использования анальгетиков и анестетиков
Мелкие позвоночные	Допускается использовать соответствующие инструменты (например, острые ножницы или скальпели). Для сбора биологического материала (например, проколом уха) у мелких позвоночных допускается использовать анальгетики и/или анестетики
Позвоночные среднего и крупного размера	При сборе биопсии кожи следует удалить волосы (например, посредством бритья) или перья (например, посредством выщипывания) с анатомической области сбора биологического материала. Эту область необходимо промыть стерильным изотоническим раствором, продезинфицировать (например, с помощью 70 %-ного спирта) и повторно промыть стерильным изотоническим раствором. В зависимости от вида донора следует выбрать подходящий инструмент для проведения биопсии кожи. Допускается проводить пункционную биопсию глубиной от 3 до 5 мм. После процедуры область сбора биологического материала необходимо соответствующим образом зашить или перевязать. Сбор биологического материала у средних и крупных позвоночных может потребовать применения анальгетиков и анестетиков

Таблица В.3 - Примеры выбранных методов сбора крови

Место сбора крови	Метод сбора крови		Типы доноров
	Особенности донора и подготовка	Метод
Ухо	Рекомендуемый метод сбора для некоторых наземных млекопитающих, например см. [20]	Для проведения процедуры сбора крови следует использовать стерильную иглу, диаметр которой выбирают в соответствии с диаметром пунктируемой вены для обеспечения быстрого сбора крови без разрушения вены и образования гематомы. Во избежание контаминации образца иглы для сбора крови всегда должны быть одноразовыми. В зависимости от вида животного и ожидаемой скорости кровотока может потребоваться предварительное промывание шприца стерильным раствором противосвертывающего средства во избежание свертывания крови во время процедуры. Кровь следует собирать медленно, чтобы животное не испытывало шок, а также для предотвращения коллапса вены или разрушения клеток крови. Область сбора крови необходимо зажать в течение примерно 30 с после извлечения иглы, во избежание образования гематомы и дальнейшей боли для животного. Следует проверить имеется ли наружное или подкожное кровотечение у животного	Кролик, свинья
Хвост	Для проведения процедуры необходимо встать позади донора и держать хвост на единой вертикальной линии с телом, затем собрать кровь из вены, расположенной вентрально * от хвостовых позвонков. При этом следует соблюдать осторожность для предотвращения потери хвоста у тех видов животных, которые способны к автотомии хвоста		Рептилии, амфибии, рыбы, морские млекопитающие, мелкие грызуны, крупный рогатый скот
Яремная ямка	Для проведения процедуры необходимо зафиксировать голову донора. Затем место сбора крови дезинфицируют. Для расширения кровеносных сосудов необходимо надавить на яремную ямку		Овцы, крупный рогатый скот, мелкие млекопитающие, лошади, птицы
Головная или подкожная вена	Для сбора крови допускается также использовать головную, латеральную или медиальную подкожные вены. Для проведения процедуры с использованием этого метода допускается использовать анестезию или седацию		Приматы, собаки, кошки и мелкие грызуны
Вена крыла или вена ноги	Допускается выбрать небольшую подкожную вену на уровне плечевой кости или медиальную метатарзальную вену		Все птицы
Подъязычная вена	Подходит для сбора больших объемов крови грызунов (например, от 0,2 до 1 мл) с частыми интервалами по времени		Грызуны
Коготь	Допускается использовать обрезание когтей ** для сбора небольших объемов крови, что предполагает доступ к зародышевой васкулярной части когтя		Позвоночные

-----------------------------

^* Положение хвостовых вен следует определить заранее исходя из анатомии конкретного животного.

^** Обрезание когтя следует проводить при необходимости комплексных исследований (например, дополнительная биопсия) с применением анестезии. Если целью является только сбор крови, предпочтительны другие места сбора.

-----------------------------

Таблица В.4 - Примеры методов сбора мочи

Метод сбора мочи	Подробная информация
Цистоцентез	Для проведения процедуры с использованием этого метода донор может быть анестезирован и обездвижен. После стерильной обработки области пункции необходимо стабилизировать мочевой пузырь и осторожно ввести иглу и аспирировать мочу
Катетеризация	Для проведения процедуры с использованием этого метода донор может быть анестезирован и обездвижен. После стерильной обработки области катетеризации необходимо вставить катетер и дренировать мочу
Ручное сдавливание	Этот метод подходит для некоторых видов доноров (например, собак, кошек, кроликов). Необходимо оказывать достаточное давление, чтобы расслабить сфинктер мочевого пузыря и обеспечить выделение мочи

Таблица В.5 - Примеры методов сбора молока у жвачных животных и мелких млекопитающих

Вид животного	Метод сбора молока
Жвачные животные	Область сбора молока необходимо очистить. Для сбора молока у тех видов животных, которых, как правило, не доят, необходимо допустить детенышей к присасыванию и кормлению на несколько минут, чтобы стимулировать выделение молока и облегчить процедуру последующего сбора материала. Сбор молока проводят в середине цикла кормления с помощью отсоса. Собранное молоко помещают в стерильные, герметичные контейнеры
Мелкие млекопитающие	При выборе донора необходимо учитывать размер помета для обеспечения достаточного количества молока для детенышей (например, у донора должно быть не более шести детенышей, если это возможно). Оптимальное время для сбора молока - от 8 до 12 дней после родов. Перед проведением процедуры при необходимости следует обеспечить животному возможность накопить достаточное количество молока, отделив самку от детенышей. Если для увеличения удоя используют экзогенный окситоцин, то необходимо определить его оптимальную дозу. Таких доноров, как мыши, перед проведением процедуры сбора молока следует анестезировать. Когда окситоцин начинает действовать, молоко может быть собрано вручную путем сцеживания при помощи большого и указательного пальцев для массажа и сдавливания тканей молочной железы, пока у основания соска не начнет образовываться видимая струйка молока. Молоко допускается собирать или сцеживать с помощью вакуумного устройства (например, резиновой отсасывающей колбы, соединенной с пипеткой)

Таблица В.6 - Примеры методов сбора других образцов

Тип биологического материала	Метод сбора
Перья	Для проведения процедуры необходимо определить область сбора биологического материала, затем зажать чистым пинцетом стержень пера близко к коже и потянуть в направлении, соответствующем направлению роста пера. Перья также могут быть собраны путем препарирования, для включения дермальных сосочков, под анестезией или после смерти, когда это необходимо
Чешуя	Для обеспечения благополучия донора необходимо минимизировать время проведения процедуры сбора биологического материала. Сбор чешуи у рептилий допускается проводить хирургическим путем под общей анестезией. Для хранения или транспортирования чешуи допускается использование предварительно промаркированных конвертов и фильтровальной бумаги, чтобы чешуйки не сворачивались