Приложение 2. Приготовление сред и растворов

Приложение 2
к МУК 4.2.4064-24

Приготовление сред и растворов

1. Фосфатно-солевой буферный раствор, pH 7,2 - 7,4

1.1. Допускается применение готовых сред, растворов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации в установленном порядке ⁶¹.

1.2. Неполный раствор ФСБ, не содержащий ионы кальция или магния, можно использовать для отмывания клеток.

1.3. Приготовление раствора А (неполный раствор ФСБ):

Состав: NaCl 8,0 г, КСl 0,2 г, Na ₂HPO ₄ 1,15 г, КН ₂РО ₄ 0,2 г.

Ингредиенты растворяют в дистиллированной воде, добавляют 2 мл 0,4 % фенолового красного - индикатора pH, доводят до 800 мл и автоклавируют при 0,7 атм в течение 15 минут.

1.4. Полный раствор ФСБ используется для приготовления экстрактов проб и для разведения вирусов, присутствие ионов Са и Mg стабилизирует вирусы (полиовирус и НПЭВ).

1.5. Приготовление раствора В:

MgCl ₂6H ₂O 0,10 г растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Автоклавируют при 0,7 атм в течение 15 минут.

1.6. Приготовление раствора С:

CaCl ₂ 0,10 г растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Автоклавируют при 0,7 атм в течение 15 минут.

1.7. Рабочий раствор полного ФСБ:

К 8 частям раствора А добавляют 1 часть раствора В и 1 часть раствора С. Допускается использование таблетированной формы 0,01 М раствора ФСБ pH 7,400,2.

2. Среда для транспортирования вирусов

2.1. Состоит из основного солевого раствора Хэнкса, доведенного до pH 7,4 буфером HEPES с 0,2 % бычьего сывороточного альбумина. В среду добавляют антибиотики - пенициллин (100 ЕД/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл) (или гентамицин из расчета 30 - 50 мкг/мл) и феноловый красный в качестве индикатора. Среду разливают по 2,5 мл в надежно закрытые флаконы, хранят при температуре от 0 °C до плюс 8 °C в течение 4-6 недель.

2.2. Основной солевой раствор Хэнкса может быть заменен средой для культур клеток. В исключительных случаях в качестве транспортировочной среды можно использовать стерильный 0,9 % раствор NaCl.

------------------------------

⁶¹ Часть 4 статьи 38 Федерального закона от 21.11.2011 N 323-ФЗ; постановление Правительства Российской Федерации от 27.12.2012 N 1416.

------------------------------